Site Loader

Содержание

ЗЭТА

Назначение

Предназначены для автоматического переключения на резерв освещения и силового электрооборудования при исчезновении напряжения основного (рабочего) питания в цепях постоянного и переменного тока с фазным напряжением до 220 В. Переключение потребителей на основное питание осуществляется автоматически при восстановлении напряжения основного питания.

По роду тока цепей нормального и аварийного питания серии включают в себя ящики и шкафы, предусматривающие:

Основное и аварийное питание переменным током — однофазное и трехфазное с нулевым проводом

Основное питание переменным током — однофазное или трехфазное с нулевым проводом, а аварийное — постоянным током.

Возможно изготовление на базе данной серии шкафов ввода с АВР по индивидуальным техническим заданиям (согласованным с заказчиком).

Структура условного обозначения

ХУ8ХХХ — Х2А2Х4:
Х — конструктивное исполнение: Я — ящик, Ш — шкаф;
У — унифицированное (нормализованное) НКУ;

8 класс, объединяющий НКУ защиты, ввода, переключения, регулирования и контроля систем постоянного и переменного тока;

Х — группа НКУ в данном классе:

2 — НКУ ввода и переключения (в том числе аварийного) переменного тока;

3 — НКУ ввода и переключения (в том числе аварийного) постоянного тока;

ХХ — порядковый номер НКУ в данной группе данного класса;

Х —
величина НКУ по току главной цепи, А:

0 — до 25;

2 — до 100;

3 — до 160;

2 — до 100;

5 — до 400;

6 — до 630;

2 напряжение основного ввода (фазные) 220 В постоянного или переменного тока А конструктивное исполнение

2 напряжение резервного ввода (фазные) 220 В постоянного или переменного тока УХЛ4 климатическое исполнение и категория размещения по ГОСТ 15150-69

Степень защиты шкафов IP31.

Конструктивное исполнение напольное или навесное в зависимости от номинального тока. В заказе необходимо указать наименование, тип и типовой индекс НКУ.

Скачать “Технические данные” и “Принциальные схемы” в формате PDF

Шкафы зажимов ШЗН1А, ШЗН1Б, ШЗН2, ШЗН3

     НАЗНАЧЕНИЕ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

     ШЗН1А

     для подключения и распределения вторичных цепей трансформаторов напряжения, устанавливаемых на ЛЭП 330-500 кВ; на шинах 110-500 кВ; на стороне высшего напряжения автотрансформаторов подстанций (энергообъектов) с принципиальной схемой распределительных устройств «Полуторная» и «Многоугольник».

     ШЗН1Б

     для подключения и распределения вторичных цепей трансформаторов напряжения, устанавливаемых на ЛЭП 330-500 кВ; на шинах 110-500 кВ; на стороне высшего напряжения автотрансформаторов подстанций (энергообъектов) с принципиальной схемой распределительных устройств «Полуторная» и «Многоугольник», без автоматического выключателя, используемого для защиты цепей напряжения счетчиков.

     ШЗН1В

     предназначен для подключения и распределения вторичных цепей трансформаторов напряжения с тремя вторичными обмотками, устанавливаемых на ЛЭП 330 – 500 кВ; на шинах 110 – 500 кВ; на стороне высшего напряжения автотрансформаторов подстанций (энергообъектов) с принципиальной схемой распределительных устройств «Полуторная» и «Многоугольник».

     ШЗН2

     для подключения и распределения вторичных цепей трансформаторов напряжения, устанавливаемых на шинах 35 кВ; на стороне низшего напряжения автотрансформатора (трансформатора) и шинах турбогенератора.

     ШЗНЗ-73

     для подключения и распределения вторичных цепей трансформаторов напряжения, устанавливаемых на линиях 35 кВ; на обходной системе шин 110-120 кВ, на стороне 35 кВ автотрансформатора с высшим напряжением 110-120 кВ и других трансформаторов напряжения без дополнительных вторичных обмоток.

     КОНСТРУКТИВНОЕ ИСПОЛНЕНИЕ

     Степень защиты

     IР 21, IР 54

     Климатическое исполнение

     У1, УХЛ1

     КРАТКАЯ ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

     Номинальное напряжение

     220 В, 50Гц

     Номинальный ток, А

     номинальный ток автоматических выключателей

ШЗН-1А ШЗН-1Б ШЗН-2 ШЗН-3 ШЗН-4 шкафы зажимов трансформаторов напряжения изготовление производство ШЗН-1А ШЗН-1Б ШЗН-2 ШЗН-3 ШЗН-4 шкафов зажимов трансформаторов

ШЗН шкаф зажимов трансформаторов
ШЗН шкаф зажимов трансформаторов

ШЗН-1А шкаф зажимов используется для подключения и распределения вторичных цепей трансформаторов напряжения, устанавливаемых на ЛЭП 330-500 кВ, на шинах 110-500 кВ, на стороне высшего напряжения автотрансформаторов подстанций (энергообъектов) с принципиальной схемой распределительных устройств «Полуторная» и «Многоугольник».

ШЗН-1Б шкаф зажимов предназначен для подключения и распределения вторичных цепей трансформаторов напряжения, устанавливаемых на ЛЭП 330-500 кВ, на шинах 110-500 кВ, на стороне высшего напряжения автотрансформаторов подстанций (энергообъектов) с принципиальной схемой распределительных устройств «Полуторная» и «Многоугольник» без автоматического выключателя, используемого для защиты цепей напряжения счетчиков.

ШЗН-2 шкаф зажимов применяется для подключения и распределения вторичных цепей трансформаторов напряжения, устанавливаемых на шинах 35 кВ, на стороне низжего напряжения автотрансформатора (трансформатора) и шинах турбогенератора.

ШЗН-3 шкаф зажимов применяется для подключения и распределения вторичных цепей трансформаторов напряжения, устанавливаемых на линиях 35 кВ, на обходной системе шин 110-220 кВ, на стороне 35 кВ автотрансформатора с высшим напряжением 110-220 кВ и других трансформаторов напряжения без дополнительных вторичных обмоток

ШЗН-1А ШЗН-1Б ШЗН-2 ШЗН-3 ШЗН-4

шкафы зажимов трансформаторов напряжения конструкция

ШЗН шкафы зажимов трансформаторов представляют собой жесткую металлическую конструкцию, состоящую из бескаркасного сварного корпуса и дверей, обеспечивающих их одностороннее или двустороннее обслуживание.Установка (крепление) ШЗН шкафов зажимов трансформаторов

в зависимости от типа обеспечивает напольное, навесное или утопленное исполнение.

Замки дверей всех ШЗН шкафов зажимов трансформаторов, одновременно поставляемых одному потребителю, открываются одним ключом. По периметру двери ШЗН шкафов зажимов трансформаторов имеют уплотнения, выполненные из полиуретановой пены, устойчивой к деформациям. Вводы кабелей имеют сальниковые уплотнения. В ШЗН шкафов зажимов трансформаторов предусмотрена возможность концевой разделки кабелей и устновки их в количестве, обусловленном схемой соединения данных ШЗН шкафов зажимов трансформаторов. В ШЗН шкафах зажимов трансформаторов предусмотрены съемные элементы для креплления кабелей и проводов, питающих силовые и вспомогательные цепи. Конструкция шкафов ШЗН предусматривает возможность ремона или замены любого аппарата при полностью снятом напряжении.

Масса ШЗН шкафов зажимов трансформаторов соответствует указанной в конструкторской документации, в пределах +/-15%.ШЗН шкафы зажимов трансформаторов имеют защитные покрытия, обеспечивающие их длительную эксплуатацию в условиях воздействия климатических факторов внешней среды,

ШЗН-1А ШЗН-1Б ШЗН-2 ШЗН-3 ШЗН-4

шкафы зажимов трансформаторов напряжения структура условного обозначения

ШЗН — Х — IP54 — Х

Шкаф зажимов трансформаторов напряжения.

ШЗН — Х — IP54 — Х

Модификация: 1А, 1Б, 2, 3, 4

ШЗН — Х — IP54 — Х

Степень защиты по ГОСТ 14254-96: IP54.

ШЗН — Х — IP54 — Х

Климатическое исполнение по ГОСТ 15150-69: У1, УХЛ1.

ШЗН-1А ШЗН-1Б

шкафы зажимов трансформаторов напряжения структура технические характеристики

Номинальное напряжение переменного тока частотой 50 Гц, В

220/380

Номинальный ток, А

16

Количество автоматических выключателей, установленных в шкафу, шт.

3

Количество рубильников, установленных в шкафу, шт.

12

Климатическое исполнение и категория размещения по ГОСТ 15510-69

У1, УХЛ1

Степень защиты по ГОСТ 14524-96

IP54

Вид системы заземления

TN-C(S)

Габаритные размеры, мм (высота х глубина х ширина)

1000 х 400 х 600

Масса не более, кг

71

ШЗН-2

шкафы зажимов трансформаторов напряжения структура технические характеристики

Номинальное напряжение переменного тока частотой 50 Гц, В

220/380

Номинальный ток, А

16

Количество автоматических выключателей, установленных в шкафу, шт.

4

Количество рубильников, устанавливаемых в шкафу, шт

11

Климатическое исполнение и категория размещения по ГОСТ 15510-69

У1, УХЛ1

Степень защиты по ГОСТ 14524-96

IP54

Вид системы заземления

TN-C(S)

Габаритные размеры, мм (высота х глубина х ширина)

1000 х 400 х 600

Масса не более, кг

71

ШЗН-3

шкафы зажимов трансформаторов напряжения структура технические характеристики

Номинальное напряжение переменного тока частотой 50 Гц, В

100

Номинальный ток, А

16

Количество автоматических выключателей, установленных в шкафу, шт.

1

Количество рубильников, устанавливаемых в шкафу, шт

7

Климатическое исполнение и категория размещения по ГОСТ 15510-69

У1, УХЛ1

Степень защиты по ГОСТ 14524-96

IP54

Вид системы заземления

TN-C(S)

Габаритные размеры, мм (высота х глубина х ширина)

1000 х 400 х 600

Масса не более, кг

71

Цена от 3000 RUB завистит от комплектации ШЗН-1А ШЗН-1Б ШЗН-2 ШЗН-3 ШЗН-4 шкафы зажимов трансформаторов напряжения нет в наличии, под заказ

Шкаф зажимов трансформаторов напряжения ШЗН-1А ПАСПОРТ

ПАСПОРТ. Шкаф зажимов выключателя ШЗВ-90

ПАСПОРТ Шкаф зажимов выключателя ШЗВ-90 1 Основные сведения об изделии Шкаф зажимов выключателя ШЗВ-90 на 90 клемм предназначен для коммутации вторичных цепей электростанций и подстанций. Имеет в своем

Подробнее

Шкаф обогрева выключателей ШОВ-2 ПАСПОРТ

Шкаф обогрева выключателей ШОВ-2 ПАСПОРТ УТРЛ.3433434.010.ПС 1 Основные сведения об изделии Шкаф обогрева выключателей предназначен для питания обогрева выключателей и их приводов с мощностью нагревателей

Подробнее

ПАСПОРТ. Модульный АВР 19″

ПАСПОРТ Модульный АВР 19″ Модульный АВР 19″ ПАСПОРТ 1 Основные сведения об изделии Модульный однофазный АВР 19 на два ввода с приоритетом первого ввода предназначен для автоматического переключения, в

Подробнее

Модульный АВР 19″ ПАСПОРТ

Модульный АВР 19″ ПАСПОРТ 1 Основные сведения об изделии Модульный однофазный ШВРА 19 на два ввода с приоритетом первого ввода. Приоритет ввода выбирается переключателем. Предназначен для автоматического

Подробнее

Электронный термостат ET-1301 ПАСПОРТ

ООО «Уралэнерготел» Электронный термостат ET-1301 ПАСПОРТ 1 Основные сведения об изделии Электронный термостат ET-1301 предназначен для автоматического поддержания температуры воздуха внутри шкафа в заданных

Подробнее

Шкаф видеонаблюдения КУРС ВН ПАСПОРТ

Шкаф видеонаблюдения КУРС ВН ПАСПОРТ Содержание 1 Основные сведения об изделии… 2 2 Основные технические данные… 2 3 Устройство шкафа КУРС ВН… 4 4 Комплектность… 10 5 Гарантии изготовителя…

Подробнее

Термошкаф серии U-Therm ПАСПОРТ

Термошкаф серии U-Therm ПАСПОРТ 2 1 Основные сведения об изделии Термошкаф предназначен для установки в него электронного оборудования, защиты этого оборудования от внешних воздействий окружающей среды

Подробнее

Шкаф СОТИАССО ПАСПОРТ УТРЛ ПС

Шкаф СОТИАССО ПАСПОРТ УТРЛ.424229.001.ПС Содержание 1 Основные сведения об изделии… 3 2 Основные технические данные… 3 3 Устройство шкафа… 3 4 Меры безопасности… 5 5 Комплектность… 5 6 Гарантии

Подробнее

СОДЕРЖАНИЕ. Версия: _А6

СОДЕРЖАНИЕ 1 НАЗНАЧЕНИЕ… 2 2 ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ… 2 3 ОБОЗНАЧЕНИЕ ПРИ ЗАКАЗЕ… 3 4 КОМПЛЕКТНОСТЬ… 3 5 УСТРОЙСТВО И ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ… 3 6 МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ… 3 7 МОНТАЖ… 4 8 УПАКОВКА…

Подробнее

БЛОК ПИТАНИЯ БП 220/24-1

Н Т Ц «М е х а н о т р о н и к а» 42 3751 код продукции при поставке на экспорт Утвержден — ЛУ место штампа «Для АЭС» БЛОК ПИТАНИЯ Зав. Паспорт 2 Содержание Лист 1 Основные технические данные… 3 2 Комплектность…

Подробнее

РУП «Белэлектромонтажналадка»

РУП «Белэлектромонтажналадка» БЛОК ПИТАНИЯ ОТ ТОКОВЫХ ЦЕПЕЙ БПТМ610-01 ПАСПОРТ ПШИЖ 12.00.00.00.00.007 ПС БЕЛАРУСЬ 220050, г. Минск, ул. Революционная 8, т./ф. (017) 226-88-11, 226-88-02 СОДЕРЖАНИЕ 1 Основные

Подробнее

ПОЛКУ-БТЭЛ-6(10)-У1 ПАСПОРТ

Пункт отключения линии и коммерческого учета электроэнергии на напряжение 6-10 кв наружной установки на опорах воздушных линий электропередачи ПОЛКУ-БТЭЛ-6(10)-У1 ПАСПОРТ ПКУ соответствует ТУ BY 190966098.003-2014

Подробнее

БП 96 / 24-2 / DIN БП 96 / 36-2/ DIN

Научно-производственное предприятие ИСТОЧНИКИ ПИТАНИЯ ПОСТОЯННОГО ТОКА СЕРИИ БП 96 БП 96 / 24-2 / DIN БП 96 / 36-2/ DIN Паспорт 2 СОДЕРЖАНИЕ 1. Назначение………… 4 2. Технические данные и характеристики…….

Подробнее

БЛОК ВОЛЬТДОБАВОЧНЫЙ БВ-4/50

Монтажно-наладочное республиканское унитарное предприятие «Белэлектромонтажналадка» БЛОК ВОЛЬТДОБАВОЧНЫЙ Паспорт ПШИЖ 118.00.00.00.001 ПС БЕЛАРУСЬ 220050, г. Минск, ул. Революционная 8, т./ф. (017) 226-88-02,

Подробнее

454085, г. Челябинск, пр. Ленина 2к, оф. 800, тел./факс: (351) ,

Общество с ограниченной ответственностью «АДС Энергия» 454085, г. Челябинск, пр. Ленина 2к, оф. 800, тел./факс: (351) 771-88-88, [email protected] ОКП 42 3200 по питающей сети БПД-PLC.01.AI3.485 ПАСПОРТ

Подробнее

ТОВ «»ПРОМЕЛ ЕНЕРГОАВТОМАТИКА

ТОВ «»ПРОМЕЛ ЕНЕРГОАВТОМАТИКА http://г СТАБИЛИЗАТОР НАПРЯЖЕНИЯ ТИП СН-600 П А С П О Р Т ПЕС.ПС 2006 2. Стабилизатор напряжения тип СН-600 (в дальнейшем «стабилизатор») предназначен для питания различных

Подробнее

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ ООО «ОМ-ГРУПП»

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ ООО «ОМ-ГРУПП» ШКАФ УЧЕТА ЭЛЕКТРОЭНЕРГИИ НАСТЕННЫЙ Ohm POINT 100А ПАСПОРТ 2014 г. г. Екатеринбург 1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ ОБ ИЗДЕЛИИ Наименование изделия: Шкаф учета Ohm POINT 100А. Обозначение

Подробнее

ОКПД ШМ9. Шкаф монтажный. Паспорт РБЯК ПС

ОКПД2 27.12.31 Шкаф монтажный Паспорт РБЯК.656325.046-03 ПС Введение Шкаф монтажный (шкаф) предназначен для размещения и монтажа составных частей теплосчетчика ТСК9. Наименование и почтовый адрес изготовителя:

Подробнее

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ ОБ ИЗДЕЛИИ

изм.3 1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ ОБ ИЗДЕЛИИ 1.1. Метка с автономным питанием ЭСКОРТ Радиус-В предназначен для совместной работы с считывателем меток ЭСКОРТ-С и служит для передачи данных по радиоканалу на частоте

Подробнее

Датчик температуры «ТД-2»

ООО «МНПП Сатурн» Датчик температуры «ТД-2» Паспорт ООО «МНПП Сатурн», 2017 ОГЛАВЛЕНИЕ НАЗНАЧЕНИЕ… 3 ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ… 3 УСТРОЙСТВО И РАБОТА… 4 КОНСТРУКЦИЯ И СХЕМА ПОДКЛЮЧЕНИЯ… 4 УПАКОВКА…

Подробнее

454085, г. Челябинск, пр. Ленина 2к, оф. 800, тел./факс: (351) ,

О б щ е с т в о с о г р а н и ч е н н о й о т в е т с т в е н н о с т ь ю «АДС Энергия» 454085, г. Челябинск, пр. Ленина 2к, оф. 800, тел./факс: (351) 771-88-88, [email protected] ОКП 42 1800 Блок управления

Подробнее

Источник питания РБП-12-7

Источник питания РБП-12-7 ПАСПОРТ СТАЕ.436121.001ПС ООО «Основа Безопасности», Россия, 355000, г. Ставрополь, ул. Ковалева 19 1. Основные сведения об изделии и технические данные 1.1. Основные сведения

Подробнее

ОДНОФАЗНЫЙ СЕТЕВОЙ ФИЛЬТР NF11-50-M1

ОДНОФАЗНЫЙ СЕТЕВОЙ ФИЛЬТР NF11-50-M1 ПАСПОРТ ADDM.433581.007-01 ПС Адрес предприятия-изготовителя: 143989, Россия, Московская область, г. Балашиха, мкр. Железнодорожный, ул. Маяковского, д. 16 ООО Матрица

Подробнее

ЗАЩИТНОЕ УСТРОЙСТВО АЛЬБАТРОС-1500 DIN

ЗАЩИТНОЕ УСТРОЙСТВО АЛЬБАТРОС-1500 DIN РУКОВОДСТВО ПО ЭКСПЛУАТАЦИИ ФИАШ.425519.190 РЭ Благодарим Вас за выбор нашего защитного устройства АЛЬБАТРОС-1500 DIN Перед эксплуатацией ознакомьтесь с настоящим

Подробнее

2. ТЕХНИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ И ХАРАКТЕРИСТИКИ

1. НАЗНАЧЕНИЕ Источники питания постоянного тока серии БП-98 (далее источники питания) предназначены для преобразования сетевого напряжения 220В в стабилизированное напряжение 5 36В. Прибор выпускается

Подробнее

БЛОК ИНТЕРФЕЙСНЫЙ БИ-М2

Инв. подл. Подп. и дата Взам. инв. Инв. дубл. Подп. и дата Научно-производственное предприятие «Томская электронная компания» Утвержден ОФТ.20.671.00.00 ПС-ЛУ БЛОК ИНТЕРФЕЙСНЫЙ БИ-М2 ПАСПОРТ ОФТ.20.671.00.00

Подробнее

1 Основные сведения об изделии

Основные сведения об изделии. Блок измерения и защиты трансформаторного включения БИЗ Ф- (далее — блок) предназначен для распределения и учета электрической энергии в трехфазных сетях напряжением (0-0)/(08-400)

Подробнее

Паяльная станция «Магистр Ц20-ДВ»

ООО НТЦ Магистр-С Паяльная станция «Магистр Ц20-ДВ» Руководство по эксплуатации и паспорт г. Саратов 201 г. 1 Оглавление I. ТЕХНИЧЕСКОЕ ОПИСАНИЕ 1.1 Назначение 1.2 Технические характеристики 1.3 Описание

Подробнее

ТРАНСФОРМАТОР ТОКА Т-0,66-1-У3

ОКП 341440 код ТН ВЭД России 8504313900 ТРАНСФОРМАТОР ТОКА Т-0,66-1-У3 ПАСПОРТ КЦНС.671113.005 ПС Разработал инженер-конструктор Проверил инженер-конструктор С.С. Фарамазян А.И. Лелеко Нормоконтроль Утверждаю

Подробнее

ЗАЩИТНОЕ УСТРОЙСТВО АЛЬБАТРОС-1500 DIN

ЗАЩИТНОЕ УСТРОЙСТВО АЛЬБАТРОС-1500 DIN РУКОВОДСТВО ПО ЭКСПЛУАТАЦИИ ФИАШ.425519.131 РЭ Благодарим Вас за выбор нашего защитного устройства. Настоящее руководство по эксплуатации предназначено для ознакомления

Подробнее

Конвертер интерфейсов Б406

ПАСПОРТ CТАЕ.431295.108ПС ООО «Основа Безопасности», Россия, 355000, г. Ставрополь, ул. Ковалева 19 1. Основные сведения об изделии и технические данные 1.1. Основные сведения об изделии / Наименование

Подробнее

ИНДИГИРКА ИД-ШУП-02-1С

ОКП 43 7241 СИГМА ИНДИГИРКА КОНЦЕНТРАТОР ПИТАНИЯ ИД-ШУП-02-1С ПАСПОРТ НЛВТ.425668.020-02 ПС Москва 2017 СОДЕРЖАНИЕ 1. Назначение… 3 2. Основные сведения об изделии… 3 3. Свидетельство о приемке…

Подробнее

РУП «Белэлектромонтажналадка»

РУП «Белэлектромонтажналадка» БЛОК ПИТАНИЯ ОТ ТОКОВЫХ ЦЕПЕЙ БПТ-615 ПАСПОРТ ПШИЖ 190.00.00.001 ПС БЕЛАРУСЬ 220050, г. Минск, ул. Революционная 8, т./ф. (017) 226-88-11, 226-88-02 1 СОДЕРЖАНИЕ 1 Описание

Подробнее

РУП «Белэлектромонтажналадка»

РУП «Белэлектромонтажналадка» ПАСПОРТ РЕЛЕ МИГАЮЩЕГО СВЕТА РМС-02 ПШИЖ 132.00.00.00.001 ПС БЕЛАРУСЬ 220050, г. Минск, ул. Революционная 8, т./ф. (017) 226-88-11, 226-81-02 2 СОДЕРЖАНИЕ 1 Описание и работа

Подробнее

РЕЛЕ ВРЕМЕНИ ЭНИ-480Н ЭИ ПС

РЕЛЕ ВРЕМЕНИ ЭНИ-480Н ЭИ.167.00.000ПС Паспорт Руководство по эксплуатации www.eni.nt-rt.ru По вопросам продаж и поддержки обращайтесь: Волгоград (844)278-03-48, Воронеж (473)204-51-73, Екатеринбург (343)384-55-89,

Подробнее

ИСТОЧНИК ПИТАНИЯ ПОСТОЯННОГО ТОКА

ИСТОЧНИК ПИТАНИЯ ПОСТОЯННОГО ТОКА Руководство по эксплуатации По вопросам продаж и поддержки обращайтесь: Астана +7(7172)727-132, Волгоград (844)278-03-48, Воронеж (473)204-51-73, Екатеринбург (343)384-55-89,

Подробнее

Паспорт АВМР ПС

ОКП 421718 УСТРОЙСТВО КОНТРОЛЯ НАЛИЧИЯ НАПРЯЖЕНИЯ АВМ-УКН Паспорт АВМР.421718.001 ПС 1 НАЗНАЧЕНИЕ Устройство контроля наличия напряжения АВМ-УКН (в дальнейшем устройство АВМ-УКН, АВМ-УКН) предназначено

Подробнее

Завод щитового электрооборудования «ТПЭ-Тяжпромэлектро» — Каталог продукции

ООО «ТПЭ-Тяжпромэлектро» производит следующие типы щитового электрооборудования:

  • Панели распределительных щитов ЩО2002Т, ЩО-70, ЩО-91, ЩО-94, ЩО-96, ЩО-01 и др.
  • Низковольтные комплектные устройства распределения электроэнергии РУСН-0,4, РУНН-0,4, РУ-0,4.
  • Шкафы распределительные низкого напряжения серии ШРНН.
  • Главные распределительные щиты ГРЩ.
  • Вводно-распределительные устройства УВРТ, ВРУМТ, ВРУ-8506Т, ВРУ8138Т, ВРУ8504, УВР-8505 и др.
  • Шкафы учёта электроэнергии ШУЭТ, ШУЭ, ШУ-1, ШУ-2, ШУ-1/Т, ШУ-2/Т.
  • Шкафы ввода, учёта и распределения электроэнергии ПР8808Т, ПР8512Т, ПР8712Т и др.
  • Шкафы распределительные силовые серий ШР, ШРС и др.
  • Щиты больничные распределительные НКУ ШБРТ (панели и шкафы ввода с АВР типов АВР1, АВР2, АВР3; панели с разделительным трансформатором РТ, шкафы и панели распределения типов РП2, РП3).
  • Ящики управления вентиляторами типа В4.
  • Ящики силовые ЯАТ, ЯА03Т, Я8105М, Я8101, Я8102.
  • Ящики силовые серий ЯРТ, ЯБ, ЯВ, ЯС, ЯРП, ЯРПТ, ЯБПВУ и др.
  • Ящики с разделительным трансформатором ЯРТТ, ЯТТ, ЯТП-0,25 и др.
  • Ящики соединительные ЯСТ, шкафы ГЗШ.
  • Ящики управления асинхронными двигателями с короткозамкнутым ротором серий ШУДД, Я5000, ШУ5000, РУСМ5000, щиты станций управления ЩСУ и др.
  • Низковольтные комплектные устройства для питания электроприводов арматуры и электродвигателей механизмов мощностью до 28кВт РТЗО-88М, РТЗО-88В и др.
  • Низковольтные комплектные устройства управления, защиты, сигнализации и автоматики серии ЯЭ(ШЭ)1400.

  • Шкафы управления насосами ШУН-1, ШУН-2 с блоками управления БУ1-Т, БУ2-Т.

  • Блоки и панели управления асинхронными двигателями с короткозамкнутым ротором серий Б5000, П5000.

  • Подстанционные ящики ЯЗВМ(ШЗВ), ЯЗНМ(ШЗН)-1А(Б), ЯЗНМ(ШЗН)-2А(Б), ЯЗНМ(ШЗН)-3, ЯОВМ(ШОВ)-2, ЯЗШМ(ШЗШ)-1(2), ЯЗШМ(ШЗШ)-3, ЯПВМ(ШПВ)-1(2,3), ЯУРМ(ШУР) и др.

  • Ящики собственных нужд ЯСН-В, ШПСН, ШПСН-В и др.

  • Ящики и шкафы АВР серий АВРТ, АВР1(3)Т, ЩАП, ЯУ8000, ШУ8000, ШАВР и др.

  • Блоки и панели АВР БУ8250, ШУ8250.

  • Вводно-распределительные шкафы наружного освещения ВРШ-НО.

  • Шкафы управления наружным освещением серий ЯОУТ (ШУОТ), ЯУО1(3)Т, ЯУО, ШОУ.

  • Щитки осветительные серий ЩОГТ, ОЩВ, ОЩ, ОП, ОПВ, ЩО, ЩН, ЩУ и др.

  • Устройства этажные типов УЭРВ, УЭРН, УЭРК, УЭБ, УЭРМ, УЭРБ и др.

  • Щитки и ящики квартирные ЩКТ, ЯК, ЩК, ЩКУ, ЩКР и др.

  • Щитки механизации строительства ЩМТ, ЩМ и др.

  • Щиты сигнализации.

  • Щиты этажные, коттеджные, гаражные и др.

  • Шкафы, щиты автоматики ША, ЩА и др.

  • Оборудование систем наземного электроснабжения спецтоками.

  • Пульты и щиты для стендов испытания авиадвигателей.

  • Щиты питания для стройплощадок НКУ СП.

  • Нетиповые НКУ по схеме заказчика.

  • Шкаф (Ящик) трансформатора напряжения ШЗН (ЯЗНМ)

    Шкаф (Ящик) трансформатора напряжения ШЗН (ЯЗНМ)

    Назначение:
    Ящик трансформатора напряжения ЯЗНМ предназначен для подключения и распределение вторичных цепей трансформаторов напряжения, устанавливаемых на шинах 110-750кВ подстанций, на шинах 35кВ подстанций и на обходной системе шин 110-220кВ.

    Технические характеристики:

    Номинальное рабочее напряжение, кВ

    220/380/660/750

    Номинальная частота, Гц

    50

    Номинальный ток, А

    25/40

    Вид системы заземления

    TN-C (S)

    Климатическое исполнение

    У, У1, У2, У3, УХЛ1, УХЛ2, УХЛ, УХЛ4, ХЛ1,ХЛ2

    Масса, кг, не более

    70

    Рабочее положение

    вертикальное, ±50


    Условные обозначения:

    Ящик трансформатора напряжения ЯЗНМ -X-X-X

    Ящик трансформатора напряжения

    Ящик трансформатора напряжения ЯЗНМ -X-X-X

    Количество клемм

    Ящик трансформатора напряжения ЯЗНМ -X-X-X

    Степень защиты:

    IP31

    IP54

    IP65

    Ящик трансформатора напряжения ЯЗНМ -X-X-X

    Климатическое исполнение:

    У

    УХЛ1

    УХЛ2

    УХЛ3

    УХЛ4

    ХЛ


    Тип изделий:

    Наименование

    Кол-во клемм, шт

    Ящик ЯЗНМ-30

    30

    Ящик ЯЗНМ -35

    35

    Ящик ЯЗНМ -60

    60

    Ящик ЯЗНМ -90

    90

    Ящик ЯЗНМ -120

    120

    Ящик ЯЗНМ -150

    150

    Ящик ЯЗНМ -190

    190

    Ящик ЯЗНМ -200

    200

    Ящик ЯЗНМ 1А

    По запросу

    Ящик ЯЗНМ 1Б

    По запросу

    Ящик ЯЗНМ 2А

    По запросу

    Ящик ЯЗНМ 2Б

    По запросу

    Ящик ЯЗНМ 3

    По запросу

    Условия эксплуатации:
    Ящик трансформатора напряжения ЯЗНМ предназначен для эксплуатации в следующих условиях:
    • в части воздействия климатических факторов внешней среды исполнение по ГОСТ 15150-69 – У,
    • в части воздействия механических факторов – группа условий эксплуатации М1 по ГОСТ 17516-72;
    • высота над уровнем моря – не более 2000 м;
    • рабочее положение в пространстве – вертикальное;
    • температура окружающего воздуха – в соответствии с климатическим исполнением по ГОСТ 15150-69;
    • степень загрязнения окружающей среды – 3 по ГОСТ Р 51321.1-2000.

     

    Перейти в другие разделы:

    Дополнение мутантов wzz. Кодирующая область

    Контекст 1

    … wzz1 находится в начале локуса О-антигена, был проведен анализ комплементации. Кодирующую область каждого гена вставляли в вектор pMMB66HE под контролем промотора Ptac. Изопропил-D-тиогалактопиранозид (IPTG) был использован для индукции экспрессии белков, а образцы LPS были приготовлены из дополненных штаммов (рис. 2). Наличие одного вектора во всех штаммах не повлияло на картину полосатости ЛПС (рис.2, дорожки 1, 4, 7 и 10). Сверхэкспрессия каждого гена в PA103 дикого типа приводила к небольшому увеличению соответствующих длин цепей, о чем свидетельствует более темное окрашивание; предоставление PA103 дикого типа с wzz1 в транс привело к увеличению количества …

    Context 2

    … 4, 7 и 10). Сверхэкспрессия каждого гена в PA103 дикого типа приводила к небольшому увеличению соответствующих длин цепей, о чем свидетельствует более темное окрашивание; Обеспечение PA103 дикого типа wzz1 в транс привело к увеличению количества длинных цепей на бактериальной поверхности, в то время как сверхэкспрессия wzz2 приводила к большему количеству длинных цепей с очень длинной цепью (рис.2, полосы 2 и 3). Когда мутанту wzz1 была предоставлена ​​последовательность, кодирующая wzz1 в транс, стало очевидным более темное окрашивание, подобное тому, что наблюдается у дикого типа, что указывает на восстановление предпочтения длинной цепи (фиг. 2, дорожка 5). Предоставление кодирующей последовательности wzz2 в транс к мутанту wzz2 позволило получить очень длинную …

    Context 3

    … длину цепи на бактериальной поверхности, в то время как сверхэкспрессия wzz2 приводила к еще с очень длинной цепочкой (рис.2, полосы 2 и 3). Когда мутанту wzz1 была предоставлена ​​последовательность, кодирующая wzz1 в транс, стало очевидным более темное окрашивание, подобное тому, что наблюдается у дикого типа, что указывает на восстановление предпочтения длинной цепи (фиг. 2, дорожка 5). Предоставление кодирующей последовательности wzz2 в транс к мутанту wzz2 позволило продуцировать очень длинный O-антиген, который отсутствовал в мутанте (рис. 2, дорожка 9). Трансформация генов wzz в двойной мутант привела к созданию паттернов LPS-бэндинга, которые были аналогичны таковым у одиночных мутантов гена, который все еще отсутствовал (рис….

    Контекст 4

    … с кодирующей последовательностью wzz1 в транс, более темное окрашивание, подобное тому, что наблюдается у дикого типа, было очевидным, что указывает на восстановление предпочтения длинной цепи (рис. 2, дорожка 5). Предоставление кодирующей последовательности wzz2 в транс к мутанту wzz2 позволило продуцировать очень длинный O-антиген, который отсутствовал в мутанте (рис. 2, дорожка 9). Трансформация генов wzz в двойной мутант привела к созданию паттернов LPS-бэндинга, которые были аналогичны таковым у одиночных мутантов гена, который все еще отсутствовал (рис.2, дорожки 11 и 12). Мы также выполнили кросс-комплементацию, которая не проводилась в исследовании Daniels et al. (5) с использованием мутантов wzz PAO1. Мы обнаружили, что …

    Контекст 5

    … одиночные мутанты гена, который все еще отсутствовал (рис. 2, дорожки 11 и 12). Мы также выполнили кросс-комплементацию, которая не проводилась в исследовании Daniels et al. (5) с использованием мутантов wzz PAO1. Мы обнаружили, что предоставление любого гена wzz другому мутанту wzz приводит к избыточному производству длины цепи, экспрессируемой клонированным геном (рис.2, дорожки 6 и …

    Контекст 6

    … не просто восстановить шаблон полосатости LPS PA103 дикого типа. Оказалось, что сверхэкспрессия одного белка Wzz ингибирует активность оставшегося белка Wzz, кодируемого хромосомами. В то время как это имело место для дополненного мутанта wzz2, в котором было уменьшено количество длин длинной цепи, когда wzz2 экспрессировался в транс (рис. 2, дорожка 9) по сравнению с пустым вектором (рис. 2, дорожка 7), об этом лучше всего свидетельствует дополнение мутанта wzz1 (рис.2, дорожка 5). Когда wzz1 предоставлялся в транс в мутанте wzz1, экспрессия очень длинного О-антигена терялась, несмотря на присутствие гена wzz2 дикого типа в хромосоме. Это контрастирует с тем, что было видно …

    Контекст 7

    … шаблон. Оказалось, что сверхэкспрессия одного белка Wzz ингибирует активность оставшегося белка Wzz, кодируемого хромосомами. В то время как это имело место для комплементарного мутанта wzz2, у которого было уменьшено количество длин длинной цепи, когда wzz2 экспрессировался в транс (рис.2, дорожка 9) по сравнению с пустым вектором (рис. 2, дорожка 7), об этом лучше всего свидетельствует дополнение мутанта wzz1 (рис. 2, дорожка 5). Когда wzz1 предоставлялся в транс в мутанте wzz1, экспрессия очень длинного О-антигена терялась, несмотря на присутствие гена wzz2 дикого типа в хромосоме. Это контрастирует с тем, что было замечено в дополнении одиночного wzz …

    Context 8

    … оставшегося хромосомно-кодируемого белка Wzz. В то время как это имело место для комплементарного мутанта wzz2, у которого было уменьшено количество длин длинной цепи, когда wzz2 экспрессировался в транс (рис.2, дорожка 9) по сравнению с пустым вектором (рис. 2, дорожка 7), об этом лучше всего свидетельствует дополнение мутанта wzz1 (рис. 2, дорожка 5). Когда wzz1 предоставлялся в транс в мутанте wzz1, экспрессия очень длинного О-антигена терялась, несмотря на присутствие гена wzz2 дикого типа в хромосоме. Это контрастирует с тем, что наблюдалось при комплементации одиночных мутантов wzz штамма PAO1; сверхэкспрессия в trans любого из белков Wzz не была заметна …

    Контекст 9

    … монтажные комплексы. Наши результаты хорошо согласуются с этой моделью и предполагают, что комплекс, который включает один белок Wzz, может мешать активности комплексов, содержащих другой белок Wzz, как видно, когда сверхэкспрессия wzz1 ингибировала продукцию очень длинного регулируемого О-антигена. геном wzz2, все еще присутствующим в хромосоме (рис. 2, дорожка …

    Структура полноразмерной бактериальной полисахаридной сополимеразы

    Олигомерное состояние и общая архитектура

    Анализ полностью очищенного методом сродства металла длина WzzB полисахарид-сополимеразный комплекс E.coli с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) выявила небольшое плечо (популяция 1), элюирующееся немного раньше основного пика элюции (популяция 2) (дополнительный рис. 1a), соответствующее размерам 550 и 220 кДа, соответственно (на основе калибровки SEC). стандарты). Для дальнейшей оценки размера, чистоты и стабильности комплекса фракции SEC, соответствующие двум популяциям, были проанализированы с использованием денатурирующего (SDS-) и Blue-native (BN-) PAGE (дополнительный рис. 1b, c). Дальнейший анализ с помощью SDS-PAGE подтверждает присутствие WzzB с кажущейся молекулярной массой ~ 45 кДа, соответствующей мономеру.Анализ BN-PAGE выявил толстые выступающие полосы в диапазоне от ~ 950 до ~ 600 кДа для популяции 1 и от ~ 600 до ~ 300 кДа для популяции 2 (на основе глобулярных нативных маркеров PAGE), что соответствует большой олигомерной структуре, хотя и немного больше, чем примерные размеры основаны на стандартах SEC. Несмотря на кажущиеся большие размеры, визуализация двух популяций с помощью как отрицательной окрашенной, так и криоэлектронной микроскопии выявила материал, пригодный для анализа отдельных частиц, только из популяции 1 (дополнительный рис.1в, г). Несмотря на наличие очищенных молекул WzzB размера, который должен быть виден с помощью электронной микроскопии, популяция 2 не содержала наблюдаемых комплексов, которые можно было бы проанализировать с использованием метода отдельных частиц. Однако анализ этой популяции с отрицательным окрашиванием выявил мелкие частицы разного размера и формы, которые нельзя было точно измерить. Это может указывать на то, что эта популяция содержит множественные олигомерные состояния WzzB, которые в этих условиях по какой-либо причине не собираются в большие октамерные комплексы, наблюдаемые в популяции 1.Это предположительно согласуется с предыдущими экспериментами по сшиванию, которые предполагают, что олигомеризация Wzz является высокодинамичной по своей природе 22,23,24,25 . Это также может быть следствием системы на основе промотора Т7, используемой для сверхэкспрессии белка и / или детергента, используемого для извлечения комплекса из мембраны.

    В целом, общая архитектура напоминает коробчатую медузу, содержащую большой периплазматический домен колоколообразной формы, аналогичный тому, что сообщалось ранее 12,13,19,20 , и, что особенно важно, 8 трансмембранных доменов, окружающих большую трансмембранную камеру (рис.1). Без применения симметрии или приблизительного / предполагаемого объема для комплекса протомеров, в результате одночастичного анализа был идентифицирован октамерный комплекс (рис. 1). Октамерная природа комплекса была идентифицирована с помощью безреференсной ab initio трехмерной классификации и четко видна на несимметричной (C1) карте. Восстановленная карта без применения симметрии привела к общему разрешению 3,4 Å (дополнительный рисунок 2), а оценка местного разрешения предполагает, что большой периплазматический домен в форме колокола доминирует в процессе совмещения изображений с общим разрешением 3.3 Å по сравнению с трансмембранным доменом при 4,2 Å. Поскольку октамерный комплекс четко виден на несимметричной карте, была применена 8-кратная (C8) симметрия, которая привела к заметному улучшению общего разрешения до 3,0 Å (рис. 1, дополнительный рис. 2). Это было особенно полезно для трансмембранного домена, для которого разрешение было улучшено на 1 Å, что позволило однозначно построить атомную модель для этой области. В соответствии с предыдущими выводами 12,19 первоначальная трехмерная классификация ab initio с последующим гетерогенным уточнением классифицировала ~ 25% частиц WzzB как димеры октамерного комплекса с очевидной псевдо-D-симметрией (дополнительный рис.3). Попытки уточнить эти димеры с использованием различных симметрий привели только к разрешению 8–10 Å. Дальнейшее изучение необработанных микрофотографий выявило небольшое количество ассоциации октамеров даже более высокого порядка (дополнительный рис. 1d). Последующий анализ показал, что дополнительные 10% димеров октамеров были фактически смешаны с набором частиц, используемых для создания конечных объемов с высоким разрешением, о чем свидетельствует слабая плотность, наблюдаемая ниже многих средних значений класса 2D (дополнительный рис.2б). Однако дополнительные раунды уточнений с удалением этих частиц не повлияли на окончательные реконструкции. Даже строгая фильтрация этого окончательного набора частиц путем удаления более 50% из них, за исключением небольшого уменьшения разрешения, не повлияла на общую архитектуру реконструкции. Это говорит о том, что общая структура октамерного комплекса одинакова, независимо от того, связана он с димерами или нет. Чтобы подтвердить это, маскирование и уточнение вокруг одного октамера в димере (дополнительный рис.3) привел к реконструкции октамерного комплекса с такой же структурой, как и у одиночных октамеров. Это включает, что важно, расположение спиралей трансмембранного домена.

    Рис. 1: Общая структура E. coli WzzB.

    Окончательные реконструированные объемы полноразмерного WzzB, уточненного без ( a ) и с ( b ) применения симметрии C8. Вверху: вид сверху периплазматической области сверху вниз.

    Были противоречивые сообщения о точном олигомерном состоянии этого семейства белков.В различных сообщениях предлагались тримерные, пентамерные, гексамерные и октамерные структуры WzzB и WzzE, а также неамерная организация FepE 12,13,14,19,25 . Калиныч и др. 19 представляют убедительные структурные и биохимические данные, позволяющие предположить, что и WzzB, и WzzE имеют октамерную природу, а все, что меньше этого, является артефактом кристаллизации. Представленные здесь результаты согласуются с их выводами. Это значительно меньше, чем оценивают SEC или BN-PAGE.Основываясь на больших размерах, оцененных с помощью SEC и BN-PAGE, было высказано предположение, что эти комплексы, возможно, могут содержать 10-15 протомеров на комплекс 19 . Точно так же наблюдаемые нами профили элюирования SEC и характер миграции нативного PAGE согласуются с очень большими комплексами. Однако мы считаем, что это вводит в заблуждение, поскольку наши 2D и 3D классификации не выявили ничего больше, чем октамерный комплекс. Более вероятным объяснением является ассоциация двух или более комплексов через цитоплазматические домены в димеры, тримеры (или даже более высокого порядка) октамеров, которые достаточно сильны, чтобы поддерживаться в условиях BN-PAGE и SEC.Кроме того, мицелла детергента DDM в форме пончика, защищающая трансмембранный домен каждого протомера, увеличивает диаметр трансмембранной области до ~ 135 Å. Это большое количество детергента, окружающего трансмембранный домен, может также объяснить большое завышение размера на основе SEC и BN-PAGE. Единственным отклонением от этой октамерной тенденции является структура, недавно определенная одночастичной крио-ЭМ WzzB из Salmonella enterica sv Typhimurium (WzzB ST ), который описан как додекамер 20 , который ранее был сообщается как гексамер 25 или октамер 19 на основании многоуглового лазерного светорассеяния с исключением размера и крио-ЭМ исследований полноразмерного белка.Кроме того, кристаллизация химер между этим белком и гомологом из Shigella flexneri 13 приводила к октамерным комплексам.

    Периплазматический домен

    Размеры периплазматического домена очень похожи на описанные ранее структуры (рис.2): колоколообразный домен высотой ~ 100 Å над границей раздела мембраны, содержащий внутреннюю полость высотой ~ 70 Å. при измерении от границы раздела периплазматической мембраны до дна петли L4.Он наиболее узкий в верхней части колокола, составляющий ~ 55 Å, и расширяется по мере приближения к границе раздела периплазматической мембраны до максимального диаметра ~ 95 Å. Точно так же полая внутренняя часть имеет диаметр 30–35 A и расширяется в большую пустую камеру диаметром ~ 75 A на периплазматической границе раздела. Колоколообразный комплекс является результатом бок о бок упаковки протомеров, и взаимодействия, наблюдаемые в этой структуре, аналогичны тому, что было описано в других работах 12,13 , среди прочего, с α1, α7 и α8 одного протомера. взаимодействует с длинным α6 соседнего протомера.Нам также удалось построить полностью неповрежденную петлю L4, которая расположена наверху периплазматического домена, на расстоянии ~ 70 Å от поверхности раздела мембраны, и является очень гибкой, если судить по большинству доступных структур, содержащих либо искаженные либо неполная петля, либо отсутствует петля целиком в депонированных моделях 12 . Здесь петля расположена внутри полости и простирается к центру периплазматического домена (рис. 2) в конформации, аналогичной структуре Salmonella typhimurium / Shigella flexneri WzzB chimera 13 .Несмотря на то, что расположение петли далеко от поверхности раздела мембран, она жизненно важна для получения очень длинных полисахаридных цепей 13,22,26 и Kalynych et al. 26 предполагают, что гибкость петли L4 может опосредовать конформационные изменения, связанные с функцией. Хотя петля L4, по-видимому, не требуется для правильной олигомеризации 13 , несколько остатков внутри этой петли вовлечены в многочисленные контакты с остатками соседних петель L4 в центре комплекса, потенциально создавая поры наверху периплазматической оболочки. домен.

    Рис. 2: De novo построила атомную модель WzzB.

    a Мультяшное изображение октамерного комплекса, наложенное на карту WzzB с симметрией C8 (белый цвет). Вверху справа: вид сверху с периплазматической стороны. Внизу справа: вид сверху с периплазматической стороны, разрезанный до уровня мембраны для отображения мицеллы детергента в форме пончика. b Нарезка для демонстрации интерьера октамерного комплекса. Красные и черные значения относятся к расстояниям, измеренным на внешней и внутренней поверхностях соответственно. c Одиночный протомер WzzB с метками α-спиралей и петель, обсуждаемых в тексте.

    Периплазматический домен этого семейства белков хорошо охарактеризован, и эта область нашей структуры очень похожа на другие доступные структуры (Рис. 3) как на мультимерном, так и на протомерном уровне. В целом, несмотря на относительно низкую идентичность последовательностей между тремя гомологами WzzB, WzzE и FepE 12 , три белка собираются в удивительно похожие колоколообразные структуры с полыми внутренними полостями.Это отражается наложением полных мультимерных периплазматических доменов, которые кристаллизовались в правильной октамерной или неамерной форме из разных гомологов на наш de novo построенный комплекс (Рис. 3a). На уровне протомеров, независимо от мультимерного состояния, в котором белок кристаллизовался, структурное сходство даже более поразительно с RMDS в диапазоне от 0,8 до 2,8 Å при наложении (Fig. 3b, c).

    Рис. 3: Сравнение моделей периплазматического домена PCP с полноразмерным WzzB.

    a Структурное выравнивание репрезентативных периплазматических моделей, кристаллизовавшихся в октамерном олигомерном состоянии WzzB 4E29 (пурпурный), WzzE 3B8O (оранжевый) и неамерном олигомере FepE 3B8N (лосось) на полноразмерном олигомере WzzB 6RBG (серый). b Структурное выравнивание протомеров независимо от олигомерного состояния, в котором они кристаллизовались, на полноразмерном WzzB 6RBG. Коды PDB, используемые для выравнивания: 3B8P (желтый), 4ZM5 (зеленый), 4E2C (синий), 4E29 (пурпурный), 3B8O (оранжевый) и 3B8N (лосось). c Таблица сравнения структурной ориентации протомеров в ( b ). * Химерный S. flexneri / S. typhimurium WzzB, значения в скобках представляют собой диапазоны аминокислотных остатков, происходящие от каждого белка WzzB 13 . Протомеры были выровнены, и RMSD было рассчитано с использованием функции Coot 44 SSM Superpose.

    Периплазматическое основание и линкер

    На периплазматическом интерфейсе консервативные остатки в линкерной области, соединяющей периплазматический домен с трансмембранным доменом, помогают формировать жесткий каркас, который фиксирует каждый из трансмембранных 2-спиральных пучков на месте (рис.4). Богатый пролином мотив проксимальнее С-концевой трансмембранной спирали охватывает эту область. Мутации в остатках аланина первых двух пролинов этого мотива (P284 и P287) не влияли на активность 23 ; однако мутация третьего пролина (P293) в аланин 23 или вставка участка из 5 аминокислот непосредственно перед этим пролином 22 приводила к полной потере функции и оказывала пагубное влияние на уровни экспрессии. В то время как первые два пролина этого мотива видны в конформации trans , P293 лучше всего моделируется в конформации cis- в плотности нашей структуры (дополнительный рис.4). Это согласуется с Tocilj et al. которые примечательно, даже при том, что они не смогли визуализировать этот остаток на своей карте, предположили, что этот остаток пролина принимает конформацию цис- в полноразмерной структуре 12 . Конформация цис- торсионного угла ω пролина 293 создает уникальный изгиб в этой линкерной области, таким образом помогая направлять С-концевую трансмембранную спираль в нужное положение. Как показали мутационные исследования 22,23 и согласуются с нашей структурой, изменение этой области путем удаления этого остатка пролина резко изменило бы трехмерную структуру этого участка полипептида и, следовательно, положение TM2, отрицательно влияя на правильный белок. складной.Более того, анализ с использованием метода ConSurf 27,28 (дополнительный рис. 5) выявил консервативный лизин (K294), расположенный в этой линкерной области, который, вероятно, позиционируется для взаимодействия с фосфатными головными группами для дальнейшего направления и стабилизации TM домена. Это взаимодействие, вероятно, также может быть нарушено заменой цис -P293.

    Рис. 4: Трансмембранный домен.

    a C8-симметричная карта и модель трансмембранного домена двух соседних протомеров.Серые пунктирные линии представляют положение мембраны. Левый кружок: увеличенная область компоновщика. Правый круг: увеличенная область вокруг консервативного мотива GXXXG. b C8-симметричная карта (белый) и модель, показывающая трансмембранную камеру и цитоплазматический узел. Отображаются положения сохраненных K294 и K31 (сфер). Для визуализации внутренней части камеры были удалены три протомера. Черная линия представляет собой потенциальную стабилизирующую скобу, созданную двумя лизинами на противоположных сторонах каждой трансмембранной опоры. c Размеры трансмембранной камеры. Слева: вид сверху с периплазматической стороны, срезанной до верхней части домена TM. Справа: два противоположных протомера с расстояниями для измерения диаметра камеры на разных уровнях внутри мембраны.

    Трансмембранный домен

    Структурная информация с высоким разрешением трансмембранного домена до сих пор неуловима. Недавний отчет об одночастичном анализе полноразмерного WzzB из Salmonella enterica 20 основывался на моделировании молекулярной динамики крупнозернистой структуры, вписывающейся в симметризованную карту плотности C12, в попытке проанализировать трансмембранный домен.Однако при визуальном осмотре карты (EMD-3611) нельзя было достоверно выделить плотность, соответствующую трансмембранным спиралям, выше фоновых уровней мицеллы детергента. Здесь же, с применением преобразований симметрии или без таковых, трансмембранные спирали хорошо видны на фоне мицеллы детергента (рис.1), что позволяет уверенно моделировать их (рис.2 и 4). ). В октамерной сборке пучки из двух спиралей разнесены на ~ 32 Å (при измерении от центра к центру) и не взаимодействуют друг с другом.Каждый из этих двухспиральных пучков состоит из N-концевой (TM1) и C-концевой (TM2) трансмембранной спирали. Внутри каждого пучка их самые близкие взаимодействия находятся в точке их пересечения, что, возможно, неудивительно, совпадает с консервативным мотивом GXXXG (рис. 4a), который был обнаружен в ~ 50% всех белков α-спиральной мембраны и, как предполагается, участвует в упаковке спираль-спираль 29 . В соответствии с этим, G306 и G310 находятся на внутреннем витке TM2 в ближайшей точке контакта с TM1 (рис.4а). Мутации в WzzB Shigella flexneri 23,30 в этой области, за исключением двойной мутации G305A / G311A, которая дает Oags очень короткой цепи, мало влияет на регуляцию длины цепи О-антигена при изменении этих консервативных глицинов. в аланины через одинарные, двойные или тройные мутации. Это согласуется с нашей структурой, которая показывает, что существует достаточно пространства между двумя трансмембранными спиралями, чтобы приспособиться к этим относительно небольшим структурным изменениям в результате мутаций.Более того, остаток A41 ​​на TM1, который прямо противоположен G306, консервативен как фенилаланин в WzzE и FepE, что в последних двух сборках Wzz будет помещать эту объемную боковую цепь между двумя трансмембранными спиралями. Точно так же остаток S37 на TM1, который находится прямо напротив G310 TM2, не консервативен в других гомологах семейства и часто заменяется аминокислотами с объемными боковыми цепями, такими как фенилаланины или метионины. Фактически, сам G310 не является строго консервативным и рассматривается как аланин в гомологах FepE.Таким образом, глицины (или аланины в случае FepE) в обоих этих положениях позволят получить более объемные остатки прямо напротив TM1. Мутационные исследования 23,30 были выполнены на WzzB Shigella flexneri , который, как и соответствующий WzzB из E. coli , содержит аминокислотные остатки с небольшими или короткими боковыми цепями в положениях 37 и 41; таким образом, с помощью структуры, представленной здесь, мы теперь видим, что неудивительно, что эти мутации не влияли на регуляцию длины цепи О-антигена.

    Каждый из трансмембранных доменов разделен на ~ 32 Å (измеряется от центра к центру) и может рассматриваться как большие вертикальные столбы, которые окружают пустую трансмембранную камеру с амфипатической спиралью (α0), потенциально составляющей часть дна камеры. . Каждая из опор слегка наклонена внутрь к центру камеры, уменьшая внутренний диаметр с ~ 75 Å на периплазматической стороне до ~ 64 Å на цитоплазматической стороне и внешний диаметр с ~ 100 Å на периплазматической стороне до ~ 83 Å со стороны цитоплазмы (рис.4б, в). Как уже упоминалось, каждый столб состоит из двух трансмембранных спиралей с TM2 внутри и TM1 снаружи (Fig. 4b and c). Внутренняя поверхность TM2, направленная от TM1, обращена внутрь камеры и состоит исключительно из неполярных алифатических остатков. TM1, с другой стороны, расположен снаружи, и анализ с использованием метода ConSurf показал, что его внешняя поверхность очень вариабельна (дополнительный рис.5), что позволяет предположить, что он, вероятно, не взаимодействует с Wzy или любыми другими потенциальными компонентами Wzy-зависимого пути. , таким образом, вероятно, играя структурную роль в поддержке TM2.

    Другой глицин (G312) мотива GXXXG расположен на противоположной стороне TM2, указывая от соседнего TM1 (Fig. 4a, b) к внутренней части трансмембранной камеры. Двойная мутация G305A / G311A в Shigella flexneri (эквивалент G306 / G312 из E. coli ) дала только очень короткие цепи Oags 23,30 , и было высказано предположение, что взаимодействие протомера Wzz происходит через трансмембранный домен, и эта мутация приводит к неспособности протомеров взаимодействовать 30 .Однако наша структура демонстрирует, что каждый трансмембранный домен протомеров WzzB находится на расстоянии 32 Å друг от друга без возможности взаимодействия на или рядом с мотивом GXXXG. Поскольку в нашей структуре отсутствует полимераза Wzy, а G312 находится на противоположной стороне TM2, направленной от TM1, в камеру, логично предположить, что более вероятным объяснением будет то, что в полностью неповрежденный Wzy-зависимый суперкомплекс Wzy будет вставлен либо частично или полностью в камеру, чтобы одна из его трансмембранных спиралей располагалась достаточно близко, чтобы эта двойная мутация нарушала взаимодействия Wzz: Wzy, приводя к потере регуляции длины цепи и продукции нерегулируемых Oags.

    На цитоплазматической стороне мембраны TM2 продолжается прямо через предсказанную область мембраны до С-концевого остатка. Однако на N-конце белка короткая амфипатическая спираль (α0) проходит параллельно мембране и взаимодействует с TM2 его спирального пучка, а также с TM2 соседнего протомера, который слегка изгибается в сторону α0 (рис. 4 и дополнительный рис. 6). Высококонсервативный K31 расположен в начале TM1, который создает изгиб между TM1 и α0, вызывая резкий поворот на 90 ° на границе цитоплазматической мембраны, в результате чего α0 указывает на центр октамерного комплекса.В соответствии с моделированием и атомистическим моделированием 20 , которые предполагают, что K31 находится в пределах фосфатной полосы и взаимодействует с фосфатными группами липидов, K31 в нашей структуре расположен на внешнем крае мицеллы детергента. Мутации K31 приводят к неактивному комплексу 23 и Collins et al. 20 предполагают, что мутации этого остатка вызывают втягивание TM1 глубже в мембрану, тем самым нарушая взаимодействия TM-TM. Это тоже возможно; однако, поскольку K31 находится на изгибе между α0 и TM1, другое объяснение, основанное на нашей структуре, состоит в том, что положение α0 резко изменяется, нарушая его взаимодействия с соседним TM2 и, вероятно, общую стабильность белка.Лизин в этом положении, вероятно, сильно взаимодействует с фосфатными группами липидов, создавая жесткую структуру, которая помогает поддерживать α0 в его правильном положении, позволяя ему взаимодействовать с соседними TM2 и потенциально обеспечивая дополнительную стабильность октамерному комплексу.

    Цитоплазматический домен

    Цитоплазматический домен имеет значительно меньшее разрешение и может рассматриваться как концентратор, расположенный в центре комплекса на границе раздела цитоплазматической мембраны и идущий вниз от границы раздела мембраны (рис.4б). В этом цитоплазматическом домене (не моделированном из-за низкого разрешения в этой области) расположены первые ~ 15 аминокислот N-конца и C-концевая метка 8 × His, используемая для аффинной очистки от каждого протомера. Подобно центральной ступице колеса, подобно спицам, можно увидеть 8 α0 от каждого протомера, расходящиеся наружу на предсказанной мембранной границе этого домена. Кроме того, С-конец TM2, содержащий нерасщепляемую метку 8 × His, используемую для очистки, можно увидеть связанным с цитоплазматическим концентратором на более низких пороговых уровнях (рис.4c, дополнительный рис. 6). Как упоминалось выше и в соответствии с предыдущими выводами 12,19 ; мы также обнаружили частицы WzzB как димеры октамерного комплекса с очевидной псевдо-D-симметрией, которые связываются через этот цитоплазматический домен в димеры. Попытки уточнить эти димеры октамеров привели к структуре с низким разрешением, в которую можно было состыковать два октамера WzzB. Дальнейшее маскирование и уточнение одиночного октамера в димере привело к структуре с разрешением 3,9 Å, где каждый трансмембранный столб и α0 находятся в такой же конформации, что и мономерная форма октамера, что позволяет предположить, что эта димерная ассоциация не влияет на конформацию трансмембранного домена. .

    В попытке лучше охарактеризовать цитоплазматический домен и понять роль цитоплазматических N-концевых остатков, был создан усеченный WzzB с отсутствующими остатками 1-15. Очистка этого усеченного WzzB привела к получению такого же профиля эксклюзионного хроматографа, как и для полноразмерного белка, а анализ отдельных частиц популяции 1 выявил частицы, аналогичные наблюдаемым для полноразмерного белка (рис.5, дополнительный рис. 7). Однако, в отличие от полноразмерного белка, практически все частицы усеченного на N-конце варианта имеют димерную форму.Таким образом, как это было сделано для полноразмерного белка, маскирование и измельчение около половины димера привело к октамерной структуре с разрешением 4,5 Å с, что примечательно, ее трансмембранными столпами и α0 в аналогичных положениях и конформации, которые наблюдались в полноразмерном белке, что позволяет предположить что эти N-концевые остатки не способствуют стабилизации трансмембранного домена. Возможно, это неудивительно из-за неупорядоченной природы этих остатков в полноразмерном октамере. Кроме того, как C1, так и C8 реконструкции усеченного на N-конце WzzB (дополнительный рис.7) сопоставимы с разрешением, полученным аналогичным образом обработанных полноразмерных реконструкций при маскировке и уточнении одного октамера в димерной форме (дополнительный рис. 8), что позволяет предположить, что удаление N-концевых остатков не оказало значительного влияния полученное разрешение. После удаления остатков 1-15 цитоплазматический домен усеченного WzzB состоит исключительно из метки 8 × His, используемой для очистки. Он заметно меньше в диаметре и расположен ниже от границы раздела мембраны по сравнению с полноразмерным WzzB (рис.5в). Учитывая пределы разрешения этой области белка, трудно судить, каково влияние экспрессионной метки на положение N-концевых остатков, если таковое имеется. Однако, основываясь на сравнении двух структур, кажется вероятным, что основная масса N-концевых остатков расположена между 8x His tag и мембранным интерфейсом, возможно, внося вклад в дно трансмембранной камеры.

    Рис. 5: Структура усеченного на N-конце WzzB.

    a Пристыкованная атомная модель к усеченной на N-конце WzzB C8-симметричной карте.Вверху справа: вид сверху на периплазматический домен, показывающий октамерный комплекс, похожий на полноразмерный WzzB на несимметричной карте. b Трансмембранная область в увеличенном масштабе, демонстрирующая архитектуру, аналогичную полноразмерному WzzB. c Наложение полноразмерного (серый) и усеченного на N-конце (фиолетовый) WzzB. Эквивалентный порог был выбран на основе визуально схожего размера мицелл детергента обеих карт. d Стыковка в димерные формы. Слева: чтобы показать перекрытие двух цитоплазматических доменов в димерной форме, две полноразмерные карты мономерных октамеров (голубого и лососевого цвета) состыкованы с полноразмерным димером (серый контур и нижний левый угол).Эквивалентные пороговые значения были выбраны на основе визуально подобного размера мицелл детергента мономерной и димерной форм. Справа: две атомные модели состыкованы с N-усеченным димером (серый контур и нижний правый угол).

    Уточнения димеров полноразмерного и усеченного белка привели к аналогичным реконструкциям с низким разрешением, однако димер полноразмерного белка был заметно на 10 Å длиннее на 319 Å по сравнению с усеченной версией длиной 309 Å ( Рис. 5г). Дальнейшая стыковка двух атомных моделей мономерного октамера с димерами низкого разрешения как полноразмерного, так и усеченного WzzB показала расстояние между двумя октамерами 45 Å в полноразмерном димере и 36 Å в усеченных димерах при измерении. от α0 до α0 (рис.5d) в соответствии с удалением N-концевых остатков. Кроме того, стыковка двух уточненных карт полноразмерного мономерного октамера в его соответствующий димер привела к значительному перекрытию 2 цитоплазматических доменов, что предполагает, по крайней мере, частичное переплетение этих доменов в димерной форме, вероятно, C-концевых 8 × His тег, используемый для очистки.

    % PDF-1.4 % 1 0 объект >>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp ;.ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D ‘.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D ‘.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D ‘.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D’.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘>>> / BBox [0 0 585 783] / Длина 131 >> поток x5; 0D ޫ ? (D @ I 8b? D ‘.hŜ BAc` ؜ f} 1dx, ˳Gp; .ht_AQC {E [7JUj]; Q ‘> поток xr0} «Kr8Bdh: d85 -! + 髱 x4ðӅt; ќDJ` # ׏ ܛ Љ 탅 3p / CgQx = 8A

    tokyoba.com Бумажные деньги США Монеты и бумажные деньги ☆☆ 《СЕРЕБРЯНЫЙ СЕРТИФИКАТ 1899 г.

    tokyoba.com Бумажные деньги США Монеты и бумажные деньги ☆☆ 《СЕРТИФИКАТ СЕРЕБРЯ 1899 ГОДА》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ ДОЛЛАРОВ США * Банкнота wzz Банкнота

    изготовлена ​​вручную из тонкого 24-каратного настоящего тонкого сусального золота, запрессованного на специальный поликарбонат, 24-каратное золото, прессованное, ИНДИЙСКАЯ ГЛАВНАЯ БАНКНОТА, в обращении / не в обращении:: Не в обращении: Страна / регион производства:: Неизвестно, мы обещаем решить ваши проблемы быстро и профессионально, * Банкнота wzz, СЕРИЯ 1899, ☆☆ 《1899 СЕРЕБРЯНЫЙ СЕРТИФИКАТ》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 респ.Тип:: Банкноты, Номинал:: 5 долларов: Год:: 1899.









    перейти к содержанию Повышение эффективности бизнеса с помощью службы поддержки колл-центра
    Высокие затраты на рабочую силу? Тратить слишком много времени на
    вторичных процессов? Мы справимся! Эксперты по доставке в рестораны, такси
    и многое другое! Отгрузка заказов или самовывоз может быть сложной задачей на
    в больших масштабах. Давайте делать то, что умеем лучше всего! Живой звонок, чат, социальные сети и электронная почта
    для поддержки клиентов.У ваших клиентов есть вопросы, проблемы или они просто хотят приобрести
    ваш продукт или услугу! Использование различных средств коммуникации — это
    эффективный способ порадовать ваших клиентов, но при этом сохранить
    вещей эффективными с операционной точки зрения! Ввод данных, серверные сервисы электронной коммерции.
    Ввод данных, сканирование, обработка, индексирование и архивирование.
    Когда вам это нужно, мы это сделаем!

    НАШИ УСЛУГИ

    Мы обслуживаем услуги доставки из ресторана, транспортные услуги или любые другие услуги, требующие доставки перевозчика или водителя

    От электронных таблиц до работы с транскрипциями до базового ввода в программное обеспечение и системы вашего бизнеса — мы делаем это эффективно и результативно!

    МЫ ЦЕНТР ИСТОЧНИКОВ РЕШЕНИЙ

    Стать ключевой частью способности наших клиентов процветать — неотъемлемая часть нашего определения успеха.Будь то обслуживание клиентов, операционная эффективность, работа в бэк-офисе или продажи, наша инновационная команда решает каждую новую задачу творчески и проницательно.

    Наша миссия

    Ведущий лидер в области аутсорсинга бизнес-процессов.

    Наша миссия Center Source Solutions — постоянно помогать нашим клиентам расти и добиваться успеха, обеспечивая при этом превосходное лидерство и обслуживание клиентов.

    Мы виртуальны по замыслу

    Center Source Marketplace.Ориентация на человека. Соответствует и безопасен.

    Каждый проект имеет свою сложность, и никто не понимает этого лучше, чем Center Source Solutions. Наша команда хорошо оснащена, чтобы справляться со сложными сценариями и энергично действовать в условиях стресса. Мы предоставляем нашей команде соответствующие сборы и ресурсы, необходимые для гибкости и удовлетворения ваших потребностей

    Образное

    Мы очень гордимся своим вкладом в отрасль BPO.Мы стремимся к совершенству во всем, что делаем. Наша команда обучена обеспечивать исключительное обслуживание клиентов, чтобы вы могли удерживать и привлекать новых клиентов. Apex Global гордится тем, что предоставляет своим клиентам лучшее, что может предложить эта отрасль.

    Структура

    Каждая из наших основных ценностей четко определяет, что мы ценим в наших отношениях. Независимо от того, работает ли у нас партнер или сотрудник, мы устанавливаем стандарты, которые определяют, как мы ведем бизнес и как мы относимся к нашим клиентам и сотрудникам.Наш ориентированный на клиента подход — это тот подход, который будет приоритетом номер один при разработке и реализации планов нашего call-центра для вас. Мы ваш расширенный партнер, а не просто поставщик. Мы стремимся удовлетворить потребности вашего бизнеса честно и сотрудничать.

    ☆☆ 《СЕРЕБРЯНЫЙ СЕРТИФИКАТ 1899 ГОДА》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 Реп. * Банкнота wzz

    Подол рубашки длиннее сзади. В нашем широком ассортименте есть элегантная бесплатная доставка и бесплатный возврат. Эта большая сумка может служить в качестве ручной клади для большинства авиакомпаний.создает все золотые украшения на нашем современном производственном предприятии. Купить шляпы MisShe Fascinator для женщин Свадебный чай Коктейльная вечеринка Feather Fascinator Коктейльная вечеринка Заколка для волос Шапки-коробочки Red: покупайте модные бренды Fascinators при ✓ БЕСПЛАТНОЙ ДОСТАВКЕ и возможен возврат при подходящих покупках, когда у всех есть сопоставимые возможности. КЛАССИЧЕСКИЙ ПОДАРОК ​​ЧАНУКА: Нет лучшего способа отпраздновать праздник огней, чем прекрасная менора. Конструкция с защитой от ветра сохраняет тепло при катании на лыжах или сноуборде.Храните серебро в шкатулке или мешочке с подкладкой. Номер модели позиции: F8585-Parent. Ссылка на емкость: (Он вмещает 6-8 альпийских сахаров или 2 шоколадных конфеты Ferrero. Наши милые носки для экипажа сделаны из 70% хлопка + 30% полиэстера, шнурки только спереди и шнурки на шнурках. ПОЛЕЗНО ДЛЯ ЛЮБОГО СЛУЧАЯ — Отлично подходит для любого подарка или случая, например, для катания на коньках. Сшит из сверхмягкого полиэстера и напечатан самыми яркими чернилами, этот мягкий комбинезон будет потрясающе смотреться на вашем ребенке. Он изготовлен из высококачественных материалов.Cardone 19-2881 Восстановленный импортный готовый (ненагруженный) тормозной суппорт: автомобильный. В комплект входит: 00 шт. Винт с плоской головкой и плоской прокладкой с пружинными шайбами. Пожалуйста, обратитесь к изображению для схемы подключения, ☆☆ 《1899 СЕРТИФИКАТ СЕРЕБРЯНЫЙ》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 Rep. глаза людей. позволяют видеть и быть замеченными водителями встречного транспорта даже в густом тумане.Размеры: 22 x 28 дюймов с отверстиями 5 — 4×6 и 1 — 8×10. Это вещь ручной работы от талантливого дизайнера, или проводите время на свежем воздухе в снежную погоду, мои сумки-тоут сделаны из мягкого материала. ▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂▂, Всегда бережно обращайтесь с украшениями, 10 мм; диаметр установки — 1/2 / ок, я был вдохновлен сделать что-нибудь для новорожденного. Коврики персонализируются и подгоняются под фотографию 5×7. Я делаю все возможное, чтобы напечатать именно те цвета, которые требуются. Если вам нравится французский винтажный декор и вы хотите увидеть, что происходит за кулисами нашего винтажного магазина, декоративные элементы / растения НЕ включены.СТОИТ ПОДОЖДИТЕ клипарт для футболок, когда она еще училась в Джульярде (1944). Нежность и простота цветочных компонентов позволяют использовать этот комплект в дизайне образов жениха и невесты для свадеб в разных стилях — рустикальном. и считается придающим физическую и эмоциональную силу. помогая сократить количество отходов за счет переработки модной одежды. ☆☆ 《СЕРЕБРЯНЫЙ СЕРТИФИКАТ 1899 ГОДА》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 Реп. * Банкнота wzz . Этот мешочек для украшений имеет ширину около 2 дюймов. Это лучший подарок, который вы можете сделать для своей возлюбленной.Никакие физические продукты не будут отправлены. КУПИТЕ ЛЮБЫЕ 5 ОБРАЗЦОВ ТОЛЬКО ЗА 12 $, пожалуйста, оставьте нам сообщение и предоставьте следующую информацию: Эти чипы затем прикрепляются к смоле в виде различных замысловатых узоров. Женские высокие кеды Pumpkin Puppies, боди на полпути к одному дню рождения Золотой блеск с галстуком-бабочкой в ​​виде маленького человечка 1/2 Birthday Prince. Доступны заказы RUSH (за дополнительную плату) (в комплект входят 3 обязательных аккумулятора AG13 для фонарика), обеспечивает удовлетворительный ответ в течение 24 часов, очень гибкий и гипоаллергенный.Сигнальные термометры BBQ для цифрового приготовления пищи. ❥ Этот набор прикроватных светильников из хрусталя предназначен не только для того, чтобы излучать теплый и уютный свет. Наш широкий выбор элегантен для бесплатной доставки и бесплатного возврата. Они предназначены только для окончательного подъема и формирования теста. Открытые виниловые ставни с жалюзи обеспечивают четкие углы и линии, которые интересны как по вертикали, так и по горизонтали. Не стесняйтесь обращаться к нам. 146 мм: кожухи ременного и цепного приводов: промышленные и научные. это наиболее экономически эффективный инструмент для перетяжки нити из имеющихся, ☆☆ 《1899 SILVER CERTIFICATE》 INDIAN CHIEF 5 Rep.* Банкнота wzz , Мужская беговая футболка с длинным рукавом Tombo Teamsport с круглым вырезом: Одежда.

    Как Center Source может вам помочь?

    Узнайте, что значит быть агентом

    Узнайте, как можно улучшить баланс между работой и личной жизнью

    Агент Оппертунатиес

    Узнайте, каково быть клиентом

    Узнайте, как мы создаем лучшие команды по работе с клиентами

    Заказчик

    Узнайте, что значит быть агентом

    Узнайте, как можно улучшить баланс между работой и личной жизнью

    Связаться с Oppertunaties

    Вверх

    ☆☆ 《СЕРТИФИКАТ 1899 ГОДА》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 Rep.* Банкнота wzz

    ☆☆ 《СЕРТИФИКАТ СЕРЕБРА 1899 ГОДА》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 Реп. * Банкнота wzz, ИНДИЙСКАЯ ГЛАВНАЯ БАНКНОТА, Банкнота изготовлена ​​вручную из тонкого 24-каратного настоящего тонкого сусального золота, прижатого к специальному поликарбонату, СЕРИЯ 1899, НАПЕЧЕННОЕ ЗОЛОТО 24К, Мы обещаем решите ваши проблемы быстро и профессионально, Интернет-магазин розничной торговли, Бесплатная доставка, Бесплатный возврат, Стиль вашей жизни, Нажмите сейчас, чтобы просмотреть, Новые клиенты экономят 60% на первом заказе. wzz ☆☆ 《СЕРЕБРЯНЫЙ СЕРТИФИКАТ 1899 ГОДА》 ИНДИЙСКИЙ ГЛАВНЫЙ $ 5 респ. * Банкнота, ☆☆ 《СЕРЕБРЯНЫЙ СЕРТИФИКАТ 1899 г.* Банкнота wzz.

    Синтез и доставка капсульных полисахаридов Streptococcus pneumoniae с помощью рекомбинантных ослабленных вакцин против сальмонелл

    Значимость

    Заболевания, вызванные пневмококковой инфекцией, являются причиной значительной заболеваемости и смертности во всем мире. Традиционные пневмококковые вакцины разрабатываются на основе очищенных капсульных полисахаридов (CPS) или CPS, конъюгированных с белком-носителем. Процессы производства традиционных вакцин трудоемки, что увеличивает стоимость вакцины и ограничивает их использование в развивающихся странах.В этом исследовании была разработана экономичная пневмококковая вакцина с использованием рекомбинантной ослабленной вакцины Salmonella (RASV). Мы клонировали и экспрессировали гены семи серотипов CPS в штамме RASV. CPS, доставляемые с помощью RASV, вызывали устойчивые гуморальные и клеточно-опосредованные ответы и обеспечивали эффективную защиту мышей от пневмококковой инфекции. Наша работа обеспечивает инновационную стратегию массового производства недорогих биоконъюгированных полисахаридных вакцин для безыгольной доставки через слизистые оболочки против пневмококковых инфекций.

    Abstract

    Streptococcus pneumoniae капсульные полисахариды (КПС) являются основными детерминантами патогенности бактерий. CPS различных серотипов являются основными компонентами пневмококковых вакцин Pneumovax, Prevnar7 и Prevnar13, которые существенно снизили бремя болезни, вызываемой S. pneumoniae в развитых странах. Однако трудоемкие процессы производства традиционных вакцин на основе полисахаридов повысили стоимость вакцин и ограничили их влияние на развивающиеся страны.Целью этого исследования является разработка разновидности недорогой живой вакцины, основанной на использовании системы рекомбинантной аттенуированной вакцины против Salmonella (RASV) (RASV) для защиты от пневмококковых инфекций. Мы клонировали гены семи различных серотипов CPS, которые должны быть экспрессированы штаммом RASV. Оральная иммунизация мышей штаммами RASV-CPS вызвала устойчивые Th2-смещенные адаптивные иммунные ответы. Все CPS-специфические антисыворотки опосредуют опсонофагоцитарное уничтожение соответствующего серотипа S.pneumoniae in vitro. Штаммы RASV-CPS2 и RASV-CPS3 обеспечивали эффективную защиту мышей от заражения штаммом S. pneumoniae D39 или WU2. Синтез и доставка CPS S. pneumoniae с использованием штаммов RASV обеспечивает инновационную стратегию разработки, производства и использования недорогой пневмококковой вакцины.

    Бактерия Streptococcus pneumoniae (пневмококк) по-прежнему является основной причиной пневмонии, менингита и бактериемии у детей раннего возраста, пожилых людей и популяций с ослабленным иммунитетом (1), и, следовательно, ежегодно вызывает миллионы случаев заболевания и смерти. во всем мире (2). S. pneumoniae синтезирует иммунологически отличные капсульные полисахариды (CPS), которые покрывают клеточную поверхность и определяют серотипы. В настоящее время идентифицировано более 90 капсульных серотипов (3-5). CPS предотвращают опосредованное комплементом опсонофагоцитарное уничтожение S. pneumoniae , что, как полагают, является важным защитным механизмом при инфицировании S. pneumoniae (6, 7). Антитела против CPS опосредуют удаление S. pneumoniae из легких и защищают хозяина от пневмококковой инфекции (8⇓ – 10).Следовательно, традиционные пневмококковые вакцины в основном разрабатываются на основе очищенных CPS или CPS, конъюгированных с белком-носителем, чтобы вызвать CPS-специфические иммунные ответы (11).

    23-валентная пневмококковая полисахаридная вакцина (PPV23; Pneumovax) была разработана и рекомендована для людей старше 65 лет или для детей и взрослых с сопутствующими заболеваниями. PPV23 содержит 23 капсульных типа очищенных CPS: 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19F, 19A, 20, 22F, 23F и 33F.Однако очищенные CPS являются независимыми от Т-лимфоцитов антигенами, которые не могут в значительной степени индуцировать переключение с IgM на IgG (12) и устойчивые иммунные ответы памяти (13). Следовательно, PPV23 не эффективен у детей младше 2 лет (14). Пневмококковая конъюгированная вакцина (PCV13; Prevnar13), разработанная путем конъюгирования CPS 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 19A и 23F, с дифтерийным анатоксином (CRM197) (15) предоставила эффективные реакции памяти и повышенная иммуногенность у детей до 2 лет (16).Хотя гликоконъюгированные вакцины сыграли большую роль в борьбе с инфекциями S. pneumoniae , вызванными серотипами вакцины (17⇓⇓⇓⇓⇓ – 23), их использование также имеет недостатки. PCV13 включает наиболее распространенные серотипы в западном мире и в развивающихся странах (24, 25) и помогает снизить общую заболеваемость инвазивным пневмококком. Однако, поскольку существующие серотипы в ЦВС13 нелегко изменить, а распределение серотипов S. pneumoniae варьируется в зависимости от географии, возраста и времени (26), введение ЦВС-13 привело к изменчивой иммуногенности среди разных популяций (27) и заболевания, вызванные невакцинными серотипами, значительно увеличились у детей младше 5 лет и у взрослых старше 45 лет (28).

    Процесс производства вакцины PCV включает в себя несколько стадий и циклов очистки, что значительно увеличивает их стоимость и ограничивает использование вакцины в развивающихся странах, где бремя болезней является самым тяжелым. Несмотря на то, что цена вакцины значительно снижается из-за поддержки Обязательства Гави по продвижению пневмококковой инфекции в отношении рынка, средний глобальный охват вакциной против пневмонии в настоящее время составляет лишь 47%. По-прежнему необходимы дополнительные усилия для снижения цен на вакцины и увеличения охвата иммунизацией в странах с низкими доходами.Кроме того, поскольку каждый полисахарид структурно отличается, а химическая конъюгация может изменить его конформацию и эпитопы, каждая реакция требует оптимизации, а полученные гликоконъюгированные вакцины часто плохо охарактеризованы, гетерогены и неодинаково иммуногенны (11, 29, 30).

    Технология связывания белков-гликанов была недавно разработана для биосинтеза полисахаридной конъюгированной вакцины. В этом подходе используются олигосахарилтрансферазы из Campylobacter jejuni (PglB) (31⇓ – 33) или Neisseria (PglL) (34, 35).Эта технология все еще требует сложного процесса выделения и очистки конъюгатов белок-CPS. Еще одно ограничение как для PPV, так и для PCV состоит в том, что индуцированный преобладающий изотип сывороточного иммуноглобулина G (IgG) представляет собой IgG2 в ответах людей старше 2 лет (36), и ни одна из двух вакцин не вызывает значительных IgA-ответов слизистой оболочки (37). ). Живые аттенуированные штаммы S. pneumoniae также используются для разработки пневмококковой вакцины (37, 38). Однако потенциальное возвращение к вирулентности аттенуированных вакцин остается серьезной проблемой, поскольку пневмококки естественным образом способны поглощать ДНК из циркулирующих штаммов дикого типа.

    В качестве альтернативного подхода мы сосредоточились на использовании рекомбинантных аттенуированных вакцинных штаммов Salmonella (RASV) в качестве платформ для доставки пневмококковых полисахаридов. Штаммы RASV, представляющие чужеродные антигены от неродственных патогенов, являются многообещающими переносчиками для пероральных вакцин, поскольку они были разработаны для обеспечения новых, безыгольных и недорогих стратегий предотвращения инфекционных заболеваний (39). Существуют грамотрицательные бактерии, такие как штаммы Escherichia coli с делецией гена waaL , которые показали способность синтезировать гетерологичные полисахариды из грамотрицательных и грамположительных бактерий (40, 41).В нашем предыдущем исследовании (42) гены, необходимые для синтеза О-антигена Salmonella , также были удалены для конструирования штаммов RASV, доставляющих гетерологичные полисахаридные антигены. Связанный с липополисахаридом (LPS) O-антиген у грамотрицательных бактерий ковалентно лигируется с липидным A-ядром внешней мембраны (OM) (43). Несколько линий доказательств предполагают, что белки OM (OMP), включая матричный порин (OmpF) и переносчик сидерофоров FhuA, образуют прочный комплекс с LPS (44). Комплексы OMP-LPS обладают высоким потенциалом для запуска Т-клеточно-зависимых (TD) иммунных ответов против O-антигена, что может помочь объяснить, что антитела к O-антигену могут обеспечивать защитную активность после естественного заражения Salmonella Typhimurium ( S. Typhimurium) (45). Ослабленные штаммы Salmonella , синтезирующие О-антигены Shigella , вызвали сильные иммунные ответы против Shigella –LPS и обеспечили эффективную защиту от заражения вирулентными штаммами Shigella на мышиных моделях (46–48). Таким образом, платформа RASV может предоставить новую стратегию производства биоконъюгированных полисахаридных вакцин против пневмококковых инфекций. В данном исследовании кластеры генов для синтеза S.pneumoniae CPS 2, 3, 5, 6A, 9V, 14 и 18C были клонированы в наш сбалансированный летальный вектор, и полученные плазмиды были введены в штамм RASV для создания платформы для разработки вакцины против пневмококковой инфекции.

    Методы

    Бактериальные штаммы и плазмиды.

    Штаммы и плазмиды бактерий, использованные в этом исследовании, описаны в таблице 1. Штаммы S. Typhimurium и E. coli , содержащие плазмиды Asd + , выращивали при 37 ° C в бульоне Лурия-Бертани (LB). или на агаре LB.Для роста штаммов с делециями гена asdA в питательную среду добавляли диаминопимелиновую кислоту (DAP; 50 мкг / мл). S. pneumoniae штаммов D39 (серотип 2), WU2 (серотип 3), STREP5 (серотип 5), EF6796 (серотип 6A), EMC9V (серотип 9V), STREP14 (серотип 14) и OREP18C (серотип 18C). на чашках с триптиказо-соевым агаром с добавлением 5% овечьей крови или в бульоне Тодда-Хьюитта с добавлением 0,5% дрожжевого экстракта (среда THY) при 37 ° C в анаэробной баночной системе (система GasPak, BBL).

    Таблица 1.

    Бактериальные штаммы и плазмиды, использованные в этом исследовании

    Клонирование

    генов S. pneumoniae CPS в pG8R184.

    Геномная ДНК из штаммов S. pneumoniae была выделена с использованием набора GenElute Bacterial Genomic DNA Kit (Sigma-Aldrich). Все локусы капсулы амплифицировали из геномной ДНК с использованием ДНК-полимеразы PrimeSTAR GXL (Takara Bio) с праймерами, перечисленными в SI Приложение , Таблица S1. Для каждого локуса капсулы было сконструировано несколько праймеров для лигирования фрагментов, амплифицированных из S.pneumoniae с pG8R184 для создания плазмид pG8R307 (CPS2), pG8R308 (CPS3), pG8R309 (CPS5), pG8R310 (CPS6A), pG8R311 (CPS9V), pG8R312 (CPS814C) и pG8R312 (CPS814C). Полученные ампликоны из каждого капсульного типа лигировали с pG8R184 путем сборки гена с использованием NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix (New England Biolabs). Продуктами трансформировали штамм E. coli χ6097 путем электропорации для размножения плазмид. Затем плазмиды были подтверждены с помощью ПЦР, секвенирования и получения CPS перед электропорацией в S. Штамм Typhimurium χ11316. Трансформанты E. coli и S. Typhimurium были обнаружены на чашках с агаром LB без DAP.

    Обнаружение экспрессии капсулы вестерн-блоттингом.

    S. Штаммы Typhimurium с рекомбинантными плазмидами или без них, выращенные в течение ночи при 37 ° C, разводили в свежей среде LB до OD 600 0,03. Все штаммы соответствовали OD 600 (от 0,8 до 0,9). LPS модели S . Трансформанты Typhimurium и S. Typhimurium χ3761 были разделены с помощью SDS / PAGE (49). Затем образцы переносили на нитроцеллюлозные мембраны и иммунологически определяли с помощью разведенных серотипом кроличьих анти-CPS антител 1: 1000 (Statens Serum Institute) для идентификации синтеза CPS. Salmonella O ​​Антисыворотка группы B (BD) была использована для идентификации S . Нативный О-антиген Typhimurium в разведении 1: 1000.

    Иммунизация животных и заражение.

    Эксперименты на животных проводились в соответствии с рекомендациями Закона о благополучии животных и Принципов правительства США в отношении использования и ухода за позвоночными животными, используемыми в тестировании, исследованиях и обучении.Протоколы были одобрены Комитетом по институциональному уходу и использованию животных Университета Флориды и Комитетом по институциональному уходу и использованию животных Юго-Западного университета.

    Для иммунизации группы 7-недельных самок мышей BALB / c (Charles River Laboratories) перорально вакцинировали штаммами RASV-CPS2 (χ11316 с pG8R307), RASV-CPS3 (χ11316 с pG8R308), RASV-CPS5 ( χ11316 с pG8R309), RASV-CPS6A (χ11316 с pG8R310), RASV-CPS9V (χ11316 с pG8R311), RASV-CPS14 (χ11316 с pG8R312), RASV-CPSχ18C (χ11316 с pG8) в дозе 1 × 10 9 КОЕ в 20 мкл забуференного физиологического раствора с желатином (BSG) в день 0.Та же доза того же штамма была введена через 2 недели (на 14 день). Мыши, которым перорально вводили 20 мкл BSG, были включены в качестве отрицательного контроля. Для группы положительного контроля PPV23 (Институт биологических продуктов Чэнду) разводили в соотношении 1:10 и вводили 100 мкл на мышь внутрибрюшинно в день 0 и день 14. Три мыши в каждой группе были убиты для анализа экспрессии цитокинов на 21 день. Кровь собирали на 28 день (2 недели после вторичной иммунизации) посредством пункции нижней челюсти.Образцы вагинального секрета собирали, как описано ранее (47). Для групп, иммунизированных RASV-CPS2 (χ11316 с pG8R307) и RASV-CPS3 (χ11316 с pG8R308), мышей ( n = 10) заражали на 35 день (3 недели после вторичной иммунизации) внутрибрюшинно 2 × 10 4 КОЕ. (В 150 раз больше LD 50 ) для D39 и 2 × 10 4 КОЕ (в 100 раз больше LD 50 ) WU2 в 100 мкл BSG соответственно.

    Приготовление антигена и ELISA.

    Очищенные порошки пневмококковых полисахаридов типов 2, 3, 5, 6A, 9V, 14 и 18C были приобретены в Американской коллекции типовых культур (ATCC). S . ЛПС Typhimurium экстрагировали с использованием набора для экстракции ЛПС (Boca Scientific) из χ3761. Оба пневмококковых полисахаридов и S . ЛПС Typhimurium наносили на 96-луночные планшеты для ELISA (100 нг на лунку). Сывороточные антитела и вагинальный секрет IgA (SIgA) против CPSs и S. Typhimurium LPS измеряли с помощью ELISA, как описано ранее (47).

    Стимуляция клеток и проточная цитометрия.

    Одноклеточные препараты селезенки получали, как описано ранее (47).Спленоциты стимулировали каждым типом CPS или LPS χ3761 (50 нг / 2 × 10 6 клеток) в присутствии смеси ингибиторов транспорта белка (eBioscience). Затем клетки инкубировали в течение 8 ч при 37 ° C с 5% CO 2 . Перед окрашиванием мертвые клетки исключали с помощью Zombie Red (Biolegend), а FcR мыши блокировали крысиным моноклональным антителом против CD16 / CD32 мыши (eBioscience). Для окрашивания поверхности клетки инкубировали с антителами, конъюгированными с флуорофором, на льду в течение 30 мин.Набор буферов для внутриклеточной фиксации и пермеабилизации eBioscience использовали для внутриклеточного окрашивания. Клетки обрабатывали на анализаторе клеток BD LSRFortessa и анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo (TreeStar).

    Для обнаружения экспрессии цитокинов в Т-клетках CD4 + через 21 день после первичной иммунизации были использованы следующие антитела, приобретенные у Biolegend, включая крысиные антимышиные CD3-Alexa Fluor 700, CD4-FITC, IFN-γ-APC / Cy7, APC / Cy7-конъюгированный крысиный IgG1κ (изотип), IL-4 – Alexa Fluor 647, конъюгированный с Alexa Fluor 647 крысиный IgG1κ (изотип).Данные представлены, как описано в подписях к рисункам.

    Анализы осаждения комплемента.

    Образцы сыворотки, взятые из каждой группы, были инактивированы нагреванием и объединены. Каждый штамм S. pneumoniae (10 7 КОЕ) ресуспендировали в 90 мкл PBS, содержащего 1% бычий сывороточный альбумин (БСА) (Sigma-Aldrich), и смешивали с 10 мкл объединенной инактивированной сыворотки из соответствующей группы для 40 мин при 37 ° C. Обработанные клетки штамма S. pneumoniae затем дважды промывали PBS и инкубировали со 100 мкл PBS-1% BSA, содержащего 20 мкл комплемента младенца кролика (BRC, Sigma-Aldrich), в течение 30 мин при 37 ° C.Конъюгированные с FITC козьи поликлональные антитела против кроличьего комплемента (конечная концентрация 1%) (MP Biomedical Cappel) использовали для окрашивания бактерий в течение 45 минут на льду. Образцы фиксировали 2% раствором параформальдегида и анализировали методом проточной цитометрии на анализаторе клеток BD LSRFortessa.

    Опсонофагоцитарный анализ.

    Опсонофагоцитарный анализ / активность (OPA) выполняли в основном, как описано ранее (50). Вкратце, дифференцировку клеток HL-60 (CCL240, ATCC) в гранулоциты проводили в RPMI-1640 с добавлением 1% l-глутамина, 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS) и 100 мМ N, N — диметилформамида ( DMF) при плотности клеток 2 × 10 5 клеток / мл в инкубаторе с 5% CO 2 при 37 ° C.Клетки HL-60 с 4, 6 или 7-го дня постдифференцировки использовали в качестве эффекторных клеток для OPA. Жизнеспособность клеток более 90% оценивали по исключению трипанового синего. Объединенные инактивированные сыворотки из каждой группы последовательно разводили в два раза в буфере Хенкса с Ca 2+ , Mg 2+ и 0,1% желатином. Затем разбавленные образцы сыворотки инкубировали с соответствующим штаммом S. pneumoniae (~ 1000 КОЕ на лунку) в течение 15 минут при 37 ° C в инкубаторе с 5% CO 2 .После этой инкубации добавляли BRC (конечная концентрация: 12,5%; Sigma-Aldrich) и дифференцированные клетки HL-60 (4 × 10 5 клеток). Реакционные смеси инкубировали при 37 ° C в течение 45 мин при скорости вращения 220 об / мин. После инкубации определяли количество жизнеспособных штаммов S. pneumoniae путем разведения на чашках с кровяным агаром. Реакционные смеси, содержащие все тестируемые реагенты, кроме образцов сыворотки, были включены в качестве отрицательного контроля. Процент уничтожения бактерий рассчитывали по уравнению [1 — (количество колоний, представленных в тестируемом образце / количество колоний, представленных в отрицательном контроле)] × 100.Все образцы были протестированы и посеяны в двух экземплярах. Среднее значение четырех независимых подсчетов КОЕ для каждого образца использовалось для расчета процента гибели.

    Статистический анализ.

    GraphPad Prism 5 (программное обеспечение Graph) использовалось для выполнения статистического анализа. Односторонний или двусторонний дисперсионный анализ с последующим тестом Бонферрони использовался для сравнения между группами в зависимости от дизайна эксперимента. Все данные, за исключением выживаемости животных, были выражены как средние с отклонениями. Анализ выживаемости животных проводили с использованием метода Каплана-Мейера с последующим логранговым тестом (Мантел-Кокса).Уровни значимости были установлены на 0,05, 0,01 и 0,001.

    Результаты

    Штаммы RASV были созданы для синтеза CPS

    S. pneumoniae .

    Последовательности локуса cps описаны для всех 90 серотипов S. pneumoniae (3). Большинство серотипов (за исключением типов 3 и 37) используют wzy -зависимый путь сборки капсулы, который аналогичен механизму синтеза О-антигена в S .Тифимуриум (7). В этом исследовании мы клонировали и ввели семь серотипов последовательностей S. pneumoniae cps , кодирующих от двух до шести структурных компонентов в штамм RASV (рис. 1 A ), чтобы подтвердить, что CPS от грамположительных S. pneumoniae может быть экспрессирована и лигирована с рецептором липидного А-ядра Salmonella . Последовательности от исходного гена трансферазы до последнего гена выше гена 3′-транспозазы в локусе cp s серотипов 2, 3, 5, 6A, 9V, 14 и 18C были клонированы в вектор pG8R184 соответственно (рис.1 В ). Затем каждую из полученных конструкций трансформировали в штамм RASV χ11316, который был модифицирован для облегчения синтеза гетерологичных полисахаридов путем введения мутации Δ wbaP (42).

    Рис. 1.

    S. pneumoniae CPS-повторяющиеся единицы и конструирование плазмид для биосинтеза CPS. ( A ) Показано, что повторяющаяся единица капсулы каждого серотипа связана с редуцирующим концом сахара на правой стороне. Моносахариды изображаются с использованием различных цветных форм в соответствии с графическими символами.( B ) Плазмиды, разработанные и сконструированные для синтеза CPS. Основа вектора, используемая для клонирования кластеров генов CPS, представляет собой сбалансированный летальный вектор pG8R184, который содержит низкую копию ori pSC101, Asd + , маркер устойчивости к Кану и промотор P trc с терминатором T1T2. Последовательности каждого производного pG8R184 включают гены, кодирующие капсулы одного из семи серотипов, pSC101 ori , Asd + , маркер устойчивости к Кану и терминатор T1T2.Диаграммы структур CPS и генов биосинтеза CPS модифицированы из Bentley et al. (3). Обозначения «P #» относятся к названиям праймеров, используемых для конструирования плазмид, а назначение праймеров указано в приложении SI, приложение , таблица S1.

    Для проверки экспрессии и полимеризации CPS S. pneumoniae в системе RASV, полисахариды из плазмид-несущих производных χ11316 RASV-CPS2 (pG8R307), RASV-CPS3 (pG8R308), RASV-CPS5 (pG8R-309) CPS6A (pG8R310), RASV-CPS9V (pG8R311), RASV-CPS14 (pG8R312), RASV-CPS18C (pG8R313) вместе с пустой контрольной плазмидой RASV-184 (pG8R184) были экстрагированы и обнаружены с помощью вестерн-блоттинга с использованием CPS-специфичных антител. .Все восстановленные полисахариды можно было обнаружить с помощью антисыворотки против S. pneumoniae CPS, как показано на фиг. 2 и SI, приложение , фиг. S2. RASV-CPS 2, RASV-CPS3 и RASV-CPS14 демонстрировали отчетливо лестничные модели при обнаружении антителами против CPS2, -3 и -14. RASV-CPS5 продуцировал только CPS5-специфические полисахариды с высокой молекулярной массой (HMW), тогда как RASV-CPS9V и RASV-CPS18C экспрессировали CPS с низкой молекулярной массой (LMW) ( SI Приложение , рис. S1).Рекомбинантные CPS, синтезированные RASV-CPS6A, содержали полисахариды как с низкой молекулярной массой, так и со средней молекулярной массой. Однако были также обнаружены LMW-сигналы в штамме Salmonella дикого типа χ3761 в анализе обнаружения CPS6A, что указывало на перекрестную реакцию антисыворотки против S. pneumoniae CPS6A.

    Рис. 2.

    Обнаружение иммуноблотом синтеза S. pneumoniae CPS в штаммах RASV. Каждую плазмиду, несущую кодирующие гены капсулы одного серотипа, электропорировали в штамм RASV χ11316.Трансфицированные штаммы RASV лизировали и разделяли 12% SDS / PAGE. Профили CPS серотипа 2 ( A ), 3 ( B ), 6A ( C ) и 14 ( D ) затем были обнаружены с использованием серотип-специфичных анти-CPS антител. O-антиген S. Typhimurium был также идентифицирован с помощью вестерн-блоттинга с использованием кроличьей поликлональной антисыворотки Salmonella группы B. Штамм χ11316, содержащий пустую плазмиду (RASV-CPS184), был включен в качестве контрольного образца. Показанные блоты профилей CPS представляют три независимых эксперимента.

    Штаммы RASV-CPS индуцировали значительный иммунный ответ Т-клеток CD4

    + против CPS S. pneumoniae .

    Анализы проточной цитометрии были выполнены для исследования CPS-специфических CD4 + Т-клеточных ответов, вызванных штаммами RASV-CPS. Спленоциты собирали у мышей на 21 день (7 дней после вторичной иммунизации) и стимулировали типоспецифическими CPS в течение 8 часов. После стимуляции клетки блокировали и анализировали, как описано в приложении SI , рис.S2. CD4 + Т-клетки от мышей, иммунизированных соответствующими штаммами RASV-CPS, могут стимулировать значительно повышенный уровень IFN-γ по сравнению с таковыми от мышей, иммунизированных PPV23 (Рис. 3 A и SI Приложение , Рис. S3 A ). Напротив, CD4 + Т-клетки от мышей, иммунизированных PPV23, индуцировали больше интерлейкина-4 (IL-4), чем большинство штаммов RASV-CPS (рис. 3 B и SI Приложение , рис. S3 B). ). Однако уровни продукции IL-4 не показали статистической разницы между CD4 + Т-клетками от мышей, иммунизированных RASV-CPS18C, и таковыми из группы PPV23 при стимуляции CPS18C.

    Рис. 3. Экспрессия

    цитокинов в Т-клетках CD4 + , стимулированных CPS S. pneumoniae ex vivo. Спленоциты мышей выделяли на 21 день (7 дней после вторичной иммунизации) и стимулировали соответствующими серотип-специфическими CPS в течение 8 часов. Конъюгированные с флуорохромом антитела, включая крысиные антимышиные CD3-Alexa Fluor 700, CD4-FITC, IFN-γ-APC / Cy7 и IL-4-Alexa Fluor 647, использовали для окрашивания клеток и анализа с помощью проточной цитометрии. Индекс цитокиновой стимуляции (SI) выражали относительно процентного содержания субнаборов клеток IFN-γ + ( A ) или IL-4 + ( B ) в группе, обработанной BSG.Данные двух независимых экспериментов были объединены и проанализированы ( n = 6). Среднее ± SD * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, нс = незначимо, двусторонний дисперсионный анализ ANOVA и критерий множественного сравнения Бонферрони.

    Штаммы RASV-CPS вызывали CPS-специфические гуморальные иммунные ответы.

    Группы мышей вакцинировали семью штаммами RASV-CPS, используя схему введения двух доз. Мыши, получавшие PPV23-, RASV-CPS184– (контроль пустой плазмиды) и BSG, были включены в качестве контрольных групп.Все штаммы RASV-CPS стимулировали аналогичные или более высокие уровни сывороточного IgG к CPS по сравнению с группой, иммунизированной PPV23 (фиг. 4 A ). Более того, уровни IgA в вагинальном секрете были значительно увеличены в группах, иммунизированных RASV-CPS (за исключением RASV-CPS9V и RASV-CPS18C) (рис. 4 B ). В ответе антител на штаммы RASV-CPS доминировал IgG2a (фиг. 4 C ). Напротив, PPV23 индуцировал значительно более высокие уровни продукции IgG1 (фиг. 4 D ).Уровни типоспецифических антител против CPS варьировали в разных группах. RASV-CPS5, RASV-CPS9V и RASV-CPS18C индуцировали более низкие концентрации сывороточного типоспецифического IgG по сравнению с другими RASV-CPS.

    Рис. 4.

    Гуморальные иммунные ответы против CPS S. pneumoniae . Концентрации антител в сыворотке ( A , C и D ) и слизистой оболочке ( B ) измеряли с помощью ELISA на 28 день (14 дней после вторичной иммунизации) ( n = 12). Штаммы RASV-CPS стимулировали сравнимые или более высокие уровни сывороточных IgG, Ig2a и IgA слизистой оболочки по сравнению с группой PPV23.Данные были представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, нс = недостоверно. Данные были проанализированы с использованием двустороннего дисперсионного анализа с тестом множественного сравнения Бонферрони.

    Отложение комплемента, опосредованное антителами в сыворотке, и ОРА.

    Система комплемента играет жизненно важную роль для иммунитета хозяина к S. pneumoniae , особенно в опсонофагоцитозе S. pneumoniae (51⇓ – 53). Сывороточные антитела опосредуют опсонизацию S.pneumoniae активирует систему комплемента, откладывая С3-комплемент на поверхности пневмококка, что способствует фагоцитозу бактерий фагоцитарными клетками. Образцы сыворотки мышей, иммунизированных штаммами RASV-CPS, депонировали аналогичные или более высокие уровни C3 в соответствующих штаммах S. pneumoniae по сравнению с сыворотками мышей, иммунизированных PPV23 (фиг. 5). В то время как способность сыворотки откладывать C3 была снижена у мышей, вакцинированных RASV-184 (пустой плазмидный контроль), отложения C3 на бактериях для сывороток из группы, обработанной BSG, не обнаружено.

    Рис. 5.

    Анализы отложения комплемента. Репрезентативные данные потоковых диаграмм для отложения антител на S. pneumoniae в 10% объединенной антисыворотке из каждой группы мышей, иммунизированных RASV-CPS. PPV23, RASV-184 (контроль пустой плазмиды) и сыворотка, вакцинированная BSG, были включены в качестве контролей.

    OPA считается хорошим индикатором защиты от пневмококковой инфекции (54, 55). Все RASV-CPS вырабатывали опсонизирующие антитела, которые опосредовали уничтожение пневмококков в зависимости от титра.Данные на фиг. 6 показали, что сыворотки мышей, вакцинированных RASV-CPS2, RASV-CPS3, RASV-CPS5, RASV-CPS6A и RASV-CPS14, показали повышенный или эквивалентный OPA по сравнению с таковыми от мышей, обработанных PPV23. Однако сывороточные антитела от RASV-CPS9V и RASV-CPS18C показали более слабый ответ, чем антитела к PPV23.

    Рис. 6.

    OPA у мышей, вакцинированных RASV-CPS. ( A – G ) OPA проводили с использованием дифференцированных клеток HL-60 и инкубировали с предварительно опсонизированными бактериями антителами, специфичными для RASV-CPS, или антителами из контрольных групп.Жизнеспособные бактерии подсчитывают после инкубации при 37 ° C в течение 45 минут. Протестированные образцы, не содержащие сыворотки (только бактерии, клетки и комплемент), были включены в качестве отрицательного контроля. Процент уничтожения бактерий определяли относительно отрицательного контроля (содержащего только бактерии, клетки и комплемент). Показанные данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

    Защита мышей, вакцинированных RASV-CPS2 или RASV-CPS3, от заражения штаммами S. pneumoniae

    дикого типа .

    Для определения защитной эффективности вакцинации RASV-CPS2 и RASV-CPS3 были проведены эксперименты по выживанию с использованием моделей сепсиса пневмококковой инфекции.Мышей, вакцинированных RASV-CPS2 и RASV-CPS3, внутрибрюшинно заражали штаммами D39 (тип 2) и WU (тип 3) дикого типа S. pneumoniae , соответственно. Как показано на фиг. 7, иммунизация любым из этих штаммов RASV-CPS приводила к значительной защите от пневмококкового заражения по сравнению с RASV-CPS184– (контроль пустой плазмиды) и группами, обработанными BSG. Однако не было заметной разницы в защите между RASV-CPS и мышами, вакцинированными PPV23.

    Фиг.7.

    Выживание мышей, зараженных штаммами S. pneumoniae дикого типа , после иммунизации RASV-CPS. Самок мышей BALB / c иммунизировали перорально дважды с интервалом в 2 недели 1 × 10 9 КОЕ RASV-CPS2 ( A ) или RASV-CPS2 ( B ). Мышам внутрибрюшинно вводили 2 × 10 4 КОЕ D39 ( A ) или 2 × 10 4 КОЕ WU2 ( B ) через 3 недели после вторичной иммунизации. Мышей, иммунизированных PPV23 внутрибрюшинно, включали в качестве положительного контроля.В качестве групп отрицательного контроля использовали мышей, иммунизированных RASV-184 или обработанных BSG. Анализ выживаемости проводился с использованием метода Каплана – Мейера с логранговым критерием (Мантел – Кокса). *** P <0,001 по сравнению с BSG, ### P <0,001 по сравнению с RASV-184.

    Обсуждение

    Штаммы RASV были успешно протестированы для разработки векторов живых вакцин, синтезирующих гетерологичные полисахариды из грамотрицательных бактерий, таких как О-антиген Shigella (47).В этом исследовании мы использовали систему RASV для синтеза и доставки CPS семи серотипов от грамположительного патогена S. pneumoniae в качестве живых вакцин для иммунизации животных. Биосинтез CPSs в S. pneumoniae происходит одним из двух методов, который включает синтазозависимый путь, посредством которого отдельные сахара полимеризуются последовательным, процессивным образом, и полимеразно-зависимый путь, посредством которого собираются дискретные повторяющиеся единицы. полимеризованным способом (7).Только CPS3 и CPS37 синтезируются через синтазозависимый путь. S. pneumoniae CPS 4, 8, 5 и 12F были успешно собраны в грамотрицательной бактерии E. coli , что облегчило разработку биоконъюгированных вакцин с использованием технологии связывания белков-гликанов (4, 56). Здесь мы также подтвердили, что S. pneumoniae CPS2, 3, 5, 6A, 9V, 14 и 18C могут быть успешно синтезированы в системе RASV, которая расширяет возможности применения грамотрицательных бактерий для синтеза грамположительных CPS.В этом исследовании представлена ​​стратегия разработки пневмококковой вакцины, в которой штаммы RASV используются в качестве векторов живых вакцин для синтеза и доставки CPS S. pneumoniae . Таким образом, живые вакцины служат фабрикой по производству защитного антигена у вакцинированного животного-хозяина.

    Полисахариды, присоединенные к ОМ штаммов RASV, могут вызывать LPS-специфические иммунные ответы TD (47), что, как было установлено, связано с присутствием высокоиммуногенных белков, колокализованных на ОМ.Кроме того, Salmonella продемонстрировала превосходные адъювантные характеристики и вызвала устойчивые реакции антител даже у мышей MyD88 — / — и TRIF — / — (57). Результаты иммунизации этого исследования дополнительно подтвердили, что RASV доставлял CPS S. pneumoniae , может также успешно индуцировать сильные CPS-специфические TD-ответы, поскольку CD4 + Т-клетки от мышей, иммунизированных RASV-CPS, показали заметное увеличение CPS- специфическая экспрессия IFN-γ и IL-4 по сравнению с контрольным штаммом с пустой плазмидой после стимуляции ex vivo.Более того, штаммы RASV-CPS индуцировали сравнимые или даже более высокие уровни CPS-специфического IgG, чем PPV23, у мышей. Между тем, продукция CPS-специфичных IFN-γ и IgG2a в группе RASV-CPS была выше, чем в группе PPV23, что согласуется с предыдущими данными, в которых ослабленные штаммы Salmonella индуцировали иммунные ответы, предвзятые Th2 (47 , 58). Мышиный IgG2a, соответствующий человеческому IgG1, взаимодействует с рецепторами Fc-части иммуноглобулинов (FcR) на макрофагах и NK-клетках, тем самым опосредуя опсонофагоцитоз и Ab-зависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC) (59), обеспечивая защиту от бактериальных инфекций.Сывороточные антитела от мышей, иммунизированных RASV-CPS, показали более сильное отложение комплемента и OPA (за исключением RASV-CPS9V и RASV-CPS18C), чем антитела от мышей, обработанных PPV23, что дополнительно продемонстрировало, что система доставки RASV имеет большой потенциал в индукции FcR. -взаимодействующие антитела против S. pneumoniae. Повышенные цитокиновые ответы и отложение комплемента в контрольной группе векторов (RASV-184) по сравнению с группой, обработанной BSG, могут быть отнесены к адъювантным характеристикам Salmonella (57).Штаммы S. Typhimurium как дикого типа, так и аттенуированные были способны вызывать самоограниченные инфекции у человека (60, 61), поэтому штаммы RASV открывают хорошие перспективы для разработки вакцины против пневмококка человека для преодоления недостатка традиционных вакцин, которые в основном индуцируют IgG2 (не преобладающий подтип, взаимодействующий с FcR) у людей.

    Как живой ослабленный вакцинный вектор, RASV способен колонизировать лимфоидные ткани, связанные со слизистой оболочкой, и даже более глубокие лимфоидные ткани, такие как селезенка, тем самым вызывая сильные иммунные ответы в слизистой оболочке и системной иммунной системе (62).Большинство штаммов RASV-CPS, вводимых перорально (за исключением RASV-CPS9V и RASV-CPS18C), индуцировали заметно повышенные уровни CPS-специфического вагинального IgA. Еще одним преимуществом штаммов RASV, доставляющих полисахаридные антигены, является способность живых аттенуированных бактерий стимулировать глобальные иммунные ответы слизистой оболочки (63). Таким образом, мы наблюдали, что пероральные штаммы RASV, доставляющие CPS S. pneumoniae , стимулировали значительный иммунный ответ слизистой оболочки против большинства антигенов CPS по сравнению с относительно слабыми ответами слизистой оболочки у мышей, которым вводили PPV23 (рис.5), что важно для предотвращения инфекции S. pneumoniae на первых встречающихся поверхностях слизистой оболочки носа и легких.

    Безопасность и иммуногенность являются двумя наиболее важными факторами, которые необходимо учитывать при разработке живых векторных вакцин Salmonella для людей, особенно для младенцев и детей раннего возраста. Поэтому мы предприняли несколько подходов для улучшения как иммуногенности, так и безопасности для будущего использования (64–67). Доказано, что штаммы являются полностью безопасными и невоспалительными для новорожденных мышей в дозе, в 10 7 раз превышающей LD 50 родительского штамма дикого типа, которые показали высокий уровень защиты против S.pneumoniae . Штаммы вакцины могут сохранять способность эффективно колонизировать лимфоидные ткани, что может помочь полисахаридным антигенам локализоваться в маргинальной зоне и обеспечить возможности для индукции гуморальных иммунных ответов. Следовательно, недостаток взаимодействия CD21-C3d в B-клетках маргинальной зоны селезенки у младенцев и маленьких детей может быть преодолен. Однако, хотя мы показали, что эти штаммы хорошо переносятся грудными мышами, актуальность мышиной модели для человеческих младенцев все еще остается под вопросом.Также важно наблюдение (64, 65), что материнский иммунитет к RASV фактически усиливает индукцию защитного иммунитета у новорожденных и новорожденных мышей, вакцинированных одним и тем же RASV. Таким образом, иммунные ответы на вектор Salmonella могут усиливать, а не снижать эффективность вакцины при повторном использовании в одном и том же хозяине. Еще одна проблема этого исследования заключается в том, что мы иммунизировали каждую группу мышей только одним штаммом с одним типом капсул и сравнивали индуцированные ответы с группой, иммунизированной PPV23- (содержащей 23 типа капсул).Метод сравнения недостаточно точен. Наш будущий план состоит в том, чтобы включить несколько серотипов CPS в один штамм, что облегчит иммунизацию хозяев с большим количеством типов CPS и должно быть более разумным по сравнению с вакциной PPV23. Также можно вводить смеси штаммов RASV, доставляющих / отображающих несколько защитных антигенов, и это оказалось эффективным для индукции защитного иммунитета (67).

    Размер полисахарида прямо коррелировал с иммуногенностью гликоконъюгатных вакцин (68, 69).В этом исследовании мы наблюдали, что CPS9V и CPS18C, доставляемые RASV, не индуцируют эффективных CPS-специфических вагинальных IgA, что может быть связано с паттерном CPS9V и CPS18C с LMW в штаммах RASV (рис. 4). Активности отложения комплемента на S. pneumoniae и опсонофагоцитоза, вызванного сывороточными антителами в двух группах, оказались сравнимыми или более низкими, чем в группах, получавших PPV23. Результаты подтверждают ранее сделанный вывод о том, что полисахарид HMW обеспечивает более эффективную защиту от бактериальной инфекции.Одна из причин этого была связана с мощными высокоаффинными антителами, индуцированными полисахаридными антигенами HMW (70). Wzz — регулятор, который может регулировать длину полисахарида при синтезе полисахарида со смесью Wzx / Wzy (71). В настоящее время мы оцениваем различные Wzz, полученные от разных бактерий, для генерации более длинных CPS с целью индукции антител высокого уровня IgA и IgG против тех CPS, в которых формы HMW синтезируются недостаточно. В настоящее время проводятся другие исследования по оптимизации иммуногенности CPS9V и CPS18C, доставляемых RASV, посредством генетической манипуляции с размером CPS или концентрированием CPS с помощью наночастиц, таких как везикулы OM.

    В заключение мы клонировали кластеры генов, экспрессированные для синтеза S. pneumoniae CPS2, 3, 5, 6A, 9V, 14 и 18C в штамме RASV. Используя RASV в качестве системы доставки, синтезированные CPS вызывали устойчивые гуморальные и клеточно-опосредованные ответы. CPS-специфическая антисыворотка может опосредовать эффективное отложение комплемента на S. pneumoniae и опсонофагоцитоз соответствующего серотипа бактерий. Хотя мышиные модели пневмококкового заражения другими серотипами не были успешно разработаны в нашей группе, иммунизация RASV-CPS2 или RASV-CPS3 могла защитить мышей от смертельного заражения вирусом S.pneumoniae штаммы D39 и WU2. В целом, мы сообщаем о системе разработки вакцины, которая использует штаммы RASV для синтеза и доставки CPS для производства вакцин против инфекции S. pneumoniae . Применение штаммов RASV для синтеза и доставки полисахаридов могло бы быть расширено, когда дополнительные серотипные CPS S. pneumoniae или других грамположительных бактерий станут пригодными для синтеза, и эта система также прокладывает путь для разработки и производства на основе полисахаридов. вакцины против других важных патогенов.Экономическим преимуществом этого подхода является то, что RASV можно производить в ферментерах и лиофилизировать в термостабильной форме для восстановления во время и в месте безыгольного введения на слизистую оболочку.

    Доступность данных.

    Все данные исследования включены в статью и вспомогательную информацию.

    Благодарности

    Мы благодарим доктора Кеннета Л. Роланда из Университета штата Аризона за критическое чтение и редактирование. Работа поддержана грантом 31970874 Национального научного фонда Китая и грантом R01 AI112680 NIH.

    Сноски

    • Автор: H.S. и Q.K. спланированное исследование; H.S., Q.L., X.B. и Q.K. проведенное исследование; С.В. и Q.K. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; H.S., S.W., R.C. и Q.K. проанализированные данные; и H.S., R.C. и Q.K. написал газету.

    • Рецензенты: Ф.Ф., Вашингтонский университет; и магистр наук, Университет Джорджии.

    • Отчет о конкурирующих интересах: R.C. является соучредителем и совладельцем Curtiss Healthcare, Inc., которая участвует в разработке вакцин против инфекционных болезней сельскохозяйственных животных.

    • Эта статья содержит вспомогательную информацию в Интернете по адресу https://www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.2013350118/-/DCSupplemental.

    • Авторские права © 2021 Автор (ы). Опубликовано PNAS.

    RCSB PDB — 4ZM5: регулятор длины цепи липополисахарида Shigella flexneri O-антигена WzzBSF

    Липополисахарид (LPS), поверхностный полимер грамотрицательных бактерий, помогает бактериям выжить в различных средах и действует как детерминант вирулентности инфекции хозяина .Компонент O-антигена (Oag) LPS демонстрирует модальное распределение длины цепи, которое контролируется сополимеразами полисахаридов (PCP) …

    Липополисахарид (LPS), поверхностный полимер грамотрицательных бактерий, помогает бактериям выжить в различных средах и действует как детерминант вирулентности инфекции хозяина. Компонент O-антигена (Oag) ЛПС демонстрирует модальное распределение длины цепи, которое контролируется сополимеразами полисахаридов (PCP). Молекулярные основы регуляции длин цепей Oag остаются неясными, несмотря на обширный мутагенез и структурные исследования PCPs из Escherichia coli и Shigella.Здесь мы идентифицировали одиночную мутацию (A107P) Shigella flexneri WzzBSF с помощью метода случайного мутагенеза, который вызывает укороченное распределение длин цепи Oag у бактерий. Мы определили кристаллические структуры периплазматических доменов WzzBSF дикого типа и мутанта A107P. Обе структуры образуют очень похожую открытую тримерную сборку в кристаллах и демонстрируют сходную тенденцию к самоассоциации в растворе. Исследования связывания с помощью биослойной интерферометрии показывают совместное связывание полисахарида очень короткого (VS) ядра-плюс-O-антигена (COPS) с периплазматическими доменами обоих белков, но со сниженным сродством к мутанту A107P.Наши исследования показывают, что тонкие и локализованные структурные различия в PCP могут иметь драматическое влияние на распределение длин цепей LPS в бактериях, например, изменяя сродство к субстрату, что подтверждает роль структуры растущего полимера Oag в этом процессе.


    Ссылки по теме: & nbsp
    Организационная принадлежность : & nbsp

    Школа химии и молекулярных биологических наук, Университет Квинсленда, Брисбен, штат 4072, Австралия; Институт молекулярной биологии, Университет Квинсленда, Брисбен, штат Квартал, 4072, Австралия; Австралийский исследовательский центр инфекционных заболеваний, Университет Квинсленда, Брисбен, штат Квартал, 4072, Австралия.


    Hide Full Abstract

    Генеральный директор Wizz Air говорит, что новые самолеты Airbus увеличат дальность полета до Индии

    Кристофер Джаспер

    Компания со скидками Wizz Air Holdings Plc рассматривает возможность использования нового парка дальнемагистральных узкофюзеляжных самолетов Airbus SE для запуска рейсов из Лондона в Дубай и даже из Центральной Европы в Индию, что станет еще одним вызовом для сетевых соперников.

    Заказанные на прошлой неделе 20 самолетов A321 XLR позволят Wizz расширить свое присутствие и увеличить пропускную способность на существующих направлениях, сказал в интервью генеральный директор Йожеф Варади.Авиакомпания из Будапешта не планирует использовать их на трансатлантических маршрутах.

    Wizz, крупнейший перевозчик со скидкой в ​​Восточной Европе, объявил о заказе XLR на Парижском авиасалоне вскоре после того, как Airbus представил модель — новейшего члена своего семейства A320 — как вызов Boeing Co. на рынках средней дальности. Варади сказал, что самолет, имеющий дальность полета 4700 морских миль и 239 кресел при высокой плотности размещения, позволит Wizz добавить еще пару часов полета к операциям, которые в настоящее время ограничены пятью или шестью часами.Bloomberg
    «Мы соединим точки нашей существующей сети, но мы также будем искать новые возможности», — сказал он в Лондоне. «XLR будет доставлен через четыре года, так что у нас есть достаточно времени, чтобы разобраться с этим».

    рейсов Wizz пролегают из Исландии на Полярном круге в Дубай в Персидском заливе и с Канарских островов в Атлантике в Астану в Казахстане. Самолеты A321, как в стандартной, так и в дальнемагистральной версии, будут составлять 80% парка через четыре года. Варади сказал, что полностью переключился бы на эту модель, если бы все аэропорты, которые обслуживает Wizz, имели взлетно-посадочные полосы, достаточно длинные, чтобы вместить самолет.

    Сделка XLR является частью покупки 50 самолетов инвестором Wizz Indigo Partners. Некоторые из самолетов отправятся на Frontier Airlines в США и на чилийскую JetSmart. По словам Варади, роль Indigo заключалась в обеспечении лучших цен посредством оптовых сделок, но контракты на продажу заключаются с отдельными авиакомпаниями.

    Генеральный директор, который основал компанию Wizz в 2004 году и обнародовал ее в 2015 году, сказал, что он «оптимистичен» в отношении рыночных условий в Европе, несмотря на предупреждение 16 июня крупнейшей авиакомпании региона Deutsche Lufthansa AG о том, что доходы сокращаются из-за стоимости проезда. война на ближнемагистральных маршрутах.

    Варади сказал, что Wizz имеет все возможности для того, чтобы выдержать давление на ценообразование, поскольку она сосредоточена на Восточной Европе, где ВВП растет быстро, а затраты на 50% ниже, чем в подразделении Lufthansa Eurowings. По его словам, конкуренция в Вене, где Wizz соперничает с Lufthansa, Ryanair Holdings Plc, EasyJet Plc и владельцем British Airways IAG SA, демонстрирует признаки ослабления.

    Другая западноевропейская база Wizz находится в лондонском Лутоне, где, по словам генерального директора, спрос держится хорошо, несмотря на опасения, что U.К. может быть на пути к жесткому Брекситу при новом премьер-министре. Он добавил, что потоки пассажиров, прибывающих на рейсах из стран Восточной Европы, остаются высокими, несмотря на то, что они полагаются на рабочих-мигрантов.

    Wizz не заинтересована в участии в торгах на авиакомпанию Thomas Cook Group Plc, которую туроператор выставил на продажу, хотя она может рассмотреть отдельные слоты в аэропортах, которые могут стать доступными, сказал Варади.

    Предположения о том, что сетевые перевозчики, такие как Lufthansa, могут стремиться покупать уцененных конкурентов, поскольку они изо всех сил пытаются заработать деньги на собственных перевозках на короткие расстояния, игнорируют оценки недорогих специалистов, по словам генерального директора.Рыночная капитализация Wizz составляет 3,39 миллиарда евро (3,9 миллиарда долларов), что на 48% больше, чем у Lufthansa, а стоимость Ryanair почти на 60% больше, чем у немецкой компании.

    alexxlab

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.