Веб-сайт: Nsndepot.com

Категория : Используйте слова в предложении

Микросхема

Перекрестная ссылка Mil Spec serpentinegallery.org

7 часов назад Mil Spec перекрестная ссылка MILSPEC перекрестная ссылка greenlitecable com — Перекрестная ссылка MILSPEC www greenlitecable com MIL SPEC SAE — 28 апреля 2019 г. — Необходимо найти микросхему , номер детали Попробуйте наш онлайн Стандарт Перекрестная ссылка на микросхему Хотите получать уведомления о предлагаемых изменениях в Стандарте

Сайт: Serpentinegallery.org

Категория : Используйте слова в предложении

Mil, Milspec, Microcircuit

5962012472999, 5962012472999, D8085AC, UPD8085AC КУПИТЬ

2 часа назад 5962 Электронные микросхемы> 5962-01-247-2999 5962-01-247-2999, 5962012472999 Запрос информации NSN для предложения

Веб-сайт: Csgparts.com

Категория : Используйте слова в предложении

Микросхема, модуль, микросхемы

Код CAGE 49956 из каталога запчастей NSN

4 часа назад Код коммерческого и государственного юридического лица 49956 относится к компании-изготовителю Raytheon.Компания Jet Parts 360, которой владеет и управляет ASAP Semiconductor, распространяет различные детали от компании Raytheon, включая 0000-04-0322, 0000-04-0323, 0000-05-0038, 0000-06-0200, 0000-07-0002. ASAP может пересечь — код CAGE с NSN и номерами деталей, чтобы гарантировать, что вы получите точную часть…

Веб-сайт: Jetparts360.com

Категория : Использование в предложении

Производитель, несколько

В центре внимания: нейронные микросхемы Oxford Medicine

6 часов назад С момента появления современной нейробиологии в конце девятнадцатого века основное внимание уделялось моделям взаимосвязей между различными областями мозга.Поколения студентов-медиков запомнили длинные пути аксонов, которые проходят в спинном мозге , передают сенсорные сигналы в мозг и двигательные сигналы вниз для управления движениями.

Веб-сайт: Oxfordmedicine.com

Категория : Используйте слова в предложении

Современный, медицинский, запомненный, двигатель, движения

Изучите код CAGE 19645 от Data Device Corporation

2 часа назад Вам нужны детали NSN из CAGE Code 19645? Just Parts Unlimited, принадлежащая и управляемая ASAP Semiconductor, состоит из 6 миллиардов деталей, таких как 008A1, 1-578, 100001, 1001, 10180 ( Microcircuit Linear, Socket Plug In Electronic Compon, Приемник адаптера, узел печатной платы, микросхема , цифровая линейная ) для Data Device Corporation (код CAGE 19645).Наша цель ASAP — упростить процесс приобретения запчастей.

Веб-сайт: Justpartsunlimited.com

Категория : Использование в предложении

Микросхема, Сделайте

контрастной ламинарной связности между затылочной и лобной областями

Некоторые из методов, использованных в этом исследовании, имеют были подробно описаны в другом месте, включая хирургическую подготовку, экспериментальные условия, сбор данных, выравнивание глубины и оценку угла электрода (Godlove et al.2014; Maier et al. 2010).

Хирургическая подготовка.

В этом исследовании использовались четыре обезьяны. Две обезьяны использовались для сбора данных из области V1 ( обезьян V1-b и V1-h , Macaca radiata ; самец 7,0 кг, самка 7,2 кг), а две разные обезьяны использовались для сбора данных из SEF ( обезьяна SEF-e , M. radiata самец 8,8 кг; обезьяна SEF-x , M. mulatta самка 6,0 кг). Все процедуры соответствовали правилам, установленным Министерством сельского хозяйства США (USDA), Управлением по защите лабораторных животных (OWLA) и Ассоциацией по оценке и аккредитации ухода за лабораторными животными (AAALAC) и одобрены Институтом по уходу за животными Университета Вандербильта. и Комитет по использованию (IACUC).

Сбор данных.

Хотя записи в V1 и SEF проводились в разных лабораториях, методы были во многом схожими. Во время каждой экспериментальной сессии обезьяны сидели на сделанном на заказ стуле для приматов, сковав голову. Стул располагался на 73 см перед 27-дюймовым. TFT-монитор (Asus VG278H) для записей V1 и 45 см перед 21-дюймовым. ЭЛТ-монитор (Dell P1130) для записей SEF.

Данные были собраны с помощью 24-канальной линейной матрицы микроэлектродов (Plexon U-Probe, Plexon, Dallas, TX) с межэлектродным расстоянием 100 мкм (записи V1) или 150 мкм (записи SEF).Диапазон измерения импеданса для всех каналов составлял 0,3–0,5 МОм на частоте 1 кГц. После введения линейной матрицы микроэлектродов в целевую камеру на желаемой глубине мы ждали 1–4 часа, пока записанные данные не показали, что электрод достиг стабильного положения в коре головного мозга. После того, как электрод стабилизировался, мы записали 7–60 минут LFP в состоянии покоя в почти полной темноте с выключенным монитором. Внеклеточные напряжения измеряли во времени относительно стержня электрода. Для записей V1 данные были усилены и отфильтрованы в диапазоне 0.3 Гц – 7,5 кГц, оцифрованы с частотой 30 кГц и сохранены в системе Blackrock Microsystems Cerebus (Солт-Лейк-Сити, Юта). V1 LFP был извлечен в автономном режиме путем фильтрации широкополосных данных между 0,5 Гц и 500 Гц и децимации с коэффициентом 30, в результате чего была получена частота дискретизации 1 кГц. Для записей SEF все данные передавались с помощью системы Plexon MAP (Plexon). Данные SEF LFP были вычислены с помощью полосовой фильтрации от 0,2 до 300 Гц и усиления с коэффициентом усиления 1000 с последующей оцифровкой на частоте 1 кГц.

Условия эксперимента.

Основное внимание в этом исследовании уделяется данным, собранным в состоянии покоя. Однако каждый день мы также представляли полноэкранные визуальные вспышки, чтобы оценить глубину электрода в коре головного мозга (см. Размещение ламинарных электродов ). Для V1 импульс мигающего белого света создавался с помощью MonkeyLogic 1.2 (Asaad and Eskandar 2008) в MATLAB 2011b (32-разрядная версия), работающем на ПК с Windows 7 (64-разрядная версия) с использованием графической платы NVIDIA GeForce GTX 680. Стимул заполнил весь экран (45 ° × 27 °).В этой парадигме пассивного просмотра животному предъявляли периодические 50-миллисекундные вспышки белого света (яркость 74,7 кд / м ² в цветовом пространстве CIE), за каждой из которых следовали черные пробелы длительностью 1 с (0,470 кд / м ^{). 2} ) на 20 мин. Для сеансов SEF, когда взгляд обезьяны падал в пределах 11 ° от центра ЭЛТ-монитора, белый квадрат (34,8 кд / м ² , 14,3 мс при 70 Гц) был представлен для одного кадра (14,3 мс) в центральной части экрана. область ЭЛТ-монитора (соответствует центральным 40 ° × 36 ° поля зрения), после чего следует 500 мс пустого черного экрана (0.1 кд / м ² ) до тех пор, пока взгляд обезьяны оставался в этом центральном окне. Стимулирующая презентация была представлена ​​блоками по 100–200 презентаций. Мгновенное представление и мониторинг положения глаз выполнялись с помощью специальных компьютеров (TEMPO, Reflective Computing, Олимпия, Вашингтон; EyeLink, SR Research, Миссиссауга, Онтарио, Канада). Время появления световых вспышек измерялось фотодиодом, установленным напротив монитора.

Ламинарная установка электродов.

Для этих экспериментов требовалось точное ламинарное расположение каналов электродов.Это было достигнуто с помощью нескольких шагов, проверок и тестов ().

Размещение ламинарных электродов. A : анатомическое МР-изображение первичной зрительной коры (V1) после удаления электрода, обнаруживающее следы проникновения. Видно, что имплантированная записывающая камера расширяется каудально. B : увеличенное изображение МРТ V1, показывающее 2 соседние параллельные следы проникновения электрода. Обратите внимание, что МРТ-изображение не показывает напрямую кортикальное поражение, а вместо этого показывает большее искажение магнитного поля (артефакт восприимчивости), вызванное спинномозговой жидкостью, попавшей в дорожку. C : анатомическое МР-изображение дополнительного поля глаза (SEF). D : увеличенное изображение области, очерченной в C . КТ-сканирование линейной матрицы микроэлектродов внутри записывающей камеры (синяя линия) регистрировалось вместе с МРТ. После того, как границы между серым / белым веществом и серым веществом / черепом были нарисованы вручную (зеленые линии), автоматизированный алгоритм определил перпендикулярные линии вдоль границ (тонкие желтые линии). Обратите внимание на перпендикулярность электрода к кортикальной поверхности. E : запись физиологических сигналов при установке электродов. Между последовательными записями электрод выдвигался на ~ 500 мкм. Обратите внимание на улучшение электрокардиограммы (красные линии) и нейронных данных 1 / f (синие линии). F : схематическое изображение конфигурации электродов. Потенциалы локального поля (LFP) регистрировались одновременно через слои V1 или SEF с помощью линейной многоэлектродной матрицы. Расположение каждого канала электрода оценивалось по визуально вызванной плотности источника тока (CSD) для каждого сеанса, которая также использовалась для выравнивания данных по глубине между сеансами.Общие средние визуально вызванные CSD показаны рядом с участками Ниссля V1 и SEF.

1 ) Матрицы линейных микроэлектродов вставлялись медленно. После проникновения в твердую мозговую оболочку глубина электродного массива в коре (обычно всего несколько сотен микрометров) была определена путем сопоставления профиля шума 1 / f ^α (розовый) нейронной LFP на каналах матрицы в нейропиле от Профиль гауссовского шума на каналах вне мозга (). Массив каналов никогда не был полностью продвинут в кору, чтобы определить глубину коркового входа.Если для укрепления электрода во время проникновения использовалась направляющая трубка, она убиралась после того, как матрица входила в мозг, чтобы гарантировать отсутствие закупорки каналов. Обратите внимание, что проникновение через твердую мозговую оболочку с помощью направляющей трубки не производилось.

2 ) Различие между каналами внутри и вне неокортекса было подтверждено наличием спонтанной и визуально вызванной одиночной и множественной импульсной активности.

3 ) Сходящиеся доказательства глубины массива были получены из ламинарного профиля мощности гамма-излучения LFP (40–80 Гц), которая количественно ослабляется на каналах вне коры.Гамма-мощность обычно увеличивается в средних слоях и уменьшается в нижних слоях как в V1 (Майер и др., 2010; Смит и др., 2013; Xing и др., 2012), так и в SEF (Годлов и др., 2014).

4 ) Дальнейшие сходящиеся доказательства глубины массива в V1 были получены из четкого разделения когерентности LFP между L4C и L5 (Maier et al. 2010).

5 ) Дальнейшие сходящиеся доказательства глубины массива в SEF были получены из ламинарного профиля ширины спайков, соответствующего гистологическому распределению пирамидных клеток и интернейронов (Godlove et al.2014).

6 ). Дальнейшее сходящееся свидетельство глубины массива было предоставлено характерным ламинарным профилем визуально вызванной CSD в V1 (Hansen et al. 2012; Kajikawa and Schroeder 2011; Schroeder et al. 1998; Self et al. 2013) и в SEF (Godlove et al.2014) (). Этот подход подробно описан в следующем разделе.

7 ) Еще одно сходящееся свидетельство близости к пиальной поверхности было отмечено обычно наблюдаемым сигналом электрокардиограммы (Godlove et al.2014) ().

8 ) Эти нейрофизиологические критерии были дополнены несколькими методами визуализации для проверки глубины проникновения кортикального слоя и ортогональности электрода к кортикальной поверхности с помощью МРТ высокого разрешения (Maier et al. 2008) и комбинации компьютерной томографии и МРТ. (Godlove et al. 2014) (, A – D ).

Предыдущая работа установила, что аналогичные критерии соответствия глубины проникновения и различия ламинарных компартментов соответствуют положению преднамеренно размещенных электролитических поражений при проверке на гистологических срезах (Schroeder et al.1998).

Межсессионное выравнивание ламинарных данных.

Каждый сеанс записи приводил к изменяющемуся во времени напряжению на каждом из 24 каналов электродов. Чтобы усреднить данные, согласованные для кортикальной глубины массива по сеансам, мы использовали CSD-анализ визуальных реакций на короткие вспышки света (Maier et al. 2010;). После построения LFP, связанных с событием, запуска по началу каждой вспышки и усреднения по выборкам, мы вычислили вторую пространственную производную, определяемую трехточечной формулой:

CSD = −X (t, c − z) −2X (t, c) + X (t, c + z) z2

, где X — внеклеточное напряжение, зарегистрированное в микровольтах в момент времени t от канал электрода в позиции c и z — межканальное расстояние между электродами (100 мкм для записей V1 и 150 мкм для записей SEF) (Nicholson and Freeman 1975).Чтобы преобразовать эту меру в единицы силы тока на единицу объема, мы умножили результат на оценку проводимости коры головного мозга, 0,4 См / м (Logothetis et al. 2007).

Расположение гранулярных L4C в V1 уникально характеризуется ранним стоком тока, отражающим возбуждающие постсинаптические потенциалы, производимые активацией коленчатого тела (Mitzdorf and Singer 1979). Мы идентифицировали канал, расположенный в нижней части этого начального стока тока, обычно на 0,8–1,3 мкм ниже твердой мозговой оболочки, и выровняли глубины массива по сеансам в этой контрольной точке (Maier et al.2010). Данные из SEF были согласованы с автоматизированным подходом, который находит оптимальные оценки глубины путем минимизации суммированных различий между каждым профилем CSD в наборе данных (Godlove et al. 2014).

Анализ данных.

Анализ данных проводился в MATLAB (R2013a, MathWorks, Natick, MA) с написанными на заказ скриптами и с помощью набора инструментов FieldTrip (Oostenveld et al. 2011). Анализы в этом отчете точно параллельны и расширяют анализы, описанные в Spaak et al. (2012).

Частотно-временные представления (TFR) и индекс модуляции (MI) были рассчитаны с биполярными производными LFP, полученными путем привязки каждого канала электрода (за исключением самого поверхностного) к каналу, расположенному на 200 мкм (V1) или 150 мкм (SEF) в поверхностное направление.Эта процедура ослабляет эффекты объемной электрической проводимости, что приводит к более точной пространственной оценке локальной связи внутри и между кортикальными слоями.

Данные из V1 были дополнительно выбраны с биполярными LFP в каналах электродов, расположенными на +900, +300, −200 и −500 мкм относительно дна первоначального стока L4, что обеспечило 1510, 1521, 1441 и 897 сегменты с высоким альфа, соответственно, за 432 мин записи. В SEF мы выбрали четыре канала электродов, демонстрирующих наибольшие визуально вызванные стоки тока (+450, 0, −750 и −1350 мкм относительно местоположения визуально вызванных стоков тока наибольшей величины в L3), что обеспечило 1519, 1541, 1678 и 1392 сегмента с высоким альфа, соответственно, за 621 минуту записи.

Мы извлекли периоды высокой мощности альфа-диапазона в биполярных LFP для каждого сеанса. В частности, биполярные LFP подвергались полосовой фильтрации (двухпроходный фильтр с конечной импульсной характеристикой по методу наименьших квадратов с порядком 426 в диапазоне 7–14 Гц), а затем преобразовывались по Гильберту для получения огибающей амплитуды альфа-диапазона. Каждый высокий альфа-сегмент имел амплитуду выше 30-го процентиля распределения альфа-амплитуды в течение сеанса в течение минимального времени 800 мс.

Выровненные по альфа-каналу частотно-временные представления.

СКР были получены путем совмещения изменяющихся во времени спектров мощности LFP (20–300 Гц) с пиками LFP в альфа-диапазоне, записанными с одного эталонного канала (). Более конкретно, альфа-пики в LFP были определены путем идентификации пересечений нуля во второй временной производной опорного сигнала с ограниченной полосой альфа (7–14 Гц). Для получения каждого СКР спектральная мощность биполярных сегментов LFP вокруг альфа-пиков была вычислена с помощью скользящего временного окна и одного конуса Хэннинга. Мощность в каждой полосе частот вычислялась с шагом 1 Гц от 20 до 300 Гц, с изменяющейся длиной окна, установленной на 7 циклов интересующей частоты (например,(например, длина окна для 20 Гц составляла 350 мс, а длина окна для 300 Гц составляла 23,33 мс). Эти согласованные по альфа-каналу СКР были усреднены и нормализованы относительно средней мощности на частоту в каждом канале.

A : схематический вывод частотно-временного представления (СКР). Пример сегмента LFP фильтруется полосой пропускания в 2 интересующих частотных диапазона для амплитуды (сигнал _amp , красный; 20–300 Гц) и для фазы (сигнал _ph , синий; 7–14 Гц). Спектральная мощность сигнала _amp вычисляется с помощью скользящего временного окна и запускается на каждом пике сигнала _ph для получения усредненной мощности сигнала _amp вокруг пика сигнала _ph .Эта процедура повторяется для каждой частоты сигнала _amp с шагом 1 Гц от 20 до 300 Гц для получения полного СКР. B : схематический вывод индекса модуляции (MI). Первые шаги фильтрации такие же, как и для СКР. Затем с помощью преобразования Гильберта вычисляются мгновенная амплитуда сигнала _amp и мгновенная фаза сигнала _ph . Амплитуда сигнала _amp разделяется в соответствии с фазой сигнала _ph .MI рассчитывается с помощью алгоритма, предложенного Tort et al. (2010). MI равен 0, когда амплитуда равномерно распределена по фазовому циклу ( справа ). C : применение анализов СКР и MI к моделированным LFP. Вверху слева : смоделированный LFP представляет собой сумму трех спектральных компонентов: сигнал _фаза (синусоида 10 Гц), сигнал _amp (синусоида 100 Гц с амплитудой, объединенной с сигналом _фаза ) и 1 / f ^α (розовый) шум. Вверху справа : Матрица MI моделируемого LFP.Процедура, показанная в B , была повторена для частот сигнала _ph в диапазоне от 3 до 60 Гц и частот сигнала _amp в диапазоне от 30 до 300 Гц. Высокие значения MI наблюдались при фазовой частоте 10 Гц и амплитудной частоте 100 Гц. Внизу : СКР смоделированных LFP с разными частотами для сигнала _amp (100 Гц, 50 Гц и 30 Гц от слева до справа соответственно). Четкая модуляция мощности происходит вокруг каждой частоты сигнала _amp , синхронизированной с пиками и провалами сигнала _ph ( внизу слева ).Обратите внимание, что диапазон осей y для правого 2 СКР отличается от диапазона для левой СКР, чтобы раскрыть всю форму модуляции. Выраженного размазывания ни в одном СКР не наблюдается.

Для вычисления статистической значимости случайным образом перемешанные СКР были получены с помощью процедуры, описанной выше, но с объединением LFP для выделения фазы из одного сеанса с амплитудой из другого сеанса, записанной в той же области. Результаты были преобразованы в t баллов путем сравнения альфа-выровненных СКР с перетасованными СКР для статистического тестирования на основе кластеров (Maris and Oostenveld 2007).Мы выбрали четыре репрезентативных канала из разных ламинарных компартментов, чтобы оценить взаимосвязь между пиками альфа-диапазона и мощностью LFP внутри и между кортикальными слоями. Мы вычислили СКР для четырех каналов относительно каждого канала альфа-электрода сравнения, в результате чего получили 16 комбинаций СКР как для SEF, так и для V1.

Индекс модуляции.

Сила фазо-амплитудной связи количественно оценивалась с помощью MI, предложенного Tort et al. (2010) (). Во-первых, биполярный LFP в периоды высокой мощности в альфа-диапазоне пропускался через полосовую фильтрацию в полосы шириной 2 Гц с центром на интересующей частоте, f _фаза , для всех каналов электродов.Затем мгновенная фаза заданной частоты оценивалась путем извлечения угла преобразованного по Гильберту биполярного LFP с ограниченной полосой пропускания. Чтобы проанализировать амплитуду LFP, биполярные LFP из всех каналов электродов в течение высоких альфа-периодов (см. Анализ данных ) были подвергнуты полосовой фильтрации в полосы шириной 10 Гц с центром на f _amp . Преобразование Гильберта было применено к этим сегментам с ограниченной полосой пропускания, и мгновенная амплитуда была извлечена путем взятия абсолютного значения выходного сигнала преобразования Гильберта.МИ был вычислен для всех пар полос частот, f _фазы и f _amp , с шагом 1 Гц от 3 до 60 Гц и от 30 до 300 Гц, соответственно. С помощью этой процедуры была получена матрица значений MI по частотам для фазы в зависимости от амплитуды. Статистическая значимость значений MI оценивалась с помощью теста случайной перестановки (с использованием 1000 перетасовок) (Spaak et al. 2012). Значимые значения MI усредняли по альфа (7–14 Гц) и гамма (30–200 Гц) диапазонам, чтобы получить одно значение MI для каждой пары биполярных LFP.В результате была получена матрица средних значений МИ, каждый элемент которой соответствует определенной комбинации глубины коры для альфа-фазы и глубины коры для амплитуды гамма-излучения. Матрица MI межсессионных средних была кубическим сплайном, интерполированным в 10 раз по пространству. Матрицы MI были обрезаны после усреднения, так что каждая показанная точка данных отражает среднее значение за указанное количество сеансов. Каждый элемент матрицы MI был преобразован в оценку t с использованием перемешанных матриц MI, описанных выше, для выполнения статистического тестирования на основе кластеров (Maris and Oostenveld 2007).

Валидация анализов СКР и МИ.

Достоверность анализов СКР и МИ оценивалась посредством анализа смоделированного сигнала. Смоделированный сигнал состоял из трех компонентов: сигнал _ph (синусоида 10 Гц), сигнал _amp (синусоида 100 Гц с амплитудой, связанной с сигналом _ph ) и 1 / f ^α (розовый) шума с их относительными амплитудами, равными 5, 1 и 10 ⁵ соответственно (). СКР, вычисленный на смоделированном сигнале, показал мощность около 100 Гц, модулируемую фазой сигнала _ph , что подтверждает связь между фазой и амплитудой в смоделированном сигнале ().Аналогичным образом, анализ MI, примененный к смоделированному сигналу, дал самые высокие значения между фазой ~ 10 Гц и амплитудой 100 Гц ().

Значительное размытие может происходить в нижнем частотном диапазоне СКР, потому что длина скользящего временного окна мала, например, оценка мощности на 30 Гц основана на ~ 2 периодах альфа. Чтобы выяснить, является ли такой артефакт критическим, был проведен анализ СКР с помощью Signal _amp на низких частотах (30 Гц и 50 Гц;).Четкая модуляция мощности была ограничена частотой Signal _amp , предполагая, что размытие не является критическим, даже когда анализ СКР применяется к низкочастотному диапазону.

Анализ плотности источника тока с выравниванием по альфа-каналу.

Для альфа-ориентированного анализа CSD альфа-пики в униполярном LFP были обнаружены, как описано выше. Сегменты LFP в окне длительностью 400 мс с центром на альфа-пиках усреднялись для каждого канала. CSD рассчитывали через дискретную вторую пространственную производную, как описано выше.Среднее значение CSD вокруг альфа-пиков было кубическим сплайном, интерполированным в 10 раз по пространственному измерению. Этот анализ проводился на каналах электродов, описанных в Выровненных по альфа частотно-временных представлениях . Статистическая значимость этого CSD была оценена с помощью процедуры, применяемой для альфа-согласованных СКР.

Высокопроизводительный анализ микросхем человеческого мозга с помощью мультинейронного патч-зажима нового поколения

Существенные изменения:

1) Одной из основных проблем является система очистки пипеток, адаптированная авторами.В соответствии с исходным протоколом CR Forest, необходим дополнительный этап для очистки остаточного детергента, приставшего к внешней поверхности наконечника пипетки с помощью ACSF, перед перемещением пипеток в записывающую камеру для попытки пластыря, однако Пэн и его коллеги пропустили этот шаг. Авторы заявляют, что есть веская практическая причина для пропуска этого шага, но данных в поддержку этой практики предоставлено мало или они отсутствуют. Они утверждают, что не было различий в качестве записи или электрофизиологических свойствах между пипетками вначале и после очистки, но эти утверждения должны быть подтверждены данными.В частности, было бы важно сообщить, как мембранный потенциал, входное сопротивление, синаптические события и параметры потенциала действия (амплитуда, ширина и др.) Изменяются со временем после исправления и повторного сопоставления.

Благодарим вас за понимание нашего обоснования отказа от дополнительной очистки. Мы согласны с тем, что эта практика и наше заявление о неизменной физиологии нейронов должны быть подтверждены дополнительными данными. Чтобы оценить возможное влияние нашего протокола очистки на качество записи и электрофизиологические свойства, мы провели дополнительные эксперименты на острых срезах мозга из моторной коры головного мозга крыс.Мы зарегистрировали 81 нейрон в 12 срезах мозга от 2 животных (P21, P22) с помощью 28 пипеток с двумя последовательными циклами очистки и сравнили клеточную и синаптическую физиологию. Мы исключили 4 интернейрона, кроме того, были исключены 9 клеток с деполяризованным мембранным потенциалом, которые были зарегистрированы на свежих и очищенных пипетках с равной вероятностью (3/28 клеток со свежими пипетками, 2/28 клеток после первой очистки и 4/28 клеток после второй очистки. ), подробнее см. в разделе «Материалы и методы».

Мы построили график распределения клеточных и синаптических свойств свежих и очищенных пипеток на рисунке 3. Кроме того, мы рассчитали среднее относительное изменение и его доверительный интервал для всех запрошенных параметров. Мы обнаружили, что относительное изменение среднего значения этих параметров находится в пределах 10%. Мы также рассчитали доверительный интервал этих относительных средних изменений, который представляет собой границы статистически значимой эквивалентности. В целом, мы не нашли доказательств систематического воздействия нашего подхода к очистке на клеточную или синаптическую физиологию.Мы включили статистические результаты в качестве исходных данных на рис. 3 и соответствующим образом адаптировали раздел «Материалы и методы».

2) В статье слишком много внимания уделяется анализу связности и игнорируются его ограничения, например ложноотрицательные. Авторы могут пожелать, вместо этого, подчеркнуть, что мультипатч-запись в настоящее время является единственным доступным методом для анализа прочности и краткосрочной пластичности моносинаптической связи.

Мы благодарим рецензента за то, что он поднял этот вопрос, и соглашаемся с тем, что существуют ограничения в отношении анализа связности с использованием мультипатч-записей.Мы включили параграф, посвященный потенциальным причинам ложноотрицательных результатов в Обсуждение.

Мы также согласны с тем, что синаптическая сила и кратковременная пластичность являются важными параметрами этих связей. Несмотря на то, что парная конфигурация записи с фиксацией фиксации представляет собой оптимальный подход к анализу этих параметров, их также можно определить, комбинируя записи с фиксацией фиксации с двухфотонным снятием каркаса глутамата или оптогенетической стимуляцией. Однако надежность пресинаптической стимуляции может быть ниже, чем при использовании метода патч-кламп.Мы подчеркнули важность этих параметров и технические преимущества мультипатч-подхода в соответствующем разделе «Обсуждение».

3) Важные отсутствующие экспериментальные детали включают указание, можно ли исправить ячейки во время записи из других ячеек, время, необходимое для проверки возможности подключения, и анализ распределения расстояний между записанными ячейками (например, полученное распределение расстояний между ячейками продлить записи такими же, как те, которые были получены изначально?).

Хотя проверка возможности подключения одновременно с установкой исправлений сэкономит время, мы воздержались от этого по нескольким практическим причинам, которые мы изложили в новом абзаце в разделе «Результаты». Мы также включили время, необходимое для проверки возможности подключения и измерения внутренних свойств ячеек (раздел «Результаты»).

Мы благодарим рецензента за то, что он поднял важный вопрос о том, что межсоматические расстояния могут влиять на вероятность соединения, и что необходимо контролировать местоположения репатриированных ячеек, чтобы предотвратить возможное смещение.Как и предполагалось, мы проанализировали влияние очистки с удлинением на межсоматическое расстояние в наших предыдущих экспериментах с предубикулумом крыс и обнаружили аналогичное распределение между кластерами, полученными с и без очистки с расширением. Мы построили распределение расстояний на рисунке 5 — приложение к рисунку 1 и обсудили их в разделе «Результаты».

4) Авторы подчеркивают некоторые преимущества полуавтоматического подхода, но не определяют другие аспекты мультипатч-экспериментов, которые могут выиграть от автоматизации — например, сбор данных и онлайн-контроль качества, а также обнаружение соединения в реальном времени.Учитывая потенциал для сбора такого большого количества данных, следует рассмотреть формат данных (например, нейроданные без границ), совместное использование данных, автоматизацию обнаружения и анализа соединений.

Мы согласны с тем, что есть несколько аспектов экспериментов, которые можно автоматизировать в дальнейшем, и мы также убеждены, что увеличение объема данных требует стандартизации анализа и формата данных. Однако мы видим компромисс между экспериментальной гибкостью и автоматизацией сбора и анализа данных.Поскольку мы хотели максимизировать применимость для других групп и их конкретных вопросов в этом отчете, мы использовали коммерчески доступное программное обеспечение для сбора данных, в то время как автоматический анализ трассировки для обнаружения соединений, безусловно, важен и требует постоянных усилий. Хотя программное обеспечение Signal может также выполнять онлайн-анализ, мы считаем, что это необходимо только для экспериментов с замкнутым циклом. Мы включили новый абзац по этим вопросам в раздел «Обсуждение». Мы также поддерживаем усилия открытой науки и разработки стандартизированного формата данных для облегчения сотрудничества.Мы предоставили предложения по этой теме в разделе «Обсуждение».

5) Несмотря на то, что использование редких живых тканей человека и, особенно, для увеличения объема данных по каждому образцу является веским обоснованием для разработки систем с несколькими заплатами, возможно, еще не известно, будет ли этого достаточно, чтобы исследовать разницу между частные лица. Какие различия наблюдались при обсуждении различий между людьми? Типы ячеек, связи? Я бы посоветовал авторам смягчить это утверждение.

Мы понимаем озабоченность автора обзора относительно статистической силы наших размеров выборки для выявления значимых различий между людьми. Мы хотим подчеркнуть, что наша основная цель получения больших выборок от отдельных пациентов состоит не в том, чтобы определить эти различия между отдельными людьми, а, скорее, в том, чтобы получить возможность оценивать межличностную изменчивость. Мы считаем, что это очень важно, поскольку ткань получена от очень разнородной группы пациентов.Анализ данных на индивидуальном уровне может помочь нам определить инвариантные параметры, которые могут указывать на общие принципы коры головного мозга человека. С другой стороны, параметры с высокой индивидуальной вариабельностью следует анализировать с осторожностью и проводить дальнейшие исследования. Поэтому мы считаем, что получение статистически значимых наборов данных у одиноких пациентов является важным шагом для мотивации и руководства будущими исследованиями. Мы перефразировали и детализировали нашу претензию в рукописи, чтобы лучше отразить этот аспект (Аннотация; Введение; Обсуждение).

В нашем предварительном анализе мы не обнаружили значительных различий во взаимосвязи пирамидных клеток между пациентами, в то время как мы определили, что доверительный интервал различий в вероятности соединения находился в диапазоне от -5% до 9,5%. В целом, мы полагаем, что полный анализ и обсуждение потенциальных инвариантных и вариантных параметров выходят за рамки этого технического отчета, и их лучше рассмотреть в отдельной исследовательской статье. Мы добавили статистический анализ в соответствующие разделы «Результаты» и «Материалы и методы».

[Примечание редакции: до принятия были запрошены дополнительные исправления, как описано ниже.]

Рукопись была значительно улучшена, но остается одна проблема, которую необходимо решить до принятия, как указано ниже:

Относительно новых экспериментов по повторному связыванию после обработки Alconox без промывки Alconox (подраздел «Окончательная последовательность удаления не требует дополнительных лунок, содержащих aCSF»). Они убедительны и показывают, что в тканях мозга молодых крыс в целом наблюдается небольшой кумулятивный эффект процесса очистки на последующее здоровье нейронов.Здесь необходимо прояснить два момента.

1) Ожидают ли авторы, что результаты со зрелой мозговой тканью человека будут эквивалентны результатам с мозговой тканью молодой крысы? Есть ли какие-либо ограничения, о которых нам следует знать в этом валидационном эксперименте.

2) Были ли когда-либо репатриированы одни и те же нейроны после очистки? Это позволит провести прямое сравнение свойств нейронов до и после очистки патч-пипетки.

Мы провели первые ревизионные эксперименты на крысах, потому что у нас редко есть человеческие ткани и мы не получали их во время ревизии.Мы также не пытались перепатчить одни и те же нейроны. Однако нам повезло, и мы дважды получали человеческую ткань за последние две недели, и теперь мы провели дополнительные эксперименты, чтобы оценить влияние очистки на электрофизиологические свойства человеческих нейронов.

Мы сравнили свойства нейронов, покрытых свежими (n = 24) или очищенными пипетками (n = 9, рисунок 3 — приложение к рисунку 1). Мы также перепрограммировали те же нейроны той же очищенной пипеткой (n = 9, рисунок 3 — приложение к рисунку 2) или другой свежей пипеткой (n = 5, рисунок 3 — приложение к рисунку 3).Мы смогли показать, что внутренние электрофизиологические свойства человеческих нейронов были и оставались схожими в разных условиях (статистические данные и тесты на рисунке 3 — исходные данные 1). Хотя мы действительно наблюдали значительное снижение входного сопротивления в клетках, повторно сопоставленных с помощью очищенной пипетки, несколько дополнительных факторов могли способствовать изменчивости в этих нейронах, например, эффект самовосстановления или прошедшее время. Эти не зависящие от очистки изменения отражаются в вариабельности, обнаруживаемой также в нейронах, повторно обработанных свежими пипетками (рис. 3 — приложение к рис. 3).

Поскольку мы показали, что сама пипетка не оказывает систематического воздействия на внутренние свойства, мы также рассмотрели возможность того, что внеклеточный раствор, в котором промывались пипетки, мог иметь эффект (рис. 3 — приложение к рисунку 4). Поэтому мы исправили кластеры нейронов (n = 19) и сравнили их свойства и синаптические связи (n = 7) до и после очистки других пипеток, чтобы смоделировать изменения во внеклеточном растворе после промывания.Опять же, мы обнаружили, что потенциал мембраны покоя и кинетика потенциала действия оставались очень стабильными (средняя относительная разница в пределах 2%), в то время как входное сопротивление и сопротивление доступа увеличивались. Мы также не наблюдали особой тенденции в постсинаптических амплитудах между этими двумя состояниями, которая показывала как небольшое увеличение, так и уменьшение (n = 7, Рисунок 3 — дополнение к рисунку 5, Рисунок 3 — исходные данные 2). Мы соответствующим образом скорректировали разделы «Результаты» и «Материалы и методы» в рукописи.

В целом, мы смогли показать, что результаты наших экспериментов по очистке нейронов человека аналогичны тем, которые мы продемонстрировали на нейронах крысы, даже когда та же самая клетка была репатриирована.Мы действительно увидели, что входное сопротивление уменьшилось в клетках, повторно обработанных с помощью очищенной пипетки, и увеличилось в клетках, зарегистрированных в ACSF после промывки. Хотя повторная синхронизация, время записи и нейронная изменчивость могут повлиять на эти параметры, мы не можем исключить эффект очистки пипетки в этом случае. Поэтому мы подчеркиваем, что эти валидационные эксперименты ограничиваются нашими вопросами настройки и исследования и что любая реализация нашей процедуры очистки другими должна быть тщательно проверена на параметры и в интересующей модели организма.Тем более, что прилипший детергент на пипетке может зависеть от множества факторов, которые необходимо учитывать и настраивать для каждой экспериментальной установки (подраздел «Окончательная последовательность изгнания не обязательно требует дополнительных лунок, содержащих aCSF»).

Кроме того, поскольку каждый патч-электрод использовался более одного раза, возможно, релевантным статистическим сравнением здесь является дисперсионный анализ повторных измерений, а не статистика популяции групп, как, по-видимому, показано на рис. 3J, K и L.

Спасибо за полезный совет. Мы выполнили повторные измерения ANOVA для 14 пипеток, с помощью которых были получены три успешных записи пирамидных клеток (свежие, 1x очистка, 2x очистка). Он не показал значимой тенденции, и мы включили результаты в Рисунок 3 — исходные данные 2. Мы также соответствующим образом адаптировали разделы «Результаты» и «Материалы и методы».