Завод щитового электрооборудования «ТПЭ-Тяжпромэлектро» — Каталог продукции

ООО «ТПЭ-Тяжпромэлектро» производит следующие типы щитового электрооборудования:

Шкаф (Ящик) трансформатора напряжения ШЗН (ЯЗНМ)

Шкаф (Ящик) трансформатора напряжения ШЗН (ЯЗНМ)

Назначение:
Ящик трансформатора напряжения ЯЗНМ предназначен для подключения и распределение вторичных цепей трансформаторов напряжения, устанавливаемых на шинах 110-750кВ подстанций, на шинах 35кВ подстанций и на обходной системе шин 110-220кВ.

• в части воздействия климатических факторов внешней среды исполнение по ГОСТ 15150-69 – У,
• в части воздействия механических факторов – группа условий эксплуатации М1 по ГОСТ 17516-72;
• высота над уровнем моря – не более 2000 м;
• рабочее положение в пространстве – вертикальное;
• температура окружающего воздуха – в соответствии с климатическим исполнением по ГОСТ 15150-69;
• степень загрязнения окружающей среды – 3 по ГОСТ Р 51321.1-2000.

Перейти в другие разделы:

Дополнение мутантов wzz. Кодирующая область

Контекст 1

… wzz1 находится в начале локуса О-антигена, был проведен анализ комплементации. Кодирующую область каждого гена вставляли в вектор pMMB66HE под контролем промотора Ptac. Изопропил-D-тиогалактопиранозид (IPTG) был использован для индукции экспрессии белков, а образцы LPS были приготовлены из дополненных штаммов (рис. 2). Наличие одного вектора во всех штаммах не повлияло на картину полосатости ЛПС (рис.2, дорожки 1, 4, 7 и 10). Сверхэкспрессия каждого гена в PA103 дикого типа приводила к небольшому увеличению соответствующих длин цепей, о чем свидетельствует более темное окрашивание; предоставление PA103 дикого типа с wzz1 в транс привело к увеличению количества …

Context 2

… 4, 7 и 10). Сверхэкспрессия каждого гена в PA103 дикого типа приводила к небольшому увеличению соответствующих длин цепей, о чем свидетельствует более темное окрашивание; Обеспечение PA103 дикого типа wzz1 в транс привело к увеличению количества длинных цепей на бактериальной поверхности, в то время как сверхэкспрессия wzz2 приводила к большему количеству длинных цепей с очень длинной цепью (рис.2, полосы 2 и 3). Когда мутанту wzz1 была предоставлена ​​последовательность, кодирующая wzz1 в транс, стало очевидным более темное окрашивание, подобное тому, что наблюдается у дикого типа, что указывает на восстановление предпочтения длинной цепи (фиг. 2, дорожка 5). Предоставление кодирующей последовательности wzz2 в транс к мутанту wzz2 позволило получить очень длинную …

Context 3

… длину цепи на бактериальной поверхности, в то время как сверхэкспрессия wzz2 приводила к еще с очень длинной цепочкой (рис.2, полосы 2 и 3). Когда мутанту wzz1 была предоставлена ​​последовательность, кодирующая wzz1 в транс, стало очевидным более темное окрашивание, подобное тому, что наблюдается у дикого типа, что указывает на восстановление предпочтения длинной цепи (фиг. 2, дорожка 5). Предоставление кодирующей последовательности wzz2 в транс к мутанту wzz2 позволило продуцировать очень длинный O-антиген, который отсутствовал в мутанте (рис. 2, дорожка 9). Трансформация генов wzz в двойной мутант привела к созданию паттернов LPS-бэндинга, которые были аналогичны таковым у одиночных мутантов гена, который все еще отсутствовал (рис….

Контекст 4

… с кодирующей последовательностью wzz1 в транс, более темное окрашивание, подобное тому, что наблюдается у дикого типа, было очевидным, что указывает на восстановление предпочтения длинной цепи (рис. 2, дорожка 5). Предоставление кодирующей последовательности wzz2 в транс к мутанту wzz2 позволило продуцировать очень длинный O-антиген, который отсутствовал в мутанте (рис. 2, дорожка 9). Трансформация генов wzz в двойной мутант привела к созданию паттернов LPS-бэндинга, которые были аналогичны таковым у одиночных мутантов гена, который все еще отсутствовал (рис.2, дорожки 11 и 12). Мы также выполнили кросс-комплементацию, которая не проводилась в исследовании Daniels et al. (5) с использованием мутантов wzz PAO1. Мы обнаружили, что …

Контекст 5

… одиночные мутанты гена, который все еще отсутствовал (рис. 2, дорожки 11 и 12). Мы также выполнили кросс-комплементацию, которая не проводилась в исследовании Daniels et al. (5) с использованием мутантов wzz PAO1. Мы обнаружили, что предоставление любого гена wzz другому мутанту wzz приводит к избыточному производству длины цепи, экспрессируемой клонированным геном (рис.2, дорожки 6 и …

Контекст 6

… не просто восстановить шаблон полосатости LPS PA103 дикого типа. Оказалось, что сверхэкспрессия одного белка Wzz ингибирует активность оставшегося белка Wzz, кодируемого хромосомами. В то время как это имело место для дополненного мутанта wzz2, в котором было уменьшено количество длин длинной цепи, когда wzz2 экспрессировался в транс (рис. 2, дорожка 9) по сравнению с пустым вектором (рис. 2, дорожка 7), об этом лучше всего свидетельствует дополнение мутанта wzz1 (рис.2, дорожка 5). Когда wzz1 предоставлялся в транс в мутанте wzz1, экспрессия очень длинного О-антигена терялась, несмотря на присутствие гена wzz2 дикого типа в хромосоме. Это контрастирует с тем, что было видно …

Контекст 7

… шаблон. Оказалось, что сверхэкспрессия одного белка Wzz ингибирует активность оставшегося белка Wzz, кодируемого хромосомами. В то время как это имело место для комплементарного мутанта wzz2, у которого было уменьшено количество длин длинной цепи, когда wzz2 экспрессировался в транс (рис.2, дорожка 9) по сравнению с пустым вектором (рис. 2, дорожка 7), об этом лучше всего свидетельствует дополнение мутанта wzz1 (рис. 2, дорожка 5). Когда wzz1 предоставлялся в транс в мутанте wzz1, экспрессия очень длинного О-антигена терялась, несмотря на присутствие гена wzz2 дикого типа в хромосоме. Это контрастирует с тем, что было замечено в дополнении одиночного wzz …

Context 8

… оставшегося хромосомно-кодируемого белка Wzz. В то время как это имело место для комплементарного мутанта wzz2, у которого было уменьшено количество длин длинной цепи, когда wzz2 экспрессировался в транс (рис.2, дорожка 9) по сравнению с пустым вектором (рис. 2, дорожка 7), об этом лучше всего свидетельствует дополнение мутанта wzz1 (рис. 2, дорожка 5). Когда wzz1 предоставлялся в транс в мутанте wzz1, экспрессия очень длинного О-антигена терялась, несмотря на присутствие гена wzz2 дикого типа в хромосоме. Это контрастирует с тем, что наблюдалось при комплементации одиночных мутантов wzz штамма PAO1; сверхэкспрессия в trans любого из белков Wzz не была заметна …

Контекст 9

… монтажные комплексы. Наши результаты хорошо согласуются с этой моделью и предполагают, что комплекс, который включает один белок Wzz, может мешать активности комплексов, содержащих другой белок Wzz, как видно, когда сверхэкспрессия wzz1 ингибировала продукцию очень длинного регулируемого О-антигена. геном wzz2, все еще присутствующим в хромосоме (рис. 2, дорожка …

Структура полноразмерной бактериальной полисахаридной сополимеразы

Олигомерное состояние и общая архитектура

Анализ полностью очищенного методом сродства металла длина WzzB полисахарид-сополимеразный комплекс E.coli с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) выявила небольшое плечо (популяция 1), элюирующееся немного раньше основного пика элюции (популяция 2) (дополнительный рис. 1a), соответствующее размерам 550 и 220 кДа, соответственно (на основе калибровки SEC). стандарты). Для дальнейшей оценки размера, чистоты и стабильности комплекса фракции SEC, соответствующие двум популяциям, были проанализированы с использованием денатурирующего (SDS-) и Blue-native (BN-) PAGE (дополнительный рис. 1b, c). Дальнейший анализ с помощью SDS-PAGE подтверждает присутствие WzzB с кажущейся молекулярной массой ~ 45 кДа, соответствующей мономеру.Анализ BN-PAGE выявил толстые выступающие полосы в диапазоне от ~ 950 до ~ 600 кДа для популяции 1 и от ~ 600 до ~ 300 кДа для популяции 2 (на основе глобулярных нативных маркеров PAGE), что соответствует большой олигомерной структуре, хотя и немного больше, чем примерные размеры основаны на стандартах SEC. Несмотря на кажущиеся большие размеры, визуализация двух популяций с помощью как отрицательной окрашенной, так и криоэлектронной микроскопии выявила материал, пригодный для анализа отдельных частиц, только из популяции 1 (дополнительный рис.1в, г). Несмотря на наличие очищенных молекул WzzB размера, который должен быть виден с помощью электронной микроскопии, популяция 2 не содержала наблюдаемых комплексов, которые можно было бы проанализировать с использованием метода отдельных частиц. Однако анализ этой популяции с отрицательным окрашиванием выявил мелкие частицы разного размера и формы, которые нельзя было точно измерить. Это может указывать на то, что эта популяция содержит множественные олигомерные состояния WzzB, которые в этих условиях по какой-либо причине не собираются в большие октамерные комплексы, наблюдаемые в популяции 1.Это предположительно согласуется с предыдущими экспериментами по сшиванию, которые предполагают, что олигомеризация Wzz является высокодинамичной по своей природе ^22,23,24,25 . Это также может быть следствием системы на основе промотора Т7, используемой для сверхэкспрессии белка и / или детергента, используемого для извлечения комплекса из мембраны.

В целом, общая архитектура напоминает коробчатую медузу, содержащую большой периплазматический домен колоколообразной формы, аналогичный тому, что сообщалось ранее ^12,13,19,20 , и, что особенно важно, 8 трансмембранных доменов, окружающих большую трансмембранную камеру (рис.1). Без применения симметрии или приблизительного / предполагаемого объема для комплекса протомеров, в результате одночастичного анализа был идентифицирован октамерный комплекс (рис. 1). Октамерная природа комплекса была идентифицирована с помощью безреференсной ab initio трехмерной классификации и четко видна на несимметричной (C1) карте. Восстановленная карта без применения симметрии привела к общему разрешению 3,4 Å (дополнительный рисунок 2), а оценка местного разрешения предполагает, что большой периплазматический домен в форме колокола доминирует в процессе совмещения изображений с общим разрешением 3.3 Å по сравнению с трансмембранным доменом при 4,2 Å. Поскольку октамерный комплекс четко виден на несимметричной карте, была применена 8-кратная (C8) симметрия, которая привела к заметному улучшению общего разрешения до 3,0 Å (рис. 1, дополнительный рис. 2). Это было особенно полезно для трансмембранного домена, для которого разрешение было улучшено на 1 Å, что позволило однозначно построить атомную модель для этой области. В соответствии с предыдущими выводами ^12,19 первоначальная трехмерная классификация ab initio с последующим гетерогенным уточнением классифицировала ~ 25% частиц WzzB как димеры октамерного комплекса с очевидной псевдо-D-симметрией (дополнительный рис.3). Попытки уточнить эти димеры с использованием различных симметрий привели только к разрешению 8–10 Å. Дальнейшее изучение необработанных микрофотографий выявило небольшое количество ассоциации октамеров даже более высокого порядка (дополнительный рис. 1d). Последующий анализ показал, что дополнительные 10% димеров октамеров были фактически смешаны с набором частиц, используемых для создания конечных объемов с высоким разрешением, о чем свидетельствует слабая плотность, наблюдаемая ниже многих средних значений класса 2D (дополнительный рис.2б). Однако дополнительные раунды уточнений с удалением этих частиц не повлияли на окончательные реконструкции. Даже строгая фильтрация этого окончательного набора частиц путем удаления более 50% из них, за исключением небольшого уменьшения разрешения, не повлияла на общую архитектуру реконструкции. Это говорит о том, что общая структура октамерного комплекса одинакова, независимо от того, связана он с димерами или нет. Чтобы подтвердить это, маскирование и уточнение вокруг одного октамера в димере (дополнительный рис.3) привел к реконструкции октамерного комплекса с такой же структурой, как и у одиночных октамеров. Это включает, что важно, расположение спиралей трансмембранного домена.

Окончательные реконструированные объемы полноразмерного WzzB, уточненного без ( a ) и с ( b ) применения симметрии C8. Вверху: вид сверху периплазматической области сверху вниз.

Были противоречивые сообщения о точном олигомерном состоянии этого семейства белков.В различных сообщениях предлагались тримерные, пентамерные, гексамерные и октамерные структуры WzzB и WzzE, а также неамерная организация FepE ^{12,13,14,19,25} . Калиныч и др. ¹⁹ представляют убедительные структурные и биохимические данные, позволяющие предположить, что и WzzB, и WzzE имеют октамерную природу, а все, что меньше этого, является артефактом кристаллизации. Представленные здесь результаты согласуются с их выводами. Это значительно меньше, чем оценивают SEC или BN-PAGE.Основываясь на больших размерах, оцененных с помощью SEC и BN-PAGE, было высказано предположение, что эти комплексы, возможно, могут содержать 10-15 протомеров на комплекс ¹⁹ . Точно так же наблюдаемые нами профили элюирования SEC и характер миграции нативного PAGE согласуются с очень большими комплексами. Однако мы считаем, что это вводит в заблуждение, поскольку наши 2D и 3D классификации не выявили ничего больше, чем октамерный комплекс. Более вероятным объяснением является ассоциация двух или более комплексов через цитоплазматические домены в димеры, тримеры (или даже более высокого порядка) октамеров, которые достаточно сильны, чтобы поддерживаться в условиях BN-PAGE и SEC.Кроме того, мицелла детергента DDM в форме пончика, защищающая трансмембранный домен каждого протомера, увеличивает диаметр трансмембранной области до ~ 135 Å. Это большое количество детергента, окружающего трансмембранный домен, может также объяснить большое завышение размера на основе SEC и BN-PAGE. Единственным отклонением от этой октамерной тенденции является структура, недавно определенная одночастичной крио-ЭМ WzzB из Salmonella enterica sv Typhimurium (WzzB ^ST ), который описан как додекамер ²⁰ , который ранее был сообщается как гексамер ²⁵ или октамер ¹⁹ на основании многоуглового лазерного светорассеяния с исключением размера и крио-ЭМ исследований полноразмерного белка.Кроме того, кристаллизация химер между этим белком и гомологом из Shigella flexneri ¹³ приводила к октамерным комплексам.

Периплазматический домен

Размеры периплазматического домена очень похожи на описанные ранее структуры (рис.2): колоколообразный домен высотой ~ 100 Å над границей раздела мембраны, содержащий внутреннюю полость высотой ~ 70 Å. при измерении от границы раздела периплазматической мембраны до дна петли L4.Он наиболее узкий в верхней части колокола, составляющий ~ 55 Å, и расширяется по мере приближения к границе раздела периплазматической мембраны до максимального диаметра ~ 95 Å. Точно так же полая внутренняя часть имеет диаметр 30–35 A и расширяется в большую пустую камеру диаметром ~ 75 A на периплазматической границе раздела. Колоколообразный комплекс является результатом бок о бок упаковки протомеров, и взаимодействия, наблюдаемые в этой структуре, аналогичны тому, что было описано в других работах ^12,13 , среди прочего, с α1, α7 и α8 одного протомера. взаимодействует с длинным α6 соседнего протомера.Нам также удалось построить полностью неповрежденную петлю L4, которая расположена наверху периплазматического домена, на расстоянии ~ 70 Å от поверхности раздела мембраны, и является очень гибкой, если судить по большинству доступных структур, содержащих либо искаженные либо неполная петля, либо отсутствует петля целиком в депонированных моделях ¹² . Здесь петля расположена внутри полости и простирается к центру периплазматического домена (рис. 2) в конформации, аналогичной структуре Salmonella typhimurium / Shigella flexneri WzzB chimera ¹³ .Несмотря на то, что расположение петли далеко от поверхности раздела мембран, она жизненно важна для получения очень длинных полисахаридных цепей ^13,22,26 и Kalynych et al. ²⁶ предполагают, что гибкость петли L4 может опосредовать конформационные изменения, связанные с функцией. Хотя петля L4, по-видимому, не требуется для правильной олигомеризации ¹³ , несколько остатков внутри этой петли вовлечены в многочисленные контакты с остатками соседних петель L4 в центре комплекса, потенциально создавая поры наверху периплазматической оболочки. домен.

a Мультяшное изображение октамерного комплекса, наложенное на карту WzzB с симметрией C8 (белый цвет). Вверху справа: вид сверху с периплазматической стороны. Внизу справа: вид сверху с периплазматической стороны, разрезанный до уровня мембраны для отображения мицеллы детергента в форме пончика. b Нарезка для демонстрации интерьера октамерного комплекса. Красные и черные значения относятся к расстояниям, измеренным на внешней и внутренней поверхностях соответственно. c Одиночный протомер WzzB с метками α-спиралей и петель, обсуждаемых в тексте.

Периплазматический домен этого семейства белков хорошо охарактеризован, и эта область нашей структуры очень похожа на другие доступные структуры (Рис. 3) как на мультимерном, так и на протомерном уровне. В целом, несмотря на относительно низкую идентичность последовательностей между тремя гомологами WzzB, WzzE и FepE ¹² , три белка собираются в удивительно похожие колоколообразные структуры с полыми внутренними полостями.Это отражается наложением полных мультимерных периплазматических доменов, которые кристаллизовались в правильной октамерной или неамерной форме из разных гомологов на наш de novo построенный комплекс (Рис. 3a). На уровне протомеров, независимо от мультимерного состояния, в котором белок кристаллизовался, структурное сходство даже более поразительно с RMDS в диапазоне от 0,8 до 2,8 Å при наложении (Fig. 3b, c).

a Структурное выравнивание репрезентативных периплазматических моделей, кристаллизовавшихся в октамерном олигомерном состоянии WzzB 4E29 (пурпурный), WzzE 3B8O (оранжевый) и неамерном олигомере FepE 3B8N (лосось) на полноразмерном олигомере WzzB 6RBG (серый). b Структурное выравнивание протомеров независимо от олигомерного состояния, в котором они кристаллизовались, на полноразмерном WzzB 6RBG. Коды PDB, используемые для выравнивания: 3B8P (желтый), 4ZM5 (зеленый), 4E2C (синий), 4E29 (пурпурный), 3B8O (оранжевый) и 3B8N (лосось). c Таблица сравнения структурной ориентации протомеров в ( b ). * Химерный S. flexneri / S. typhimurium WzzB, значения в скобках представляют собой диапазоны аминокислотных остатков, происходящие от каждого белка WzzB ¹³ . Протомеры были выровнены, и RMSD было рассчитано с использованием функции Coot ⁴⁴ SSM Superpose.

Периплазматическое основание и линкер

На периплазматическом интерфейсе консервативные остатки в линкерной области, соединяющей периплазматический домен с трансмембранным доменом, помогают формировать жесткий каркас, который фиксирует каждый из трансмембранных 2-спиральных пучков на месте (рис.4). Богатый пролином мотив проксимальнее С-концевой трансмембранной спирали охватывает эту область. Мутации в остатках аланина первых двух пролинов этого мотива (P284 и P287) не влияли на активность ²³ ; однако мутация третьего пролина (P293) в аланин ²³ или вставка участка из 5 аминокислот непосредственно перед этим пролином ²² приводила к полной потере функции и оказывала пагубное влияние на уровни экспрессии. В то время как первые два пролина этого мотива видны в конформации trans , P293 лучше всего моделируется в конформации cis- в плотности нашей структуры (дополнительный рис.4). Это согласуется с Tocilj et al. которые примечательно, даже при том, что они не смогли визуализировать этот остаток на своей карте, предположили, что этот остаток пролина принимает конформацию цис- в полноразмерной структуре ¹² . Конформация цис- торсионного угла ω пролина 293 создает уникальный изгиб в этой линкерной области, таким образом помогая направлять С-концевую трансмембранную спираль в нужное положение. Как показали мутационные исследования ^22,23 и согласуются с нашей структурой, изменение этой области путем удаления этого остатка пролина резко изменило бы трехмерную структуру этого участка полипептида и, следовательно, положение TM2, отрицательно влияя на правильный белок. складной.Более того, анализ с использованием метода ConSurf ^27,28 (дополнительный рис. 5) выявил консервативный лизин (K294), расположенный в этой линкерной области, который, вероятно, позиционируется для взаимодействия с фосфатными головными группами для дальнейшего направления и стабилизации TM домена. Это взаимодействие, вероятно, также может быть нарушено заменой цис -P293.

a C8-симметричная карта и модель трансмембранного домена двух соседних протомеров.Серые пунктирные линии представляют положение мембраны. Левый кружок: увеличенная область компоновщика. Правый круг: увеличенная область вокруг консервативного мотива GXXXG. b C8-симметричная карта (белый) и модель, показывающая трансмембранную камеру и цитоплазматический узел. Отображаются положения сохраненных K294 и K31 (сфер). Для визуализации внутренней части камеры были удалены три протомера. Черная линия представляет собой потенциальную стабилизирующую скобу, созданную двумя лизинами на противоположных сторонах каждой трансмембранной опоры. c Размеры трансмембранной камеры. Слева: вид сверху с периплазматической стороны, срезанной до верхней части домена TM. Справа: два противоположных протомера с расстояниями для измерения диаметра камеры на разных уровнях внутри мембраны.

Трансмембранный домен

Структурная информация с высоким разрешением трансмембранного домена до сих пор неуловима. Недавний отчет об одночастичном анализе полноразмерного WzzB из Salmonella enterica ²⁰ основывался на моделировании молекулярной динамики крупнозернистой структуры, вписывающейся в симметризованную карту плотности C12, в попытке проанализировать трансмембранный домен.Однако при визуальном осмотре карты (EMD-3611) нельзя было достоверно выделить плотность, соответствующую трансмембранным спиралям, выше фоновых уровней мицеллы детергента. Здесь же, с применением преобразований симметрии или без таковых, трансмембранные спирали хорошо видны на фоне мицеллы детергента (рис.1), что позволяет уверенно моделировать их (рис.2 и 4). ). В октамерной сборке пучки из двух спиралей разнесены на ~ 32 Å (при измерении от центра к центру) и не взаимодействуют друг с другом.Каждый из этих двухспиральных пучков состоит из N-концевой (TM1) и C-концевой (TM2) трансмембранной спирали. Внутри каждого пучка их самые близкие взаимодействия находятся в точке их пересечения, что, возможно, неудивительно, совпадает с консервативным мотивом GXXXG (рис. 4a), который был обнаружен в ~ 50% всех белков α-спиральной мембраны и, как предполагается, участвует в упаковке спираль-спираль ²⁹ . В соответствии с этим, G306 и G310 находятся на внутреннем витке TM2 в ближайшей точке контакта с TM1 (рис.4а). Мутации в WzzB Shigella flexneri ^23,30 в этой области, за исключением двойной мутации G305A / G311A, которая дает Oags очень короткой цепи, мало влияет на регуляцию длины цепи О-антигена при изменении этих консервативных глицинов. в аланины через одинарные, двойные или тройные мутации. Это согласуется с нашей структурой, которая показывает, что существует достаточно пространства между двумя трансмембранными спиралями, чтобы приспособиться к этим относительно небольшим структурным изменениям в результате мутаций.Более того, остаток A41 ​​на TM1, который прямо противоположен G306, консервативен как фенилаланин в WzzE и FepE, что в последних двух сборках Wzz будет помещать эту объемную боковую цепь между двумя трансмембранными спиралями. Точно так же остаток S37 на TM1, который находится прямо напротив G310 TM2, не консервативен в других гомологах семейства и часто заменяется аминокислотами с объемными боковыми цепями, такими как фенилаланины или метионины. Фактически, сам G310 не является строго консервативным и рассматривается как аланин в гомологах FepE.Таким образом, глицины (или аланины в случае FepE) в обоих этих положениях позволят получить более объемные остатки прямо напротив TM1. Мутационные исследования ^23,30 были выполнены на WzzB Shigella flexneri , который, как и соответствующий WzzB из E. coli , содержит аминокислотные остатки с небольшими или короткими боковыми цепями в положениях 37 и 41; таким образом, с помощью структуры, представленной здесь, мы теперь видим, что неудивительно, что эти мутации не влияли на регуляцию длины цепи О-антигена.

Каждый из трансмембранных доменов разделен на ~ 32 Å (измеряется от центра к центру) и может рассматриваться как большие вертикальные столбы, которые окружают пустую трансмембранную камеру с амфипатической спиралью (α0), потенциально составляющей часть дна камеры. . Каждая из опор слегка наклонена внутрь к центру камеры, уменьшая внутренний диаметр с ~ 75 Å на периплазматической стороне до ~ 64 Å на цитоплазматической стороне и внешний диаметр с ~ 100 Å на периплазматической стороне до ~ 83 Å со стороны цитоплазмы (рис.4б, в). Как уже упоминалось, каждый столб состоит из двух трансмембранных спиралей с TM2 внутри и TM1 снаружи (Fig. 4b and c). Внутренняя поверхность TM2, направленная от TM1, обращена внутрь камеры и состоит исключительно из неполярных алифатических остатков. TM1, с другой стороны, расположен снаружи, и анализ с использованием метода ConSurf показал, что его внешняя поверхность очень вариабельна (дополнительный рис.5), что позволяет предположить, что он, вероятно, не взаимодействует с Wzy или любыми другими потенциальными компонентами Wzy-зависимого пути. , таким образом, вероятно, играя структурную роль в поддержке TM2.

Другой глицин (G312) мотива GXXXG расположен на противоположной стороне TM2, указывая от соседнего TM1 (Fig. 4a, b) к внутренней части трансмембранной камеры. Двойная мутация G305A / G311A в Shigella flexneri (эквивалент G306 / G312 из E. coli ) дала только очень короткие цепи Oags ^23,30 , и было высказано предположение, что взаимодействие протомера Wzz происходит через трансмембранный домен, и эта мутация приводит к неспособности протомеров взаимодействовать ³⁰ .Однако наша структура демонстрирует, что каждый трансмембранный домен протомеров WzzB находится на расстоянии 32 Å друг от друга без возможности взаимодействия на или рядом с мотивом GXXXG. Поскольку в нашей структуре отсутствует полимераза Wzy, а G312 находится на противоположной стороне TM2, направленной от TM1, в камеру, логично предположить, что более вероятным объяснением будет то, что в полностью неповрежденный Wzy-зависимый суперкомплекс Wzy будет вставлен либо частично или полностью в камеру, чтобы одна из его трансмембранных спиралей располагалась достаточно близко, чтобы эта двойная мутация нарушала взаимодействия Wzz: Wzy, приводя к потере регуляции длины цепи и продукции нерегулируемых Oags.

На цитоплазматической стороне мембраны TM2 продолжается прямо через предсказанную область мембраны до С-концевого остатка. Однако на N-конце белка короткая амфипатическая спираль (α0) проходит параллельно мембране и взаимодействует с TM2 его спирального пучка, а также с TM2 соседнего протомера, который слегка изгибается в сторону α0 (рис. 4 и дополнительный рис. 6). Высококонсервативный K31 расположен в начале TM1, который создает изгиб между TM1 и α0, вызывая резкий поворот на 90 ° на границе цитоплазматической мембраны, в результате чего α0 указывает на центр октамерного комплекса.В соответствии с моделированием и атомистическим моделированием ²⁰ , которые предполагают, что K31 находится в пределах фосфатной полосы и взаимодействует с фосфатными группами липидов, K31 в нашей структуре расположен на внешнем крае мицеллы детергента. Мутации K31 приводят к неактивному комплексу ²³ и Collins et al. ²⁰ предполагают, что мутации этого остатка вызывают втягивание TM1 глубже в мембрану, тем самым нарушая взаимодействия TM-TM. Это тоже возможно; однако, поскольку K31 находится на изгибе между α0 и TM1, другое объяснение, основанное на нашей структуре, состоит в том, что положение α0 резко изменяется, нарушая его взаимодействия с соседним TM2 и, вероятно, общую стабильность белка.Лизин в этом положении, вероятно, сильно взаимодействует с фосфатными группами липидов, создавая жесткую структуру, которая помогает поддерживать α0 в его правильном положении, позволяя ему взаимодействовать с соседними TM2 и потенциально обеспечивая дополнительную стабильность октамерному комплексу.

Цитоплазматический домен

Цитоплазматический домен имеет значительно меньшее разрешение и может рассматриваться как концентратор, расположенный в центре комплекса на границе раздела цитоплазматической мембраны и идущий вниз от границы раздела мембраны (рис.4б). В этом цитоплазматическом домене (не моделированном из-за низкого разрешения в этой области) расположены первые ~ 15 аминокислот N-конца и C-концевая метка 8 × His, используемая для аффинной очистки от каждого протомера. Подобно центральной ступице колеса, подобно спицам, можно увидеть 8 α0 от каждого протомера, расходящиеся наружу на предсказанной мембранной границе этого домена. Кроме того, С-конец TM2, содержащий нерасщепляемую метку 8 × His, используемую для очистки, можно увидеть связанным с цитоплазматическим концентратором на более низких пороговых уровнях (рис.4c, дополнительный рис. 6). Как упоминалось выше и в соответствии с предыдущими выводами ^12,19 ; мы также обнаружили частицы WzzB как димеры октамерного комплекса с очевидной псевдо-D-симметрией, которые связываются через этот цитоплазматический домен в димеры. Попытки уточнить эти димеры октамеров привели к структуре с низким разрешением, в которую можно было состыковать два октамера WzzB. Дальнейшее маскирование и уточнение одиночного октамера в димере привело к структуре с разрешением 3,9 Å, где каждый трансмембранный столб и α0 находятся в такой же конформации, что и мономерная форма октамера, что позволяет предположить, что эта димерная ассоциация не влияет на конформацию трансмембранного домена. .

В попытке лучше охарактеризовать цитоплазматический домен и понять роль цитоплазматических N-концевых остатков, был создан усеченный WzzB с отсутствующими остатками 1-15. Очистка этого усеченного WzzB привела к получению такого же профиля эксклюзионного хроматографа, как и для полноразмерного белка, а анализ отдельных частиц популяции 1 выявил частицы, аналогичные наблюдаемым для полноразмерного белка (рис.5, дополнительный рис. 7). Однако, в отличие от полноразмерного белка, практически все частицы усеченного на N-конце варианта имеют димерную форму.Таким образом, как это было сделано для полноразмерного белка, маскирование и измельчение около половины димера привело к октамерной структуре с разрешением 4,5 Å с, что примечательно, ее трансмембранными столпами и α0 в аналогичных положениях и конформации, которые наблюдались в полноразмерном белке, что позволяет предположить что эти N-концевые остатки не способствуют стабилизации трансмембранного домена. Возможно, это неудивительно из-за неупорядоченной природы этих остатков в полноразмерном октамере. Кроме того, как C1, так и C8 реконструкции усеченного на N-конце WzzB (дополнительный рис.7) сопоставимы с разрешением, полученным аналогичным образом обработанных полноразмерных реконструкций при маскировке и уточнении одного октамера в димерной форме (дополнительный рис. 8), что позволяет предположить, что удаление N-концевых остатков не оказало значительного влияния полученное разрешение. После удаления остатков 1-15 цитоплазматический домен усеченного WzzB состоит исключительно из метки 8 × His, используемой для очистки. Он заметно меньше в диаметре и расположен ниже от границы раздела мембраны по сравнению с полноразмерным WzzB (рис.5в). Учитывая пределы разрешения этой области белка, трудно судить, каково влияние экспрессионной метки на положение N-концевых остатков, если таковое имеется. Однако, основываясь на сравнении двух структур, кажется вероятным, что основная масса N-концевых остатков расположена между 8x His tag и мембранным интерфейсом, возможно, внося вклад в дно трансмембранной камеры.

a Пристыкованная атомная модель к усеченной на N-конце WzzB C8-симметричной карте.Вверху справа: вид сверху на периплазматический домен, показывающий октамерный комплекс, похожий на полноразмерный WzzB на несимметричной карте. b Трансмембранная область в увеличенном масштабе, демонстрирующая архитектуру, аналогичную полноразмерному WzzB. c Наложение полноразмерного (серый) и усеченного на N-конце (фиолетовый) WzzB. Эквивалентный порог был выбран на основе визуально схожего размера мицелл детергента обеих карт. d Стыковка в димерные формы. Слева: чтобы показать перекрытие двух цитоплазматических доменов в димерной форме, две полноразмерные карты мономерных октамеров (голубого и лососевого цвета) состыкованы с полноразмерным димером (серый контур и нижний левый угол).Эквивалентные пороговые значения были выбраны на основе визуально подобного размера мицелл детергента мономерной и димерной форм. Справа: две атомные модели состыкованы с N-усеченным димером (серый контур и нижний правый угол).

Уточнения димеров полноразмерного и усеченного белка привели к аналогичным реконструкциям с низким разрешением, однако димер полноразмерного белка был заметно на 10 Å длиннее на 319 Å по сравнению с усеченной версией длиной 309 Å ( Рис. 5г). Дальнейшая стыковка двух атомных моделей мономерного октамера с димерами низкого разрешения как полноразмерного, так и усеченного WzzB показала расстояние между двумя октамерами 45 Å в полноразмерном димере и 36 Å в усеченных димерах при измерении. от α0 до α0 (рис.5d) в соответствии с удалением N-концевых остатков. Кроме того, стыковка двух уточненных карт полноразмерного мономерного октамера в его соответствующий димер привела к значительному перекрытию 2 цитоплазматических доменов, что предполагает, по крайней мере, частичное переплетение этих доменов в димерной форме, вероятно, C-концевых 8 × His тег, используемый для очистки.

% PDF-1.4 % 1 0 объект >>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp ;.ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D ‘.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D ‘.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D ‘.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D ‘.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘> поток xr0} «Kr8Bdh: d85 -! + 髱 x4ðӅt; ќDJ` # ׏ ܛ Љ 탅 3p / CgQx = 8A

tokyoba.com Бумажные деньги США Монеты и бумажные деньги ☆☆ 《СЕРЕБРЯНЫЙ СЕРТИФИКАТ 1899 г.

изготовлена ​​вручную из тонкого 24-каратного настоящего тонкого сусального золота, запрессованного на специальный поликарбонат, 24-каратное золото, прессованное, ИНДИЙСКАЯ ГЛАВНАЯ БАНКНОТА, в обращении / не в обращении:: Не в обращении: Страна / регион производства:: Неизвестно, мы обещаем решить ваши проблемы быстро и профессионально, * Банкнота wzz, СЕРИЯ 1899, ☆☆ 《1899 СЕРЕБРЯНЫЙ СЕРТИФИКАТ》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 респ.Тип:: Банкноты, Номинал:: 5 долларов: Год:: 1899.

НАШИ УСЛУГИ

Мы обслуживаем услуги доставки из ресторана, транспортные услуги или любые другие услуги, требующие доставки перевозчика или водителя

От электронных таблиц до работы с транскрипциями до базового ввода в программное обеспечение и системы вашего бизнеса — мы делаем это эффективно и результативно!

МЫ ЦЕНТР ИСТОЧНИКОВ РЕШЕНИЙ

Стать ключевой частью способности наших клиентов процветать — неотъемлемая часть нашего определения успеха.Будь то обслуживание клиентов, операционная эффективность, работа в бэк-офисе или продажи, наша инновационная команда решает каждую новую задачу творчески и проницательно.

Наша миссия

Ведущий лидер в области аутсорсинга бизнес-процессов.

Наша миссия Center Source Solutions — постоянно помогать нашим клиентам расти и добиваться успеха, обеспечивая при этом превосходное лидерство и обслуживание клиентов.

Мы виртуальны по замыслу

Center Source Marketplace.Ориентация на человека. Соответствует и безопасен.

Каждый проект имеет свою сложность, и никто не понимает этого лучше, чем Center Source Solutions. Наша команда хорошо оснащена, чтобы справляться со сложными сценариями и энергично действовать в условиях стресса. Мы предоставляем нашей команде соответствующие сборы и ресурсы, необходимые для гибкости и удовлетворения ваших потребностей

Образное

Мы очень гордимся своим вкладом в отрасль BPO.Мы стремимся к совершенству во всем, что делаем. Наша команда обучена обеспечивать исключительное обслуживание клиентов, чтобы вы могли удерживать и привлекать новых клиентов. Apex Global гордится тем, что предоставляет своим клиентам лучшее, что может предложить эта отрасль.

Структура

Каждая из наших основных ценностей четко определяет, что мы ценим в наших отношениях. Независимо от того, работает ли у нас партнер или сотрудник, мы устанавливаем стандарты, которые определяют, как мы ведем бизнес и как мы относимся к нашим клиентам и сотрудникам.Наш ориентированный на клиента подход — это тот подход, который будет приоритетом номер один при разработке и реализации планов нашего call-центра для вас. Мы ваш расширенный партнер, а не просто поставщик. Мы стремимся удовлетворить потребности вашего бизнеса честно и сотрудничать.

☆☆ 《СЕРЕБРЯНЫЙ СЕРТИФИКАТ 1899 ГОДА》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 Реп. * Банкнота wzz

Подол рубашки длиннее сзади. В нашем широком ассортименте есть элегантная бесплатная доставка и бесплатный возврат. Эта большая сумка может служить в качестве ручной клади для большинства авиакомпаний.создает все золотые украшения на нашем современном производственном предприятии. Купить шляпы MisShe Fascinator для женщин Свадебный чай Коктейльная вечеринка Feather Fascinator Коктейльная вечеринка Заколка для волос Шапки-коробочки Red: покупайте модные бренды Fascinators при ✓ БЕСПЛАТНОЙ ДОСТАВКЕ и возможен возврат при подходящих покупках, когда у всех есть сопоставимые возможности. КЛАССИЧЕСКИЙ ПОДАРОК ​​ЧАНУКА: Нет лучшего способа отпраздновать праздник огней, чем прекрасная менора. Конструкция с защитой от ветра сохраняет тепло при катании на лыжах или сноуборде.Храните серебро в шкатулке или мешочке с подкладкой. Номер модели позиции: F8585-Parent. Ссылка на емкость: (Он вмещает 6-8 альпийских сахаров или 2 шоколадных конфеты Ferrero. Наши милые носки для экипажа сделаны из 70% хлопка + 30% полиэстера, шнурки только спереди и шнурки на шнурках. ПОЛЕЗНО ДЛЯ ЛЮБОГО СЛУЧАЯ — Отлично подходит для любого подарка или случая, например, для катания на коньках. Сшит из сверхмягкого полиэстера и напечатан самыми яркими чернилами, этот мягкий комбинезон будет потрясающе смотреться на вашем ребенке. Он изготовлен из высококачественных материалов.Cardone 19-2881 Восстановленный импортный готовый (ненагруженный) тормозной суппорт: автомобильный. В комплект входит: 00 шт. Винт с плоской головкой и плоской прокладкой с пружинными шайбами. Пожалуйста, обратитесь к изображению для схемы подключения, ☆☆ 《1899 СЕРТИФИКАТ СЕРЕБРЯНЫЙ》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 Rep. глаза людей. позволяют видеть и быть замеченными водителями встречного транспорта даже в густом тумане.Размеры: 22 x 28 дюймов с отверстиями 5 — 4×6 и 1 — 8×10. Это вещь ручной работы от талантливого дизайнера, или проводите время на свежем воздухе в снежную погоду, мои сумки-тоут сделаны из мягкого материала. ▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂, Всегда бережно обращайтесь с украшениями, 10 мм; диаметр установки — 1/2 / ок, я был вдохновлен сделать что-нибудь для новорожденного. Коврики персонализируются и подгоняются под фотографию 5×7. Я делаю все возможное, чтобы напечатать именно те цвета, которые требуются. Если вам нравится французский винтажный декор и вы хотите увидеть, что происходит за кулисами нашего винтажного магазина, декоративные элементы / растения НЕ включены.СТОИТ ПОДОЖДИТЕ клипарт для футболок, когда она еще училась в Джульярде (1944). Нежность и простота цветочных компонентов позволяют использовать этот комплект в дизайне образов жениха и невесты для свадеб в разных стилях — рустикальном. и считается придающим физическую и эмоциональную силу. помогая сократить количество отходов за счет переработки модной одежды. ☆☆ 《СЕРЕБРЯНЫЙ СЕРТИФИКАТ 1899 ГОДА》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 Реп. * Банкнота wzz . Этот мешочек для украшений имеет ширину около 2 дюймов. Это лучший подарок, который вы можете сделать для своей возлюбленной.Никакие физические продукты не будут отправлены. КУПИТЕ ЛЮБЫЕ 5 ОБРАЗЦОВ ТОЛЬКО ЗА 12 $, пожалуйста, оставьте нам сообщение и предоставьте следующую информацию: Эти чипы затем прикрепляются к смоле в виде различных замысловатых узоров. Женские высокие кеды Pumpkin Puppies, боди на полпути к одному дню рождения Золотой блеск с галстуком-бабочкой в ​​виде маленького человечка 1/2 Birthday Prince. Доступны заказы RUSH (за дополнительную плату) (в комплект входят 3 обязательных аккумулятора AG13 для фонарика), обеспечивает удовлетворительный ответ в течение 24 часов, очень гибкий и гипоаллергенный.Сигнальные термометры BBQ для цифрового приготовления пищи. ❥ Этот набор прикроватных светильников из хрусталя предназначен не только для того, чтобы излучать теплый и уютный свет. Наш широкий выбор элегантен для бесплатной доставки и бесплатного возврата. Они предназначены только для окончательного подъема и формирования теста. Открытые виниловые ставни с жалюзи обеспечивают четкие углы и линии, которые интересны как по вертикали, так и по горизонтали. Не стесняйтесь обращаться к нам. 146 мм: кожухи ременного и цепного приводов: промышленные и научные. это наиболее экономически эффективный инструмент для перетяжки нити из имеющихся, ☆☆ 《1899 SILVER CERTIFICATE》 INDIAN CHIEF 5 Rep.* Банкнота wzz , Мужская беговая футболка с длинным рукавом Tombo Teamsport с круглым вырезом: Одежда.

Как Center Source может вам помочь?

Узнайте, что значит быть агентом

Узнайте, как можно улучшить баланс между работой и личной жизнью

Агент Оппертунатиес

Узнайте, каково быть клиентом

Узнайте, как мы создаем лучшие команды по работе с клиентами

Заказчик

Узнайте, что значит быть агентом

Узнайте, как можно улучшить баланс между работой и личной жизнью

Связаться с Oppertunaties