Блок питания на микросхеме tl431. Схема включения стабилитрона tl431 и проверка микросхемы мультиметром
В этой статье мы узнаем, как работает интегральный стабилизатор напряжения TL431, в регулируемых блоках питания.
Технически TL431 называется программируемым шунтирующим регулятором, простыми словами это может быть определено как регулируемый стабилитрон. Давайте рассмотрим его спецификацию и указания по применению.
Стабилитрон TL431 имеет следующие основные функции:
- Выходное напряжение устанавливается или программируется до 36 вольт
- Низкое выходное сопротивление около 0,2 Ома
- Пропускная способность до 100 мА
- В отличие от обычных диодов Зенера, генерация шума в TL431 незначительна.
- Быстрое переключение.
Общее описание TL431
TL431 — регулируемый или программируемый регулятор напряжения.
Необходимое выходное напряжение может быть установлено с помощью всего двух внешних (делитель напряжения), подключенных к выводу REF.
На приведенной ниже схеме показана внутренняя структурная схема устройства, а также PIN-код обозначения.
Распиновка TL431
Схема включения стабилитрона TL431
Теперь давайте посмотрим, как этот прибор может быть использован в практических схемах. Схема ниже показывает, как можно использовать TL431 в роли обычного регулятора напряжения:
Приведенный выше рисунок показывает, как с помощью всего пары резисторов и TL431 получить регулятор, работающий в диапазоне 2,5…36 вольт. R1 представляет собой переменный резистор, который используется для регулировки выходного напряжения.
Следующая формула справедлива для вычисления сопротивлений резисторов, в случае если мы хотим получить какое-то фиксированное напряжение.
Vo = (1 + R1/R2)Vref
При совместном применении стабилизаторов серии 78xx (7805,7808,7812..) и TL431 можно использовать следующую схему:
TL431 катод соединен с общим выводом 78xx. Выход 78xx подключен к одной из точки резисторного делителя напряжения, который определяет выходное напряжение.
Вышеуказанные схемы использования TL431 ограничены выходным током 100 мА максимум.
Для получения более высокого выходного тока может быть использована следующая схема.
В приведенной выше схеме большинство компонентов схожи с обычным регулятором, приведенным выше, за исключением того, что здесь катод подключен к плюсу через резистор и к их точке соединения подсоединена база буферного транзистора. Выходной ток регулятора будет зависеть от мощности данного транзистора.
Области применения TL431
Выше изложенные варианты применения TL431 могут быть использована в любом месте, где требуется точность настройки выходного напряжения или опорного напряжении. В настоящее время это широко используется в импульсных источниках питания для генерации точного опорного напряжения.
(скачено: 846)
Сразу оговорюсь, что данная статья не панацея. У кого-то это может не пройти.
Для начала я расскажу о TL431, и для чего она служит. TL431 это управляемый стабилитрон с помощью которого можно получить стабилизированное напряжения в широких пределах от 2,5 вольта до 36 вольт. Применяя эту микросхему можно сделать источник опорного напряжения для блоков питания, а также для различных измерительных схем.
Рисунок взят из даташита компании ON Semiconductor
Ниже приведены два варианта даташит для этой микросхемы
- Даташит компании ON Semiconductor https://www.onsemi.com/pub/Collateral/TL431-D.PDF
- Даташит компании Texas Instruments http://www.ti.com/lit/ds/symlink/tl431.pdf
Цоколевка этой микросхемы наилучшим образом отображена в даташите компании ON Semiconductor
В даташите Texas Instruments обнаружена одна небольшая деталь
На всех рисунках есть одна надпись «top view» это переводится как «вид сверху» при невнимательном просмотре даташит, не зная, что это может обозначать, можно неправильно распаять на плате.
В одной из своих схем я применил микросхему TL431, и она оказалась неисправной. Поискав по форумам я нашел способ проверки этой микросхемы. А в некоторых местах я видел как вызванивают эту микросхему с помощью мультиметра но, увы, все это не то. Я тоже сначала попытался проверить мультиметром но сразу отложил в сторону это мероприятие. И решил попробовать проверить с помощью универсального тестера компонентов , который был ранее приобретен на алиэкспресс.
Во время проверки составил таблицу. Сначала проверил в режиме двухполюсника (если в таблице указаны два вывода, просто необходимо объединить оба вывода вместе).
Результаты измерения первого экземпляра
Измерение 1 – REF; 2 — катод.
Измерение 1 – анод; 2 — катод.
Измерение 1 — REF, катод; 2 – анод.
Измерение 1 – REF; 2 – катод, анод.
Измерение 1 – REF, 2 – анод, 3 – катод.
Результаты измерения второго экземпляра.
Небольшая разница присутствует. Глядя на таблицу замечаешь определенную закономерность. Например, в 4 строке это фактически режим работы TL431 для получения 2,5 вольта. Но самое интересное режим измерения в режиме трехполюсника. В одном случае определяется как транзистор, а во втором случае как отсутствует деталь. Самое интересное в случае когда транзистор определяется: определятся транзистор структуры NPN, вывод REF определятся как эмиттер, анод как база, а катод как коллектор. Между REF и катодом диод катод, которого направлен в сторону катода.
На основании этих данных уже можно судить исправлена микросхема или нет, а также определить цоколевку.
TL 431 это программируемый шунтирующий регулятор напряжения. Хотя, эта интегральная схема начала выпускаться в конце 70-х она до сих пор не сдаёт своих позиций на рынке и пользуется популярностью среди радиолюбителей и крупных производителей электротехнического оборудования. На плате этого программируемого стабилизатора находится фоторезистор, датчик измерения сопротивления и терморезистор. TL 431 повсеместно используются в самых разных электрических приборах бытовой и производственной техники. Чаще всего этот интегральный стабилитрон можно встретить в блоках питания компьютеров, телевизоров, принтеров и зарядок для литий-ионных аккумуляторов телефонов.
TL 431 интегральный стабилитрон
Основные характеристики программируемого источника опорного напряжения TL 431
- Номинальное рабочее напряжение на выходе от 2,5 до 36 В;
- Ток на выходе до 100 мА;
- Мощность 0,2 Ватт;
- Диапазон рабочей температуры для TL 431C от 0° до 70°;
- Диапазон рабочей температуры для TL 431A от -40° до +85°.
Точность интегральной схемы TL 431 указывается шестой буквой в обозначении:
- Точность без буквы – 2%;
- Буква А – 1%;
- Буква В – 0, 5%.
Столь широкое его применения обусловлено низкой ценой, универсальным форм-фактором, надёжностью, и хорошей устойчивостью к агрессивным факторам внешней среды. Но также следует отметить точность работы данного регулятора напряжения. Это позволило ему занять нишу в устройствах микроэлектроники.
Основное предназначение TL 431 стабилизировать опорное напряжение в цепи . При условии, когда напряжение на входе источника ниже номинального опорного напряжения, в программируемом модуле транзистор будет закрыт и проходящий между катодом и анодом ток не будет превышать 1 мА. В случае, когда выходное напряжение станет превышать запрограммированный уровень, транзистор будет открыт и электрический ток сможет свободно проходит от катода к аноду.
Схема включения TL 431
В зависимости от рабочего напряжения устройства схема подключения будет состоять из одноступенчатого преобразователя и расширителя (для устройств 2,48 В.) или модулятора небольшой ёмкости (для устройств 3.3 В). А также чтобы снизить риск короткого замыкания, в схему устанавливается предохранитель, как правило, за стабилитроном. На физическое подключение оказывает влияние форм-фактор устройства, в котором будет находиться схема TL 431, и условия окружающей среды (в основном температура).
Стабилизатор на основе TL 431
Простейшим стабилизатором на основе TL 431 является параметрический стабилизатор. Для этого в схему нужно включить два резистора R 1, R 2 через которые можно задавать выходное напряжение для TL 431 по формуле: U вых= Vref (1 + R 1/ R 2). Как видно из формулы здесь напряжение на выходе будет прямо пропорционально отношению R 1 к R 2. Интегральная схема будет держать напряжение на уровне 2,5 В. Для резистора R 1 выходное значение рассчитывается так: R 1= R 2 (U вых/ Vref – 1).
Эта схема стабилизатора, как правило, используется в блоках питания с фиксированным или регулируемым напряжением. Такие стабилизаторы напряжения на TL 431 можно обнаружить в принтерах, плоттерах, и промышленных блоках питания . Если необходимо высчитать напряжение для фиксированных источников питания, то используем формулу Vo = (1 + R 1/ R 2) Vref.
Временное реле
Прецизионные характеристики TL 431 позволяют использовать его не совсем по «прямому» назначению. Из-за того, что входной ток этого регулируемого стабилизатора составляет от 2 до 4 мкА, то используя данную микросхему можно собрать временное реле. Роль таймера в нём будет исполнять R1 который начнёт постепенно заряжаться после размыкания контактов S 1 C 1. Когда напряжение на выходе стабилизатора достигнет 2,5 В, транзистор DA1 будет открыт, через светодиоды оптопары PC 817 начёт проходить ток, а открытый фоторезистор замкнёт цепь.
Термостабильный стабилизатор на основе TL 431
Технические характеристики TL 431 позволяют создавать на его основе термостабильные стабилизаторы тока
Цоколёвка и проверка исправности TL 431
Форм-фактор TL 431 и его цоколёвка будет зависеть от производителя. Встречаются варианты в старых корпусах TO -92 и новых SOT-23. Не стоит забывать про отечественный аналог: КР142ЕН19А тоже широко распространённый на рынке. В большинстве случаев цоколёвка нанесена непосредственно на плату. Однако не все производители так поступают, и в некоторых случаях вам придётся искать информацию по пинам в техпаспорте того или иного устройства.
TL 431 является интегральной схемой и состоит из 10 транзисторов. Из-за этого проверить её мультиметром невозможно. Для проверки исправности микросхемы TL 431 нужно использовать тестовую схему. Конечно, часто нет смысла искать перегоревший элемент и проще заменить схему целиком.
Программы расчёта для TL 431
В интернете существует множество сайтов, где вы сможете скачать программы-калькуляторы для расчёта параметров напряжения и силы тока. В них можно указывать типы резисторов, конденсаторов, микросхем и прочих составных частей схемы. TL 431 калькуляторы также бывают онлайн , они по функционалу проигрывают устанавливаемым программам, но если вам нужно исключительно входные/выходные и максимальные значения схемы, то они справятся с этой задачей.
При ремонте была явная необходимость в первую очередь проверить исправность источника опорного напряжения, но не проверял, откладывал на потом и занимался тем, с чем можно было повременить. Понимал, что «туплю», но ничего поделать не мог. Тестера для проверки TL431 не было. В очередной раз подпаивать «на коленке» детальки проверочной схемы уже было невмоготу. И как не хотелось отвлекаться от начатого ремонта, но пришлось. Душу согревало, что в следующий раз, когда понадобиться проверить Т-эльку проблем не будет.
Схема электрическая тестера
В виртуальном пространстве интернета схем для такой проверки множество. Разницу между ними усмотрел в том, что одни сообщают — сигнализируют о исправности электронного компонента миганием — загоранием светодиодов, другие создают предпосылки для измерения напряжения на выходе, по величине которого и следует судить о исправности TL431. С одной стороны первые вроде как самодостаточны, в дополнение же ко вторым необходим вольтметр. С другой стороны первым нужно «верить на слово», вторые же сами ничего «не решают», а выдают объективную информацию для принятия решения. К тому-же вольтметр всегда под рукой. Выбрал второй вариант, он к тому же ещё и проще, «цена вопроса» — три постоянных резистора.
За подходящим корпусом, для помещения в него всего необходимого, дело не встанет, на сайте есть статья «Изготовление сетевой вилки с нестандартным корпусом». Начал с оборудования верхней крышки корпуса, для этого понадобились трёхвыводная панелька, кнопка нажимного действия и тетрадный лист в клеточку на котором был начерчен круг в соответствии с диаметром крышки и шилом намечены места установки панельки и кнопки. Вырезанный круг уже стал шаблоном, был помещён на крышку и на ней произведена шилом соответствующая разметка. Далее, тем-же шилом, были проколоты отверстия необходимого диаметра под контакты панельки и кнопки.
Так на верхнюю крышку установлены панелька и кнопка (их контакты загнуты изнутри и пропаяны оловом), на среднюю часть корпуса, в качестве разъёма питания, встал «тюльпан», на нижней крышке разместились штыри для подключения к мультиметру. То, что в качестве корпуса выступили некоторые части (две крышки и горлышко) пластиковой ёмкости (молочной бутылки) вероятно ясно и без пояснений.
Осталось с внутренней стороны крышки, на контактах панельки и кнопки смонтировать саму схему, в первую очередь установил три резистора, во вторую были припаяны все соединительные провода. Проводов получилось неожиданно много, тут спешить не надо — немудрено и перепутать.
В этот раз не стал для дополнительного крепления применять клей, а «посадил» всё на меленькие саморезы. По три штуки на каждом элементе. Так более ремонтопригодно, хотя и ремонтировать тут навряд ли, что-то понадобиться. Пробник собран, раз и на всегда. Осталось проверить его работу и соответственно исправность имеющихся в наличии источников опорного напряжения TL431.
Видео
Раз дело «выгорело» и пробник теперь есть, осталось помнить об этом и суметь в случае необходимости быстро его идентифицировать из числа других в таких, же корпусах, что лежат в предназначенной для этого коробке. А ещё нужно помнить, что рабочее напряжение пробника 12 вольт, что при не подключённом TL431 мультиметр будет показывать напряжение 10 вольт, при подключённом 5 вольт, а при нажатой кнопке 2,5 вольта и вдобавок правильно установить проверяемый компонент в панельку. А можно особо и не запоминать, а оформить соответствующим образом лицевую панель. Автор проекта: Babay iz Barnaula .
Обсудить статью ПРОВЕРКА ИСТОЧНИКА ОПОРНОГО НАПРЯЖЕНИЯ TL431
Каталог поставщиков на . do ac
- Результаты поиска по запросу . do ac
- портативный ac линейный привод двигатель переменного тока ac эквивалент нагрузки солнечный ac автомобиль ac аксессуары розетку переменного тока
Электронные весы, электронные весы
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Производитель, Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Siemens plc, HMI сенсорная панель, Mitsubishi abb, Allen Bradley
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:микросхемы, интегральных схем, электронных компонентов
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Производитель, Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Набор для преобразования электромобилей, двигатель электромобиля, комплект для преобразования электрического мотоцикла, двигатель электрического велосипеда, комплект для преобразования электрического велосипеда
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Производитель, Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Контроллер ПЛК, модуль ПЛК, HMI, инвертор, серводвигатель
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Серводвигатель переменного тока, серводвигатель, Планетарная коробка передач, промышленный кабель, пластиковая упаковка
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Интегральные схемы, диоды, транзисторы, конденсаторы, резистор
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Производитель, Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Программируемый контроллер, сенсорный экран, процессор, преобразователь частоты, модуль ввода/вывода
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Серводвигатель, шаговый двигатель, сервопривод мотор, Драйвер шагового двигателя, муфта
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Производитель
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:IC Интегральной Схемы, IGBT ИПМ Модуль, MLCC Емкость, Диоды, Транзисторы
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Торговая компания , Агент
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:ПЛК, серводвигатель, HMI.
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Сельскохозяйственная техника, культиватор, Harverster, технологическая машина, запасные части
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Датчики, PLC, H, серводвигатель, HMI
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Двигатель переменного тока, двигатель постоянного тока, мотор эпицентра деятельности, гравировальный станок, двигатель переменного тока/DCGear
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Производитель, Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:SIEMENS, ABB, AB Allen-Bradley, Schneider, GE
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Торговая компания , Дистрибьютор / Оптовик
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Датчики и передатчики, оборудование для анализа воды, инструменты анализа, анализатор качества воды, датчик воды
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Производитель, Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Электронные компоненты, аксессуары и телекоммуникации, другие электронные компоненты, продукты автоматизации, промышленные продукты
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Сварочный аппарат MMA, сварочный аппарат MIG, сварочный аппарат TIG, плазменный резак
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Производитель, Торговая компания
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Силовой трансформатор, тороидальный трансформатор, импульсный адаптер питания, импульсный источник питания
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Производитель
Подтверждение квалификации: Продукт/Услуга:Источник питания, адаптер питания, светодиодный драйвер, переключатель POE, привод переменного тока
Страна/Регион: Китай Тип деятельности:Производитель, Торговая компания
Подтверждение квалификации: Результат поиска информации об этих продуктах и поставщиках уже переведен языковыми средствами для Вашего удобства. Если у Вас есть любое предложение по этой странице, пожалуйста, помогите нам улучшить его.All product and supplier information in the language(s) other than English displaying on this page are information of www.alibaba.com translated by the language-translation tool automatically. If you have any query or suggestion about the quality of the auto-translation, please email us at (email address). Alibaba.com and its affiliates hereby expressly disclaim any warranty, express or implied, and liability whatsoever for any loss howsoever arising from or in reliance upon any auto-translated information or caused by any technical error of the language-translation tool.
Микросхемы[ 01 ] [ 02 ] [ 03 ] [ 04 ] [ 05 ] [ 06 ] [ 07 ] [ 08 ] [ 09 ] [ 10 ][ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ] [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] [ 22 ] [ 23 ] [ 24 ] [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ] [ 28 ] [ 29 ] [ 30 ] [ 31 ] [ 32 ] [ 33 ] [ 34 ] [ 35 ] [ 36 ] [ 37 ] [ 38 ] [ 39 ] [ 40 ] [ 41 ] [ 42 ] [ 43 ] [ 44 ] [ 45 ] [ 46 ] [ 47 ] [ 48 ] [ 49 ] [ 50 ] [ 51 ] [ 52 ]
[ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ] [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] [ 22 ] [ 23 ] [ 24 ] [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ] [ 28 ] [ 29 ] [ 30 ] [ 31 ] [ 32 ] [ 33 ] [ 34 ] [ 35 ] [ 36 ] [ 37 ] [ 38 ] [ 39 ] [ 40 ] [ 41 ] [ 42 ] [ 43 ] [ 44 ] [ 45 ] [ 46 ] [ 47 ] [ 48 ] [ 49 ] [ 50 ] [ 51 ] [ 52 ] |
/ analysis-step-Run / ce9bbc9a-829d-431c-854a-1211a12df7d3 / — ENCODE
{ "status": "выпущен", "date_created": "2020-12-26T22: 41: 42.862668 + 00: 00", "представленный_by": "/ users / 6bae687f-b77a-46b9-af0e-a02c135cf42e /", "псевдонимы": [ "конвейер обработки кодирования: tf-chip-seq-pooled-pseudoreplicated-idr-step-v-1-6812b1ee-30cc-4424-bdaa-a7cc762350e2-fb07122cb994bfa111e00f269b608dda90bbce499ff8d2b30b" ], "schema_version": "5", "analysis_step_version": { "minor_version": 0, "date_created": "2019-11-15T05: 51: 10.402582 + 00: 00 ", "analysis_step": { "документы": [], "date_created": "2019-11-15T05: 48: 11.083132 + 00: 00", "Submit_by": "/ users / 98fb23d3-0d79-4c3d-981d-01539e6589f1 /", "status": "выпущен", "псевдонимы": [ "кодировать: tf-chip-seq-pooled-pseudoreplicated-idr-step-v1" ], "schema_version": "15", "step_label": "tf-chip-seq-pooled-pseudoreplicated-idr-step", "title": "Шаг idr, объединенный в объединенный псевдореплицированный idr последовательности TF ChIP", "major_version": 1, "analysis_step_types": [ "объединение", "пик вызова", "псевдореплицированный IDR" ], "input_file_types": [ "выравнивания", "регионы списка исключений" ], "output_file_types": [ "Пики рейтинга IDR", «Пики с пороговым значением IDR» ], "родители": [ "/ analysis-steps / chip-seq-alignment-step-v-2 /" ], "@id": "/ analysis-steps / tf-chip-seq-pooled-pseudoreplicated-idr-step-v-1 /", "@тип": [ "Шаг анализа", "Элемент" ], "uuid": "e4b31518-205e-43b1-afb8-522e1cc64da6", "name": "tf-chip-seq-pooled-pseudoreplicated-idr-step-v-1", "pipelines": [ "/ pipelines / ENCPL367MAS /" ], «текущая_версия»: «/ анализ-шаг-версии / tf-chip-seq-pooled-pseudoreplicated-idr-step-v-1-0 /», "версии": [ "/ analysis-step-versions / tf-chip-seq-pooled-pseudoreplicated-idr-step-v-1-0 /" ] }, "schema_version": "4", "software_versions": [ "/ версии-программного обеспечения / fabc37f2-612c-4fb1-b975-63fd2545cb9a /", "/ версии программного обеспечения / 41f43709-2239-4388-8121-0ab8e3eae8d7 /", "/ версии программного обеспечения / d22a5931-5436-4958-bb35-f70a93af2ed7 /", "/ версии-программного обеспечения / 89bc4295-df3d-465e-9a1a-2472d06d3d04 /" ], "Submit_by": "/ users / 98fb23d3-0d79-4c3d-981d-01539e6589f1 /", "псевдонимы": [ "кодировать: tf-chip-seq-pooled-pseudoreplicated-idr-step-v-1-0" ], "status": "выпущен", "@id": "/ analysis-step-versions / tf-chip-seq-pooled-pseudoreplicated-idr-step-v-1-0 /", "@тип": [ "AnalysisStepVersion", "Элемент" ], "uuid": "4a8ba9ff-b074-43f9-9a33-bb89aa1d492c", "name": "tf-chip-seq-pooled-pseudoreplicated-idr-step-v-1-0" }, "@id": "/ analysis-step-run / ce9bbc9a-829d-431c-854a-1211a12df7d3 /", "@тип": [ "AnalysisStepRun", "Элемент" ], "uuid": "ce9bbc9a-829d-431c-854a-1211a12df7d3", "@context": "/ terms /", "аудит": {} }
/ analysis-step-Run / a2010d39-b84f-431c-8caa-94e935fffd1a / — ENCODE
{ "status": "выпущен", "date_created": "2020-11-13T13: 54: 56.855839 + 00: 00 ", "представленный_by": "/ users / 6bae687f-b77a-46b9-af0e-a02c135cf42e /", "псевдонимы": [ "конвейер-кодирования-обработки: гистоновый-чип-seq-псевдореплицированный-перекрывающийся-стабильные-пики-формат-файла-шаг-преобразование-v-1-8c1d67be-8d79-4bd2-9c40-e96929095b4b-fb07122cb994bfa111e00f269b608d90bbb3b3cb608d908bb3f2b3b608d8bb8bb3b3b3b3d8bb3db ], "schema_version": "5", "analysis_step_version": { "Submit_by": "/ users / 98fb23d3-0d79-4c3d-981d-01539e6589f1 /", "псевдонимы": [ "кодировать: последовательность-гистонового чипа-псевдорепликации-перекрытия-стабильных-пиков-формата-файла-преобразования-шаг-v-1-0" ], "software_versions": [ "/ версии программного обеспечения / 616bc458-2260-462e-8065-54240204da57 /" ], "minor_version": 0, "analysis_step": { "документы": [], "date_created": "2019-11-15T05: 48: 06.411007 + 00: 00 ", "Submit_by": "/ users / 98fb23d3-0d79-4c3d-981d-01539e6589f1 /", "status": "выпущен", "псевдонимы": [ "кодировать: последовательность-гистонового чипа-псевдорепликации-перекрытия-стабильных-пиков-формата-файла-преобразования-шаг-v1" ], "schema_version": "15", "step_label": "этап-преобразования-формата-файла-гистонового-чипа-псевдорепликации-перекрытия-стабильных-пиков", "title": "Шаг преобразования формата файла с псевдореплицированными пиками последовательностей гистонового чипа и стабильных пиков", "major_version": 1, "analysis_step_types": [ "преобразование формата файла" ], "input_file_types": [ "псевдорепликационные пики" ], "output_file_types": [ "псевдорепликационные пики" ], "родители": [ "/ этапы анализа / последовательность-гистонового чипа-псевдорепликации-перекрытия-шаг-v-1 /" ], "@id": "/ analysis-steps / histone-chip-seq-pseudoreplicated-overlap-stable-peaks-file-format-conversion-step-v-1 /", "@тип": [ "Шаг анализа", "Элемент" ], "uuid": "0bbf3525-a5d5-414b-a6f8-5b19b3221d1f", "name": "гистоновый-чип-последовательность-псевдорепликация-перекрытие-стабильные-пики-формат-файла-преобразование-шаг-v-1", "pipelines": [ "/ pipelines / ENCPL809GEM /", "/ pipelines / ENCPL612HIG /" ], "текущая_версия": "/ анализ-этап-версии / гистон-чип-последовательность-псевдорепликация-перекрытие-стабильные-пики-формат-файла-преобразование-этап-v-1-0 /", "версии": [ "/ анализ-этап-версии / гистон-чип-последовательность-псевдорепликация-перекрытие-стабильные-пики-формат-файла-преобразования-этап-v-1-0 /" ] }, "status": "выпущен", "date_created": "2019-11-15T05: 51: 11.272362 + 00:00 ", "schema_version": "4", "@id": "/ analysis-step-versions / histone-chip-seq-pseudoreplicated-overlap-stable-peaks-file-format-conversion-step-v-1-0 /", "@тип": [ "AnalysisStepVersion", "Элемент" ], "uuid": "d57c37fa-5643-4406-a55a-ac997a0dc21c", "имя": "последовательность-псевдорепликации-гистонового-чипа-перекрытия-стабильных-пиков-формата-файла-преобразования-шаг-v-1-0" }, "@id": "/ analysis-step-run / a2010d39-b84f-431c-8caa-94e935fffd1a /", "@тип": [ "AnalysisStepRun", "Элемент" ], "uuid": "a2010d39-b84f-431c-8caa-94e935fffd1a", "@context": "/ terms /", "аудит": {} }
Номер детали: RG1005P-152-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 1.5КОМ 0,25% 1 / 16Вт 0402 |
Номер детали: RG1005P-162-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: Смола SMD 1.6KOHM 0.25% 1 / 16W 0402 |
Номер детали: RG1005P-182-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: Смола SMD 1.8KOHM 0.25% 1 / 16W 0402 |
Номер детали: RG1005P-132-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 1.3КОМ 0,25% 1/16 Вт 0402 |
Номер детали: RG1005P-1240-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 124 OHM 0,25% 1 / 16W 0402 |
Номер детали: RG1005P-122-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: Смола SMD 1.2KOHM 0.25% 1 / 16W 0402 |
Номер детали: RG1005P-1212-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 12.1 кОм 1/16 Вт 0402 |
Номер детали: RG1005P-1270-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 127 OHM 0,25% 1 / 16W 0402 |
Номер детали: RG1005P-1330-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 133 OHM 0,25% 1 / 16W 0402 |
Номер детали: RG1005P-1370-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 137 OHM 0.25% 1 / 16Вт 0402 |
Номер детали: RG1005P-1400-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 140 OHM 0,25% 1 / 16W 0402 |
Номер детали: RG1005P-1430-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 143 OHM 0,25% 1 / 16W 0402 |
Номер детали: RG1005P-1470-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 147 OHM 0.25% 1 / 16Вт 0402 |
Номер детали: RG1005P-1540-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 154 OHM 0,25% 1 / 16W 0402 |
Номер детали: RG1005P-1580-C-T10 | Производитель: Susumu | Упаковка: | Кол-во: 0 | Описание: RES SMD 158 OHM 0,25% 1 / 16W 0402 |
Встроенный регулятор микрожидкостного давления, который способствует воспроизводимой загрузке клеток и гидрогелей в платформы микрофизиологических систем
Abstract
Совместное культивирование нескольких типов клеток в трехмерных (3D) культурах лучше имитирует микрофизиологическую среду in vivo , и получил широкое распространение в последние годы с развитием систем «орган на чипе».Однако узкое место в настройке этих устройств возникает в результате доставки геля в микрожидкостный чип, чувствительный к колебаниям давления, что затрудняет удержание геля в определенной области, особенно когда выполняется ручное управление. В этой статье мы представляем новую конструкцию встроенного модуля регулятора с предохранительными микроклапанами для сброса давления, которые могут способствовать стабильной доставке геля в определенные области микроканала, сохраняя при этом хорошо контролируемые, неразрывные границы раздела гелей.Эта конструкция регулятора давления может быть интегрирована в микрожидкостные микросхемы различных конструкций и совместима с широким спектром устройств для впрыска геля, управляемых автоматически или вручную при различных скоростях потока. Чувствительность и рабочий диапазон этого регулятора давления можно регулировать, изменяя ширину конструкции предохранительного микроклапана для сброса давления. Эффективность конструкции подтверждается ее включением в микрофлюидную платформу, которую мы разработали для создания трехмерных васкуляризированных микроорганизмов (VMO).Воспроизводимая загрузка геля продемонстрирована как для автоматического шприцевого насоса, так и для микропипеточного устройства с ручным управлением. Такая конструкция обеспечивает быструю и воспроизводимую загрузку гидрогелей в микрофлюидные устройства без риска разрыва границ раздела гель-воздух.
Введение
В последние годы трехмерные модели клеточных культур привлекли большое внимание, поскольку они могут лучше имитировать микрофизиологическую среду in vivo за счет включения различных типов клеток в гидрогели, включая нативные внеклеточные матрицы (ЕСМ), для долгосрочных клеток. культура [1].Путем интеграции трехмерных гидрогелей в микрожидкостные чипы можно точно контролировать дополнительные параметры микросреды, такие как динамические механические сигналы (например, напряжение сдвига жидкости, межклеточный поток жидкости и т. Д.) Или пространственно-временные химические градиенты (например, градиенты фактора роста) [2]. Эти сложные микрожидкостные системы культур клеток могут способствовать формированию трехмерных микротканей с определенными физиологическими функциями, так что сейчас мы начинаем создавать модели «орган на чипе» [3-5].
Для того, чтобы предоставить клеткам возможность доступа к питательным веществам и кислороду, а также для удаления отходов, разработка трехмерных клеточных культур на основе перфузии с физиологическим потоком через интерстициальное пространство тканей стала критически важной [6-8]. Наиболее часто используемый метод — установить поток жидкости путем создания двух микрофлюидных каналов рядом с тканевой камерой, засеянной суспензией клеток-ECM [9-11]. В этой геометрии критически важно, чтобы смесь клетка-ЕСМ была ограничена внутри тканевой камеры без утечки в соседние микрофлюидные каналы, что могло бы привести к обструкции потока.И наоборот, поверхность контакта между жидкостью внутри микрожидкостного канала и суспензией клетки-ЕСМ внутри тканевой камеры должна быть достаточной для биотранспортации через микроткань. Хотя массивы микростолбиков и другие микроструктуры, функционирующие как микроклапаны, могут в определенной степени предотвратить разрыв геля [12, 13], сбои в работе часто происходят из-за переходных процессов внутреннего давления, превышающих давление разрыва интерфейса воздушная ячейка / ECM во время нагрузки. Использование шприцевого насоса, при котором дозируемый объем и подаваемый расход можно более точно регулировать, может улучшить воспроизводимость по сравнению с ручной загрузкой, однако соединять шприц с каждым микрожидкостным чипом через трубку затруднительно, и легко могут образовываться пузырьки. при подсоединении и снятии трубок, что делает его нежелательным для приложений с высокой пропускной способностью.Кроме того, загрузка геля с помощью шприцевых насосов не подходит для некоторых гидрогелей, которые требуют быстрого смешивания с каталитическим реагентом для полной полимеризации. Благодаря своей гибкости и простоте эксплуатации микропипеточные дозаторы являются предпочтительной альтернативой для загрузки гидрогеля. Однако при ручном управлении трудно добиться постоянной и постоянной скорости потока, что приводит к колебаниям давления и разрыву геля.
В этой статье мы представляем новую конструкцию встроенного модуля регулятора с предохранительными микроклапанами сброса давления, которые могут эффективно поддерживать гидравлическое давление внутри канала загрузки геля в заданном диапазоне.Мощность этого модуля подтверждается его включением в микрофлюидную платформу для культивирования трехмерных васкуляризированных микроорганизмов (3D-VMO). Используя эту микрофлюидную платформу, мы протестировали как автоматическую загрузку геля с помощью шприцевого насоса, так и ручную загрузку геля с помощью микропипеточного устройства. Эти испытания продемонстрировали совместимость модуля с различными системами обработки жидкостей и его гибкость для работы в автоматическом или ручном режиме. Экспериментальные результаты показывают, что встроенный регулятор давления обеспечивает надежную загрузку геля в тканевую камеру при нескольких различных скоростях потока без разрушения соседних микрофлюидных каналов.Наконец, чувствительность и рабочий диапазон регулятора давления можно точно настроить, отрегулировав ширину микроклапанов безопасности относительно ширины границы раздела воздух-гель. Простота конструкции позволяет легко интегрировать его в любой микрожидкостный чип, требующий загрузки гидрогелей.
Материалы и методы
Конструкция модуля регулятора давления
Как показано на, встроенный модуль регулятора давления состоит из капиллярных разрывных клапанов сброса давления (обозначенных как , предохранительные микроклапаны ) и отводных каналов, все они основаны на трех основных конструкциях. принципы.Во-первых, давление разрыва предохранительных микроклапанов в модуле регулятора давления должно быть ниже, чем давление разрыва капиллярных разрывных клапанов тканевой камеры (обозначенных как перфузионные микроклапаны ), используемых для удержания нагруженного геля внутри тканевых камер. Это гарантирует, что предохранительные микроклапаны разорвутся первыми, чтобы высвободить избыточный гель и отрегулировать давление внутри тканевых камер ниже давления разрыва перфузионных микроклапанов. Во-вторых, чтобы перенаправить избыточный гель от камер для тканей, модуль регулятора давления должен быть расположен перед каналом загрузки геля.В-третьих, объем места для хранения избыточного геля должен быть достаточно большим для типичного объема однократной инъекции.
Конструкция модуля регулятора давления. (A) Схема базовой конструкции модуля регулятора давления. (B) Пример конструкции регулятора давления и его интеграция в устройство для трехмерной культуры на основе перфузии. (C) Упрощенная модель аналогии электронной схемы, соответствующая механизму загрузки геля в устройство с модулем регулятора давления. (D) Результаты моделирования процесса загрузки геля как в тканевой камере, так и в модуле регулятора давления без разрыва, когда гидравлическое давление внутри канала загрузки геля меньше давления разрыва их соединенных между собой капиллярных разрывных клапанов.Цветовая схема: синий представляет гель, красный представляет воздух, а желтый представляет границу раздела гель / воздух.
показывает интеграцию конструкции модуля регулятора давления в микрожидкостное устройство на основе перфузии для 3D-VMO. Конструкция чипа состоит из одного канала загрузки геля с тремя центральными камерами для алмазной ткани размером 1 мм (1 × 2 мм), каждая из которых соединена с двумя соседними микрофлюидными каналами (ширина: 100 мкм) через капиллярные клапаны разрыва (микроклапаны перфузии, ширина: 50 мкм). ), которые удерживают нагруженный гель внутри тканевых камер [14, 15].Модуль регулятора давления состоит из двух капиллярных разрывных клапанов (предохранительные микроклапаны, ширина: 65 мкм), напрямую подключенных к каналу загрузки геля и расположенных между входным отверстием для загрузки геля и первой камерой для ткани. Широкий микрофлюидный канал (ширина: 300 мкм) в качестве отводного канала использовался для перенаправления и размещения избыточного геля. Микрожидкостные элементы по всему устройству имели постоянную высоту 100 мкм.
Все устройство можно смоделировать с помощью упрощенной модели электронной схемы [16, 17], как показано на.Внешний источник давления (P в ), подключенный к входу канала загрузки геля, аналогичен источнику постоянного напряжения, а выход канала загрузки геля можно рассматривать как плавающее заземление (GND), поскольку он открыт. в атмосферу (П атм ). Электрическое сопротивление аналогично соответствующему гидравлическому сопротивлению, которое может определяться геометрией и размером канала. Обратный диод представляет собой капиллярный разрывной клапан, а его уровень разрыва соответствует разрывному давлению, которое изменяется обратно пропорционально ширине микроклапана.Соответственно, максимальное обратное напряжение D 1 (предохранительный микроклапан: 65 мкм) было меньше, чем у D 2 (перфузионный микроклапан: 50 мкм). Как только диод выходит из строя, он больше не препятствует обратному току, который аналогичен разрыву геля. Конденсатор C представляет собой отводной канал для высвобождения и размещения избыточного геля, а объем его конденсатора соответствует расчетному объему этого отводного канала.
показывает результаты моделирования процесса загрузки геля как в тканевой камере, так и в модуле регулятора давления.Режим приложения «Двухфазный поток, ламинарный поток, установка уровня» в модуле MEMS в COMSOL Multiphysics (COMSOL, Берлингтон, Массачусетс) использовался для моделирования движущейся границы раздела двух несмешивающихся потоков жидкости путем решения уравнения Навье-Стокса. Уравнение Навье-Стокса описывает перенос массы и количества движения для жидкостей с постоянной плотностью, включая поверхностное натяжение и сохранение массы. Метод «Level Set» использовался для прогнозирования движущейся границы раздела с использованием функции гладкого расстояния со знаком, обозначенной как ϕ (в воздухе ϕ = 0, в геле ϕ = 1 и на границе ϕ = 0.5). Следовательно, функцию «Установка уровня» можно рассматривать как объемную долю геля в процессе загрузки. В моделировании COMSOL было выполнено два последовательных вычисления. Сначала было вычислено плавное начальное условие для переменной «Level Set», и решение было сохранено. Затем был начат переходный анализ для моделирования движения жидкости в зависимости от времени. Угол контакта между стенкой и поверхностью раздела геля, а также размеры микроклапана были ключевыми переменными, которые контролировали процесс заполнения гелем.Поскольку внутренняя поверхность микрожидкостного канала, сделанная из полидиметилсилоксана (ПДМС), является гидрофобной, вводимый гель будет удерживаться внутри канала загрузки геля, не разрываясь в соседние микрожидкостные каналы или отводной канал, если приложено гидравлическое давление внутри тканевых камер. и модуль регулятора давления меньше давления разрыва их соответствующих микроклапанов. Несмотря на то, что вязкость прекурсора геля как важная переменная влияет на скорость заполнения геля (движение жидкости) во время процесса загрузки, новая конструкция модуля регулятора давления с высокой универсальностью будет работать для различной загрузки гидрогеля независимо от вязкости их прекурсора.
Упрощение модели загрузки геля
Процесс загрузки геля обычно состоит из двух этапов: гель движется от входа к выходу равномерно по каналу загрузки геля с одинаковой высотой (S1) и накопление избыточного геля в выходном резервуаре ( S2), как показано на. Предполагая ламинарный поток несжимаемой жидкости внутри микрожидкостного канала, перепад давления Δ P через канал загрузки геля определяется произведением объемного расхода Q и гидравлического сопротивления R канала (поток Пуазейля), который равен описывается как [18]:
(A) Упрощенная модель загрузки геля по микрожидкостному каналу, состоящая из двух этапов.(B) Схема движения геля по каналу загрузки, когда углы контакта геля со всеми боковыми стенками превышают критический угол продвижения вперед. (C) Схема конструкции капиллярного клапана разрыва с пологим наклоном и различным углом контакта интерфейса геля с боковыми стенками в вершинах.
Для первой стадии (S1), поскольку гель полностью распределен по каналу загрузки геля, его гидравлическое сопротивление R канал определяется исключительно геометрией канала (т.е.е. ширину, высоту и всю длину канала). Следовательно, уравнение (1) может быть выражено как:
Δ P S 1 = P i n j e c t o n — P a i r = Q ∗ R c h n л
(2)
, где P впрыск — давление на входе для загрузки геля, а P воздух — атмосферное давление.
Однако на второй стадии (S2), поскольку в выходном резервуаре имеется определенная высота геля, который может быть упрощен как расширенный канал, общее гидравлическое сопротивление канала загрузки геля соответственно возрастет. При увеличении высоты геля в выходном резервуаре поперечное сечение расширенного канала фиксированной длины будет соответственно сужаться из-за повышенного гидравлического сопротивления. Следовательно, если его упростить как расширенный канал, общее гидравлическое сопротивление канала загрузки геля будет соответственно увеличиваться.При увеличении высоты геля в выходном резервуаре поперечное сечение расширенного канала фиксированной длины будет соответственно сужаться из-за повышенного гидравлического сопротивления. Следовательно, перепад давления вдоль канала загрузки геля на втором этапе может быть выражен как:
Δ P S 2 = P i n j e c t i o n — P a i r = Q ∗ ( R n n e l + R e x t e n d e d) ( d) , где R расширенный — гидравлическое сопротивление расширенного канала. Следовательно, давление внутри канала загрузки геля будет резко возрастать в результате либо высокой скорости потока, применяемой на первой стадии (S1), либо резко увеличенного гидравлического сопротивления на второй стадии (S2). Когда внутреннее гидравлическое давление превышает давление разрыва микроклапанов, произойдет утечка или разрыв геля. Чтобы лучше понять процесс прохождения геля, необходимо охарактеризовать перепад давления, оказываемый на границе раздела гель-воздух во время процесса нагружения, который можно проанализировать с помощью уравнения Юнга-Лапласа, выраженного как [ 19]: P g e l — P a i r = −2 γ (cos ∕ w + cos θ v ∕ h ) (4) , где P gel — давление геля внутри границы раздела, γ — поверхностное натяжение, w и h — ширина и высота микрожидкостного канала, в котором расположена граница раздела, θ s — угол смачивания, образованный между границей раздела геля и боковыми стенками, и θ v 9 0226 — угол контакта границы раздела геля с верхней и нижней стенкой.Следовательно, для данного геля с фиксированным поверхностным натяжением перепад давления на границе раздела можно регулировать, изменяя либо размеры микрожидкостного канала, либо кривизну границы раздела с различными углами смачивания. Если углы контакта со всеми боковыми стенками превышают критический угол контакта при продвижении θ A (т.е. θ s ≥θ A и θ v ≥θ A ), граница раздела лопнет, вызывая движение геля, как показано на.Когда гелевый мениск находится в движении с достаточно низкой скоростью линии контакта U и малым капиллярным числом Ca = мкЕд / г <10 −3 , где μ — вязкость геля, мы можем установить его динамическую угол контакта θ с ≈ θ v ≈ θ A . Следовательно, перепад давления на границе разрыва геля может быть описан как: P г e l — b u r s t — a i r = −2 γ (cos θ A ∕ w + cos θ A 5) Благодаря своей одноразовой функции и простой конструкции для микротехнологии капиллярные клапаны разрыва являются идеальными кандидатами как в качестве предохранительных микроклапанов в модуле регулятора давления, так и в качестве микроклапанов перфузии в тканевых камерах.Клапаны разрыва капилляров характеризуются резким изменением угла контакта жидкости с образованием высокоэнергетического мениска. Повышенное сопротивление капилляров может быть достигнуто резким изменением либо геометрии канала, либо химического состава поверхности [13]. Для клапанов геометрического разрыва капилляров внезапно расходящаяся часть микроструктуры обычно предназначена для захвата гелевого мениска в точке расширения. Как показано на рисунке, расширенная внешняя боковая стенка с пологим наклоном используется в нашей конструкции в качестве клапана разрыва капилляров.Когда мениск приближается к внешней боковой стенке, его контактный угол уменьшается с θ A до θ s * = θ A — β , где β — угол между внутренней и внешней боковинами. , таким образом гель останавливается мгновенно. Гелевый интерфейс будет постепенно расширяться по мере роста давления, пока его угол контакта с внешней боковой стенкой не увеличится до θ A , что также означает, что угол контакта с внутренней боковой стенкой увеличивается до θ A * = θ А + β. Следует отметить, что максимальный контактный угол для жидкостного мениска не может превышать 180 °, поэтому критический контактный угол разрыва с внутренней боковой стенкой для капиллярного разрывного клапана должен составлять θ A * = min { θ A + β , 180 °}. Следовательно, давление разрыва для разработанных нами микроклапанов P , разрыв клапана можно выразить как: Pvalve-burst-Pair = −2γ (cosθA ∗ ∕ w + cosθA ∕ h) (6) Основываясь на относительном соотношении между приложенным давлением впрыска геля и давлением Лапласа на границе раздела гель-воздух, нагруженный гель может быть направлен в разные места микроклапана перфузии с разной кривизной границы раздела (рис.S1). Для некоторых применений необходимо ограничить гель в определенном месте с хорошо контролируемой кривизной границы раздела геля. Например, относительно плоский интерфейс геля требуется для монослоя эндотелиальных клеток, чтобы имитировать стенку сосуда [15, 20]. С добавлением модуля регулятора давления можно управлять определенной кривизной границы раздела геля, расположенной на микроклапане перфузии, путем разработки соответствующего микроклапана безопасности определенной ширины. На основании уравнения Юнга-Лапласа, когда разрыв геля произошел на предохранительном микроклапане, его разрывное давление должно быть равно давлению Лапласа на перфузионном микроклапане с определенной кривизной границы раздела геля.Если бы эти два клапана находились достаточно близко, это можно было бы сформулировать как: cosθA − безопасность ∗ wsafety = cosθs − perfusion′wperfusion (θA − perfusion≤θs − perfusion ′ <θA − perfusion ∗) (7) где θ * A-безопасность и θ * A-перфузия — критические углы контакта с внутренней боковой стенкой для предохранительного микроклапана и перфузионного микроклапана соответственно, θ A-перфузия — критический продвигающийся контакт угол с внутренней боковой стенкой для перфузионного микроклапана, θ ‘ s-perfusion — это угол контакта с внутренней боковой стенкой для перфузионного микроклапана, и w security и w perfusion — ширина предохранительный микроклапан и микроклапан перфузии соответственно.Если гель с относительно плоским интерфейсом (например, θ ‘ s-перфузия = θ A-перфузия ) желателен на микроклапан перфузии, ширину микроклапана безопасности можно рассчитать по формуле: wsafety = cosθA-безопасность ∗ cosθA-перфузия-перфузия (8) Для клеточной культуры эндотелиальные клетки, производные от эндотелиальных клеток (hECFC-EC), получали из пуповинной крови, как описано ранее [21].hECFC-EC были отобраны и размножены в колбах, покрытых 10 мкг / мл фибронектина (Sigma Aldrich) в EGM-2 (Lonza) и трансдуцированы лентивирусной конструкцией, экспрессирующей mCherry (плазмида LeGO-C2 / Addgene: 27339), для экспрессии флуоресценции. Нормальные фибробласты легких человека (NHLF) были приобретены у Lonza и размножены в 10% FBS DMEM (Corning). hECFC-ECs и NHLFs использовали для экспериментов между пассажем 4 и 9 и культивировали в инкубаторе при 37 ° C, 5% CO2 и 20% O2 в 100% увлажненном воздухе. Экспериментальная установка для VMO на микрофлюидной платформе была выполнена, как описано ранее [15].Все экспериментальные процедуры проводились в вытяжном шкафу с ламинарным потоком, уровень биобезопасности 2, стерильными методами. Сначала мы проверили работу модуля регулятора давления путем автоматической загрузки геля смешанного красителя с помощью шприцевого насоса при различных скоростях потока, как показано в дополнительном фильме зажим (ESI †
Фильм S1). Для размещения нагруженного геля в вершинах микроклапанов перфузии с относительно плоской границей раздела без разрывов, ширина микроклапана безопасности ( w безопасность ) была спроектирована так, чтобы составлять 65 мкм, принимая θ * A. -безопасность = 180 °, θ A-перфузия = 140 ° и w перфузия = 50 мкм.Следовательно, расчетное давление разрыва для предохранительного микроклапана и перфузионного микроклапана составляет 3318 Па и 3983 Па соответственно (поверхностное натяжение воды γ = 0,072 Н · м -1 ). Как показано на фиг. 5, когда применяемая скорость потока была менее 90 мкл / мин, разрыв геля на предохранительных микроклапанах модуля регулятора давления во время первой стадии (S1-B0) не происходил. Однако на второй стадии гидравлическое давление внутри канала загрузки геля постепенно нарастало с повышенным гидравлическим сопротивлением в выходном резервуаре.Как только гидравлическое давление превысило разрывное давление предохранительного микроклапана, гель прорвался в один (S2-B1) или два (S2-B2) отводных канала, высвободив избыточный гель. Когда применяемая скорость потока была выше 170 мкл / мин, хотя гидравлическое сопротивление остается постоянным на первом этапе, разрыв геля из одного предохранительного микроклапана все еще происходил из-за высокой скорости потока (S1-B1). На втором этапе другой предохранительный микроклапан также лопнул, чтобы сбросить давление, возникшее в результате повышенного гидравлического сопротивления.Во всех этих случаях граница раздела геля у микроклапанов перфузии сохраняла относительно плоский профиль. Однако, когда применяемая скорость потока была высокой (например, 320 мкл / мин), оба предохранительных микроклапана лопаются во время первой стадии (S1-B2), что делает их недоступными для работы на второй стадии. Чтобы решить эту проблему, в конструкцию модуля регулятора давления можно интегрировать более узкий (например, 55 мкм или меньше) предохранительный микроклапан. На рисунке S2 в дополнительном материале представлена более подробная информация о профиле гидравлического давления внутри канала загрузки геля на разных стадиях при разных расходах.Контрольный эксперимент был проведен с использованием того же канала загрузки геля без модуля регулятора давления. Как показано на фиг.4, когда применяемая скорость потока превышала 150 мкл / мин, граница раздела геля на микроклапанах перфузии вздувалась, пока, наконец, не прорвалась в один или два соседних микрофлюидных канала. (A) Характеристики регулятора давления на двух этапах за счет автоматической загрузки геля смешанного красителя с помощью шприцевого насоса при разных скоростях потока и хорошо контролируемой поверхности раздела геля, расположенной в вершинах микроклапанов перфузии.Пунктирный прямоугольник в столбце границы раздела геля представляет слегка выпуклую поверхность раздела геля при высокой скорости потока 320 мкл / мин. (B) Контрольный эксперимент с использованием того же канала загрузки геля без модуля регулятора давления. и дополнительный видеоролик (ESI †
Видеоролик S2) демонстрируют характеристики загрузки геля, смешанного с красителем, с предохранительными микроклапанами шириной 55 мкм или 85 мкм при различных скоростях потока соответственно. В устройстве с предохранительным микроклапаном шириной 85 мкм разорвался один предохранительный микроклапан, чтобы сбросить давление на второй ступени при скорости потока всего 50 мкл / мин (S1-B0, S2-B1).При одинаковой скорости потока оба предохранительных микроклапана шириной 55 мкм были исправны. Верхний предел диапазона для предохранительного микроклапана шириной 85 мкм составлял 130 мкл / мин (S1-B1, S2-B2). Напротив, предохранительный микроклапан шириной 55 мкм активировался, когда расход был увеличен до 100 мкл / мин, а его рабочий предел достигал 320 мкл / мин. (A) Результаты экспериментов по загрузке геля из смеси красителей с использованием предохранительных микроклапанов шириной 55 мкм и 85 мкм при различных скоростях потока. (B) Результаты сравнения чувствительности и рабочего диапазона регулятора давления с разной шириной.Узкий предохранительный микроклапан имеет большой рабочий диапазон, а широкий предохранительный микроклапан имеет высокую чувствительность. Таким образом, чувствительность и рабочий диапазон модуля регулятора давления можно гибко регулировать шириной микроклапанов безопасности. продемонстрировали результаты сравнения чувствительности и рабочего диапазона предохранительных микроклапанов разной ширины, подчеркнув, что регулятор давления более чувствителен с более широкими предохранительными микроклапанами. Однако за счет чувствительности рабочий диапазон обратно пропорционален ширине микроклапана.Таким образом, существует компромисс между чувствительностью и рабочим диапазоном модуля регулятора давления. В зависимости от различных потребностей и применений можно использовать либо узкий предохранительный микроклапан с большим рабочим диапазоном, либо широкий предохранительный микроклапан с высокой чувствительностью. Например, если желательна хорошо контролируемая кривизна границы раздела геля, модуль регулятора давления должен быть достаточно чувствительным, чтобы быстро сбросить давление нарастания, но для этого также требуется, чтобы устройство нагнетания работало с высокой точностью для поддержания постоянной скорости потока.Если используется нагнетательное оборудование, которое демонстрирует большие колебания давления во время нагнетания, или используется ручной режим нагнетания, то следует использовать модуль регулятора давления с большим рабочим диапазоном, чтобы обеспечить надежную загрузку геля без разрыва. Ширина перфузионного клапана, который соединяет гелевую матрицу, содержащую клетки, с внешними микрожидкостными каналами (сначала заполненными воздухом, а затем заполненными средой) определяет скорость биотранспортации (конвекция). ) происходит через гель.Путем интеграции модуля регулятора давления в устройство можно использовать более широкие микроклапаны перфузии, сохраняя при этом гель, что обеспечивает большую скорость конвекции по сравнению с более узкими микроклапанами при сохранении того же перепада гидростатического давления (рис. S3). и дополнительный видеоролик (ESI †
Ролик S3) демонстрируют характеристики загрузки геля с использованием микроклапанов перфузии шириной 100 мкм и предохранительных микроклапанов шириной 130 мкм при различных скоростях потока. Модуль регулятора давления был активирован при скорости потока 45 мкл / мин, а его верхний предел составлял 70 мкл / мин.По сравнению с перфузионным микроклапаном шириной 50 мкм и модуль регулятора давления, и гелевый интерфейс были чувствительны к изменению подаваемой скорости потока. Когда скорость потока превышает 70 мкл / мин, на первой стадии (S1-B2) лопаются два микроклапана безопасности. Альтернативный метод предотвращения разрыва геля из микроклапанов перфузии с широкими отверстиями при высоких скоростях потока заключался бы в предотвращении или уменьшении нарастания давления с повышенным гидравлическим сопротивлением на второй стадии. Этого можно добиться, изменив объем распределяемого геля, как показано на.Здесь вводили только 10 мкл смешанного с красителем геля, когда скорость потока превышала 70 мкл / мин. Поскольку гидравлическое сопротивление канала загрузки геля было меньше, чем у модуля регулятора давления, даже несмотря на то, что некоторое количество геля было перенаправлено в два отводных канала на первой стадии, большая часть нагнетаемого геля протекала по каналу загрузки геля и заполнялась. тканевые камеры. При скорости потока 120 мкл / мин разрыв двух предохранительных микроклапанов произошел раньше, чем при скорости потока 70 мкл / мин на первом этапе, но они все еще были в состоянии предотвратить разрыв геля в соседние микрофлюидные каналы.Если для обеспечения достаточного массопереноса для поддержания клеток необходим больший объем среды, можно увеличить либо количество микроклапанов перфузии, подключенных к каждой тканевой камере, либо падение гидравлического давления в тканевых камерах. Удержание геля с перфузионным микроклапаном шириной 100 мкм. И модуль регулятора давления, и граница раздела геля на микроклапане перфузии были чувствительны к приложенной скорости потока. При более высоких скоростях потока меньшие объемы геля (например, 10 мкл) могут эффективно предотвратить вырывание геля из микроклапана перфузии с широким отверстием. Мы дополнительно проверили работу модуля регулятора давления, вручную загрузив гель с помощью микропипеточного устройства. В этом эксперименте мы использовали нашу ранее опубликованную модель VMO, чтобы также подтвердить биосовместимость нашей конструкции [15]. ECFC-EC человека и NHLF суспендировали в растворе фибриногена с концентрацией 10 мг / мл, а затем быстро смешивали с 50 ед. / Мл тромбина до конечной концентрации 3 ед. / Мл [22]. Поскольку время полимеризации фибриногена после смешивания с тромбином было коротким, его необходимо было быстро ввести в канал загрузки геля.Следовательно, было трудно управлять процессом достаточно быстро с помощью шприцевого насоса. Независимо от скорости дозирования, вручную приложенной к микропипетке, модуль регулятора давления эффективно предотвращал разрыв геля, аналогично экспериментальным результатам загрузки геля, смешанного с красителем, с помощью шприцевого насоса, как показано на и дополнительном видеоролике (ESI †
Фильм S4). Когда медленная скорость дозирования была применена к кнопке, в модуле регулятора давления не произошло разрыва геля. Когда была применена высокая скорость дозирования, один или два предохранительных микроклапана разорвались, чтобы сбросить гидравлическое давление внутри тканевых камер, чтобы предотвратить вырывание геля из микроклапанов перфузии.показывает успешно сформированный 3D VMO после 7 дней культивирования в микрофлюидном устройстве с использованием различной силы нагрузки и условий разрыва. (A) Результаты экспериментов по ручной загрузке геля фибриногена с засеянными клетками микропипеткой при различной скорости дозирования. B0: разрыв предохранительного микроклапана отсутствует, B1: разрыв одного предохранительного микроклапана и B2: разрыв двух предохранительных микроклапанов. Пунктирный прямоугольник представляет область разрыва геля внутри модуля регулятора давления. (B) Соответствующее образование сети сосудов внутри микрофлюидного устройства после 7 дней культивирования. Существует значительный интерес к соединению модулей «орган на чипе» (например, печени и кишечника для метаболических исследований или толстой кишки и легких для исследований метастазов), однако механика этого все еще изучается. Здесь мы показываем, что использование модуля регулятора давления может облегчить гетеротипное удержание геля внутри микрофлюидного устройства с взаимосвязанными структурами (). Вход для загрузки геля и модуль регулятора давления в качестве выхода для загрузки геля могут быть интегрированы на каждом конце камеры для ткани, что позволяет индивидуально загружать каждую ячейку без разрыва в центральном соединительном канале.Затем соединительный канал может быть загружен позже, чтобы облегчить соединение между двумя половинами (, S4). Наша конструкция отличается от ранее описанных конструкций микросхем для гетеротипической загрузки геля, которая не может реализовать независимый контроль микросреды [6, 11], и имеет преимущество повышенной гибкости. На рисунке S5 показано, что каждая тканевая камера может быть отдельно загружена различными частицами, смешанными в геле для имитации клеток, и перфузирована различными жидкими красителями, имитируя независимый контроль микросреды.Эта конструкция может быть использована для совместного культивирования нескольких тканей, ангиогенеза опухоли и скрининга лекарств в организме человека. Гетеротипическая загрузка геля, смешанного с красителями, в микрожидкостное устройство с модулем регулятора давления на каждом конце, служащим выпускным отверстием для загрузки геля. (A) Шаг 1: загрузка геля, смешанного с зеленым красителем, в левую камеру и разрыв двух предохранительных микроклапанов. (B) Шаг 2: загрузка геля, смешанного с красным красителем, в правую камеру и разрыв только одного предохранительного микроклапана. (C) Шаг 3: загрузка геля, смешанного с синим красителем, в центральный соединительный канал для соединения двух (зеленой и красной) камер.Затем произошла диффузия между камерами. Интегрируя модуль регулятора давления в нашу микрофлюидную платформу (модель 3D-VMO), мы можем эффективно предотвратить разрыв геля из тканевых камер в соседние микрофлюидные каналы. Устройство работает на одном микрофлюидном слое и поддерживает хорошо контролируемую гелевую границу раздела при различных скоростях потока. Эта конструкция значительно облегчила надежную и воспроизводимую загрузку гелей в устройство, поскольку теперь устраняется крутая кривая обучения, необходимая для успешной ручной загрузки — любое избыточное давление со стороны оператора эффективно подавляется, поскольку гель отводится в сторону перелива, чтобы предотвратить разрыв воздуха. гелевый интерфейс.Устройство также позволяет нам контролировать размер и характеристики границы раздела воздух-гель, что имеет решающее значение для управления скоростью конвекции, а также важно для приложений, требующих засева однослойных клеток во внешние микрофлюидные каналы. Для устройства связи между тканями два разных гидрогеля или один и тот же гидрогель, содержащий разную популяцию клеток, необходимо вводить последовательно во взаимосвязанные тканевые камеры с независимым контролем микросреды.Мы показали, как это возможно, используя модифицированную конструкцию с интеграцией модуля регулятора давления в качестве выпускного отверстия для загрузки геля (). Однако, поскольку гидрогели внутри каждого отсека связаны между собой и становятся одной единицей, гидравлическое сопротивление всей тканевой камеры значительно возрастет, и это может повлиять на характеристики перфузии (например, скорость или профиль внутреннего потока и т. Д.) Внутри тканевой камеры [23 ]. Чтобы поддерживать равномерную и хорошо контролируемую перфузию, может быть полезно разделить жидкостный канал и камеры для совместного культивирования нескольких тканей на разные слои.В этом случае необходимо предотвратить разрыв индивидуального введенного геля внутри соответствующей тканевой камеры как по горизонтали, так и по вертикали, что также можно реализовать с помощью модуля регулятора давления. Здесь давление разрыва предохранительного микроклапана модуля регулятора должно быть меньше как давления продвижения между разными слоями, так и давления разрыва между взаимосвязанными тканевыми камерами в разных рядах. В этой статье мы представляем новую конструкцию встроенного модуля регулятора давления, которая обеспечивает надежную, воспроизводимую и неразрывную инъекцию гидрогеля.Давление нарастания при различных стадиях загрузки геля, вызванное избыточным гелем, может быть сброшено путем активации модуля регулятора давления, когда гидравлическое давление внутри канала загрузки геля выше, чем давление разрыва предохранительного микроклапана модуля регулятора давления. Кроме того, он может создавать хорошо контролируемую гелевую поверхность раздела в определенном месте микроклапанов перфузии в широком диапазоне скоростей потока. Благодаря своей простой конструкции модуль регулятора давления может быть интегрирован в любое микрожидкостное устройство, требующее различных типов загрузки гидрогеля.Кроме того, чувствительность и рабочий диапазон модуля регулятора давления можно гибко регулировать, изменяя ширину микроклапанов безопасности в соответствии с конкретными приложениями. Модуль регулятора давления также позволяет удерживать гели на микроклапанах перфузии с широкими отверстиями. Эксперименты по загрузке геля, смешанного с красителями, с помощью шприцевого насоса и загрузки геля с засеянным клетками, с помощью микропипеточного устройства, демонстрируют совместимость модуля с универсальными устройствами для работы с жидкостями, работающими в автоматическом или ручном режиме.Конструкция модуля регулятора давления универсальна и позволяет создавать конструкции, требующие размещения гелей гетеротипических культур тканей и микрофлюидных каналов в различных местах. Это должно оказаться полезным для платформ с несколькими органами на кристалле. % PDF-1.4
%
312 0 объект
>
эндобдж
xref
312 798
0000000016 00000 н.
0000017774 00000 п.
0000017984 00000 п.
0000018028 00000 п.
0000018064 00000 п.
0000027809 00000 п.
0000028024 00000 п.
0000028171 00000 п.
0000028303 00000 п.
0000028453 00000 п.
0000028587 00000 п.
0000028735 00000 п.
0000028869 00000 п.
0000029017 00000 н.
0000029151 00000 п.
0000029299 00000 н.
0000029433 00000 п.
0000029581 00000 п.
0000029714 00000 п.
0000029862 00000 н.
0000029996 00000 н.
0000030146 00000 п.
0000030280 00000 п.
0000030428 00000 п.
0000030562 00000 п.
0000030710 00000 п.
0000030846 00000 п.
0000030996 00000 н.
0000031131 00000 п.
0000031279 00000 п.
0000031414 00000 п.
0000031562 00000 п.
0000031738 00000 п.
0000031888 00000 п.
0000032047 00000 п.
0000032196 00000 п.
0000032610 00000 п.
0000032713 00000 п.
0000032750 00000 п.
0000044278 00000 н.
0000053394 00000 п.
0000061217 00000 п.
0000068021 00000 п.
0000075087 00000 п.
0000081715 00000 п.
0000081879 00000 п.
0000082083 00000 п.
0000082170 00000 п.
0000082358 00000 п.
0000082561 00000 п.
0000082751 00000 п.
0000083160 00000 п.
0000083348 00000 п.
0000083529 00000 п.
0000083718 00000 п.
0000084259 00000 п.
0000084388 00000 п.
0000084581 00000 п.
0000084993 00000 п.
0000085379 00000 п.
0000085567 00000 п.
0000085855 00000 п.
0000086297 00000 п.
0000086464 00000 н.
0000086852 00000 п.
0000087544 00000 п.
0000087916 00000 п.
0000088118 00000 п.
0000094289 00000 п.
0000106711 00000 н.
0000109441 00000 п.
0000112134 00000 н.
0000112531 00000 н.
0000112841 00000 н.
0000115656 00000 н.
0000118596 00000 н.
0000124324 00000 н.
0000134478 00000 н.
0000138243 00000 н.
0000138662 00000 н.
0000142960 00000 н.
0000143152 00000 н.
0000143496 00000 н.
0000143680 00000 н.
0000144601 00000 н.
0000144780 00000 н.
0000145304 00000 н.
0000145411 00000 н.
0000148683 00000 н.
0000148722 00000 н.
0000149400 00000 н.
0000149553 00000 п.
0000149840 00000 н.
0000149987 00000 н.
0000150598 00000 н.
0000150749 00000 н.
0000150901 00000 н.
0000151499 00000 н.
0000151652 00000 н.
0000152255 00000 н.
0000152407 00000 н.
0000152560 00000 н.
0000152713 00000 н.
0000152866 00000 н.
0000153018 00000 н.
0000153171 00000 н.
0000153323 00000 н.
0000153476 00000 н.
0000153629 00000 н.
0000153780 00000 н.
0000153933 00000 н.
0000154085 00000 н.
0000154238 00000 п.
0000154391 00000 н.
0000154544 00000 н.
0000154697 00000 н.
0000154850 00000 н.
0000155002 00000 н.
0000155155 00000 н.
0000155308 00000 н.
0000155460 00000 н.
0000155612 00000 н.
0000155765 00000 н.
0000155918 00000 н.
0000156071 00000 н.
0000156224 00000 н.
0000156377 00000 н.
0000156530 00000 н.
0000156682 00000 н.
0000156835 00000 н.
0000156988 00000 н.
0000157139 00000 н.
0000157292 00000 н.
0000157444 00000 н.
0000157597 00000 н.
0000157749 00000 н.
0000157902 00000 н.
0000158055 00000 н.
0000158207 00000 н.
0000158359 00000 н.
0000158512 00000 н.
0000158664 00000 н.
0000158816 00000 н.
0000158969 00000 н.
0000159123 00000 н.
0000159276 00000 н.
0000159430 00000 н.
0000159585 00000 н.
0000159738 00000 н.
0000159892 00000 н.
0000160047 00000 н.
0000160644 00000 н.
0000160798 00000 н.
0000160951 00000 п.
0000161528 00000 н.
0000161681 00000 н.
0000162267 00000 н.
0000162421 00000 н.
0000162987 00000 н.
0000163141 00000 н.
0000163296 00000 н.
0000163450 00000 н.
0000163602 00000 н.
0000163756 00000 н.
0000163910 00000 н.
0000164064 00000 н.
0000164217 00000 н.
0000164370 00000 н.
0000164524 00000 н.
0000164677 00000 н.
0000164829 00000 н.
0000164983 00000 н.
0000165135 00000 н.
0000165287 00000 н.
0000165441 00000 н.
0000165595 00000 н.
0000165748 00000 н.
0000165902 00000 н.
0000166055 00000 н.
0000166209 00000 н.
0000166363 00000 н.
0000166516 00000 н.
0000166669 00000 н.
0000166823 00000 н.
0000166977 00000 н.
0000167130 00000 н.
0000167284 00000 н.
0000167438 00000 н.
0000167592 00000 н.
0000167745 00000 н.
0000167898 00000 н.
0000168051 00000 н.
0000168205 00000 н.
0000168359 00000 н.
0000168512 00000 н.
0000168664 00000 н.
0000168817 00000 н.
0000168970 00000 н.
0000169124 00000 н.
0000169278 00000 н.
0000169431 00000 н.
0000169585 00000 н.
0000169738 00000 н.
0000169891 00000 н.
0000170045 00000 н.
0000170198 00000 н.
0000170352 00000 п.
0000170506 00000 н.
0000170660 00000 н.
0000170814 00000 н.
0000170968 00000 н.
0000171587 00000 н.
0000171741 00000 н.
0000171894 00000 н.
0000172048 00000 н.
0000172202 00000 н.
0000172356 00000 н.
0000172510 00000 н.
0000172662 00000 н.
0000172815 00000 н.
0000172969 00000 н.
0000173123 00000 н.
0000173277 00000 н.
0000173431 00000 н.
0000173584 00000 н.
0000173738 00000 н.
0000173892 00000 н.
0000174044 00000 н.
0000174198 00000 н.
0000174352 00000 н.
0000174506 00000 н.
0000174660 00000 н.
0000174814 00000 н.
0000174968 00000 н.
0000175122 00000 н.
0000175275 00000 н.
0000175428 00000 н.
0000175582 00000 н.
0000175736 00000 н.
0000175890 00000 н.
0000176043 00000 н.
0000176197 00000 н.
0000176351 00000 н.
0000176505 00000 н.
0000176659 00000 н.
0000176813 00000 н.
0000176966 00000 н.
0000177120 00000 н.
0000177704 00000 н.
0000177856 00000 н.
0000178425 00000 н.
0000178577 00000 н.
0000179147 00000 н.
0000179299 00000 н.
0000179451 00000 п.
0000180013 00000 н.
0000180165 00000 н.
0000180316 00000 н.
0000180468 00000 н.
0000180620 00000 н.
0000180772 00000 н.
0000180925 00000 н.
0000181077 00000 н.
0000181227 00000 н.
0000181378 00000 н.
0000181529 00000 н.
0000181680 00000 н.
0000181832 00000 н.
0000181984 00000 н.
0000182136 00000 н.
0000182287 00000 н.
0000182439 00000 н.
0000182592 00000 н.
0000182743 00000 н.
0000182895 00000 н.
0000183046 00000 н.
0000183197 00000 н.
0000183349 00000 н.
0000183500 00000 н.
0000183652 00000 н.
0000183803 00000 н.
0000183954 00000 н.
0000184106 00000 н.
0000184259 00000 н.
0000184411 00000 н.
0000184563 00000 н.
0000184715 00000 н.
0000184867 00000 н.
0000185018 00000 н.
0000185170 00000 н.
0000185322 00000 н.
0000185474 00000 н.
0000185626 00000 н.
0000185778 00000 н.
0000185931 00000 н.
0000186083 00000 н.
0000186234 00000 н.
0000186386 00000 н.
0000186538 00000 н.
0000186690 00000 н.
0000186842 00000 н.
0000186994 00000 н.
0000187146 00000 н.
0000187298 00000 н.
0000187448 00000 н.
0000187601 00000 н.
0000187753 00000 н.
0000187904 00000 н.
0000188055 00000 н.
0000188207 00000 н.
0000188359 00000 н.
0000188511 00000 н.
0000188663 00000 н.
0000188815 00000 н.
0000188967 00000 н.
0000189117 00000 н.
0000189269 00000 н.
0000189421 00000 н.
0000189572 00000 н.
0000189724 00000 н.
0000189876 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
0000192003 00000 н.
0000192155 00000 н.
0000192306 00000 н.
0000192457 00000 н.
0000192609 00000 н.
0000192762 00000 н.
0000192914 00000 н.
0000193066 00000 н.
0000193611 00000 н.
0000193765 00000 н.
0000194299 00000 н.
0000194452 00000 н.
0000194994 00000 н.
0000195148 00000 н.
0000195676 00000 н.
0000195830 00000 н.
0000195985 00000 н.
0000196520 00000 н.
0000196674 00000 н.
0000197191 00000 н.
0000197343 00000 н.
0000197861 00000 н.
0000198014 00000 н.
0000198167 00000 н.
0000198687 00000 н.
0000198841 00000 н.
0000198996 00000 н.
0000199150 00000 н.
0000199303 00000 н.
0000199457 00000 н.
0000199611 00000 н.
0000199765 00000 н.
0000199919 00000 н.
0000200073 00000 н.
0000200227 00000 н.
0000200380 00000 н.
0000200534 00000 н.
0000200688 00000 н.
0000200842 00000 н.
0000200995 00000 н.
0000201149 00000 н.
0000201302 00000 н.
0000201455 00000 н.
0000201609 00000 н.
0000201762 00000 н.
0000201915 00000 н.
0000202068 00000 н.
0000202220 00000 н.
0000202373 00000 н.
0000202527 00000 н.
0000202681 00000 н.
0000202835 00000 н.
0000202989 00000 н.
0000203143 00000 н.
0000203297 00000 н.
0000203450 00000 н.
0000203604 00000 н.
0000203757 00000 н.
0000203911 00000 н.
0000204065 00000 н.
0000204219 00000 н.
0000204373 00000 н.
0000204526 00000 н.
0000204680 00000 н.
0000204832 00000 н.
0000204986 00000 н.
0000205139 00000 н.
0000205293 00000 н.
0000205446 00000 н.
0000205600 00000 н.
0000205752 00000 н.
0000205905 00000 н.
0000206059 00000 н.
0000206211 00000 н.
0000206365 00000 н.
0000206519 00000 н.
0000206673 00000 н.
0000206827 00000 н.
0000206980 00000 н.
0000207132 00000 н.
0000207286 00000 н.
0000207440 00000 н.
0000207592 00000 н.
0000207744 00000 н.
0000207897 00000 н.
0000208050 00000 н.
0000208204 00000 н.
0000208357 00000 н.
0000208509 00000 н.
0000208661 00000 н.
0000208814 00000 н.
0000208967 00000 н.
0000209121 00000 н.
0000209274 00000 н.
0000209426 00000 н.
0000209579 00000 н.
0000209732 00000 н.
0000209886 00000 н.
0000210039 00000 н.
0000210192 00000 п.
0000210345 00000 п.
0000210497 00000 п.
0000210650 00000 н.
0000210804 00000 н.
0000210957 00000 п.
0000211111 00000 п.
0000211265 00000 н.
0000211419 00000 п.
0000211573 00000 н.
0000211727 00000 н.
0000211881 00000 н.
0000212035 00000 н.
0000212188 00000 н.
0000212339 00000 н.
0000212493 00000 п.
0000212647 00000 н.
0000212799 00000 н.
0000212952 00000 п.
0000213106 00000 н.
0000213260 00000 н.
0000213414 00000 н.
0000213567 00000 н.
0000213721 00000 н.
0000213875 00000 н.
0000214028 00000 н.
0000214182 00000 п.
0000214336 00000 н.
0000214489 00000 н.
0000214642 00000 н.
0000214796 00000 н.
0000214948 00000 н.
0000215101 00000 п.
0000215255 00000 н.
0000215409 00000 н.
0000215563 00000 н.
0000215716 00000 н.
0000215869 00000 н.
0000216020 00000 н.
0000216174 00000 н.
0000216328 00000 н.
0000216482 00000 н.
0000216635 00000 н.
0000216789 00000 н.
0000216943 00000 н.
0000217096 00000 н.
0000217250 00000 н.
0000217403 00000 н.
0000217556 00000 н.
0000217710 00000 н.
0000217861 00000 н.
0000218015 00000 н.
0000218169 00000 н.
0000218323 00000 н.
0000218473 00000 н.
0000218625 00000 н.
0000218778 00000 п.
0000218931 00000 н.
0000219084 00000 н.
0000219238 00000 п.
0000219392 00000 н.
0000219545 00000 н.
0000219699 00000 н.
0000219852 00000 н.
0000220006 00000 н.
0000220160 00000 н.
0000220314 00000 н.
0000220468 00000 н.
0000220622 00000 н.
0000220774 00000 н.
0000220928 00000 н.
0000221082 00000 н.
0000221236 00000 н.
0000221390 00000 н.
0000221544 00000 н.
0000221697 00000 н.
0000221850 00000 н.
0000222003 00000 н.
0000222157 00000 н.
0000222311 00000 н.
0000222464 00000 н.
0000222617 00000 н.
0000222771 00000 н.
0000222925 00000 н.
0000223077 00000 н.
0000223231 00000 н.
0000223384 00000 н.
0000223537 00000 н.
0000223691 00000 н.
0000223845 00000 н.
0000223999 00000 н.
0000224152 00000 н.
0000224306 00000 н.
0000224457 00000 н.
0000224608 00000 н.
0000224760 00000 н.
0000224912 00000 н.
0000225065 00000 н.
0000225594 00000 н.
0000225746 00000 н.
0000226266 00000 н.
0000226416 00000 н.
0000226941 00000 н.
0000227092 00000 н.
0000227609 00000 н.
0000227760 00000 н.
0000227913 00000 п.
0000228066 00000 н.
0000228218 00000 н.
0000228368 00000 н.
0000228520 00000 н.
0000228672 00000 н.
0000228824 00000 н.
0000228976 00000 н.
0000229128 00000 н.
0000229280 00000 н.
0000229432 00000 н.
0000229585 00000 н.
0000229737 00000 н.
0000229889 00000 н.
0000230041 00000 н.
0000230193 00000 п.
0000230345 00000 н.
0000230496 00000 п.
0000230647 00000 н.
0000230799 00000 н.
0000230951 00000 п.
0000231103 00000 п.
0000231256 00000 н.
0000231409 00000 н.
0000231560 00000 н.
0000231712 00000 н.
0000231864 00000 н.
0000232016 00000 н.
0000232168 00000 н.
0000232319 00000 н.
0000232471 00000 н.
0000232622 00000 н.
0000232774 00000 н.
0000232925 00000 н.
0000233078 00000 н.
0000233228 00000 н.
0000233379 00000 н.
0000233531 00000 н.
0000233682 00000 н.
0000233834 00000 н.
0000233984 00000 п.
0000234136 00000 п.
0000234288 00000 п.
0000234439 00000 н.
0000234591 00000 н.
0000234744 00000 н.
0000234894 00000 н.
0000235046 00000 н.
0000235198 00000 п.
0000235349 00000 п.
0000235501 00000 п.
0000235653 00000 п.
0000235805 00000 н.
0000235957 00000 н.
0000236108 00000 н.
0000236260 00000 н.
0000236413 00000 н.
0000236565 00000 н.
0000236714 00000 н.
0000236865 00000 н.
0000237016 00000 н.
0000237167 00000 н.
0000237319 00000 п.
0000237471 00000 н.
0000237622 00000 н.
0000237773 00000 н.
0000237925 00000 п.
0000238077 00000 н.
0000238229 00000 н.
0000238381 00000 п.
0000238533 00000 н.
0000238685 00000 н.
0000238836 00000 н.
0000238988 00000 н.
0000239139 00000 н.
0000239291 00000 н.
0000239442 00000 н.
0000239593 00000 н.
0000239746 00000 н.
0000239898 00000 н.
0000240049 00000 н.
0000240201 00000 н.
0000240352 00000 п.
0000240504 00000 н.
0000240656 00000 н.
0000240808 00000 н.
0000240960 00000 п.
0000241112 00000 н.
0000241264 00000 н.
0000241417 00000 н.
0000241569 00000 н.
0000241720 00000 н.
0000241872 00000 н.
0000242024 00000 н.
0000242176 00000 н.
0000242328 00000 н.
0000242478 00000 н.
0000242630 00000 н.
0000242780 00000 н.
0000242932 00000 н.
0000243084 00000 н.
0000243236 00000 н.
0000243387 00000 н.
0000243538 00000 н.
0000243690 00000 н.
0000243840 00000 н.
0000243991 00000 н.
0000244142 00000 н.
0000244294 00000 н.
0000244446 00000 н.
0000244597 00000 н.
0000244750 00000 н.
0000244900 00000 н.
0000245052 00000 н.
0000245203 00000 н.
0000245354 00000 н.
0000245505 00000 н.
0000245657 00000 н.
0000245809 00000 н.
0000245961 00000 н.
0000246113 00000 п.
0000246265 00000 н.
0000246418 00000 н.
0000246570 00000 н.
0000246719 00000 н.
0000246871 00000 н.
0000247023 00000 н.
0000247175 00000 н.
0000247326 00000 н.
0000247478 00000 н.
0000247629 00000 н.
0000247781 00000 н.
0000247933 00000 н.
0000248085 00000 н.
0000248238 00000 п.
0000248390 00000 н.
0000248540 00000 н.
0000248691 00000 п.
0000248841 00000 н.
0000248993 00000 н.
0000249145 00000 н.
0000249297 00000 н.
0000249448 00000 н.
0000249600 00000 н.
0000249752 00000 н.
0000249905 00000 н.
0000250056 00000 н.
0000250208 00000 н.
0000250360 00000 н.
0000250512 00000 н.
0000250665 00000 н.
0000250818 00000 н.
0000250970 00000 н.
0000251123 00000 н.
0000251276 00000 н.
0000251428 00000 н.
0000251582 00000 н.
0000251735 00000 н.
0000251888 00000 н.
0000252040 00000 н.
0000252193 00000 н.
0000252346 00000 н.
0000252499 00000 н.
0000252652 00000 н.
0000252804 00000 н.
0000252957 00000 н.
0000253111 00000 п.
0000253265 00000 н.
0000253419 00000 н.
0000253573 00000 н.
0000253727 00000 н.
0000253881 00000 н.
0000254035 00000 н.
0000254187 00000 н.
0000254341 00000 н.
0000254495 00000 н.
0000254648 00000 н.
0000254802 00000 н.
0000254956 00000 н.
0000255110 00000 н.
0000255263 00000 н.
0000255415 00000 н.
0000255569 00000 н.
0000255723 00000 н.
0000255877 00000 н.
0000256031 00000 н.
0000256185 00000 н.
0000256339 00000 н.
0000256492 00000 н.
0000256645 00000 н.
0000256797 00000 н.
0000256951 00000 п.
0000257104 00000 н.
0000257258 00000 н.
0000257412 00000 н.
0000257566 00000 н.
0000257720 00000 н.
0000257873 00000 н.
0000258026 00000 н.
0000258178 00000 н.
0000258332 00000 н.
0000258486 00000 н.
0000258640 00000 н.
0000258793 00000 н.
0000258947 00000 н.
0000259101 00000 п.
0000259545 00000 н.
0000259595 00000 н.
0000262642 00000 н.
0000262986 00000 н.
0000263035 00000 н.
0000263427 00000 н.
0000263621 00000 н.
0000263839 00000 н.
0000264048 00000 н.
0000264242 00000 н.
0000264451 00000 п.
0000264669 00000 н.
0000264863 00000 н.
0000265072 00000 н.
0000265281 00000 п.
0000265481 00000 н.
0000265734 00000 н.
0000265783 00000 н.
0000266087 00000 н.
0000266296 00000 н.
0000266505 00000 н.
0000266705 00000 н.
0000267644 00000 н.
0000268247 00000 н.
0000268297 00000 н.
0000268846 00000 н.
0000270153 00000 н.
0000270845 00000 н.
0000270895 00000 н.
0000271410 00000 н.
0000271582 00000 н.
0000271631 00000 н.
0000271864 00000 н.
0000272519 00000 н.
0000272728 00000 н.
0000272803 00000 н.
0000273160 00000 н.
0000273293 00000 н.
0000273432 00000 н.
0000273585 00000 н.
0000273789 00000 н.
0000273988 00000 н.
0000274187 00000 н.
0000274371 00000 н.
0000274536 00000 н.
0000274727 00000 н.
0000274882 00000 н.
0000275117 00000 н.
0000275342 00000 п.
0000275517 00000 н.
0000275694 00000 н.
0000275965 00000 н.
0000016256 00000 п.
трейлер
] / Назад 977435 >>
startxref
0
%% EOF
1109 0 объект
> поток
h V {lSe?] F ڭ! 8 cM @ P {JuME D [qLZ \ Ff (_ɈéɌ ~} & s ߹ в Optiv Security Inc. В вашей роли в Optiv вы будете вдохновлены командой самых ярких деловых и технических умов в области кибербезопасности. Мы горячо поддерживаем наших клиентов и знаем по опыту, что наилучшие решения для нужд наших клиентов — это упорная совместная работа. Как часть нашей команды, ваш голос имеет значение, и вы будете выполнять важную работу, которая окажет влияние на людей, компании и страны.Наша отрасль и наша компания развиваются быстро, и вы можете быть уверены, что вам всегда будет где учиться и расти. Мы гордимся своей командой и той важной работой, которую мы делаем, чтобы укрепить уверенность в более взаимосвязанном мире. Наши консультанты — это квалифицированные технические и консультативные ресурсы, которые должны обладать как техническими навыками, так и навыками межличностного общения. Консультант должен быть проверенным стартапом, способным решать проблемы, общаться, участвовать в различных проектных группах с технической точки зрения и эффективно взаимодействовать с клиентами, партнерами-поставщиками и коллегами.Установите и поддерживайте продуктивные и уважительные отношения с командой доставки, руководством практики и командой управления клиентами. Вы будете активно способствовать повышению операционной эффективности проектов и внутренних инициатив. Своевременное взаимодействие и тесное сотрудничество с директорами практик, руководителями практики и техническими менеджерами для стимулирования обучения и обучения, развития карьеры, повышения производительности и сотрудничества в рамках всей команды. В соответствии со стремлением Optiv к качеству, вы подтвердите, что работа самого высокого качества в соответствии с нашими стандартами качества, просмотрев работу, выполненную другими участниками. Как вы окажете влияние: С Optiv вы можете ожидать: • Компания, стремящаяся отстаивать разнообразие, равенство и инклюзивность через группы по интересам, включая, помимо прочего, Women’s Network, Optiv Pride, Black Employee Network и Veterans Support Network. • Баланс работы и личной жизни. Мы предлагаем гибкую программу «Recharge» с отгулами, которая побуждает подходящих сотрудников тратить время, необходимое для пополнения баланса. • Ресурсы для профессионального обучения, включая компенсацию за обучение • Творческое решение проблем и способность решать уникальные, сложные проекты • Возможности волонтеров. «Optiv Chips In» поощряет сотрудников к волонтерской деятельности и взаимодействию со своими командами и сообществами. • Способность и технологии, необходимые для продуктивной работы удаленно / из дома (если применимо) Optiv — работодатель с равными возможностями.Все квалифицированные кандидаты на работу будут рассматриваться независимо от расы, цвета кожи, религии, пола, гендерной идентичности, сексуальной ориентации, национального происхождения, статуса лица с ограниченными возможностями, статуса ветерана или любого другого основания, защищенного федеральным законодательством, государством или государством. местное право. Optiv Security Объявление о вакансии: 11533911 Размещено: 09 июля 2021 г. Обновлено: 11 июля 2021 г. Выразительный.Уникальный. Стильно. Красота начинается с нуля. Закрепите свой дом и сделайте приветливое заявление, добавив ярких красок в ваше внутреннее и внешнее жилое пространство. Выбрать другую коллекцию Нажмите на образцы ниже, чтобы изучить оттенки из коллекции цветов Porch & Floor и просмотреть другие цвета в коллекции. * Из-за ограничений конкретного принтера и монитора компьютера отображаемые здесь цвета могут незначительно отличаться от реальных цветов краски.Посетите вашего местного продавца, чтобы просмотреть фактический цветовой чип и подтвердить свой выбор цвета. Aquadulce 319B 319B LRV: 69 Шестнадцатеричный: # D1DCCF RGB: 209, 220, 207 CMYK: 5, 0, 6, 14 Коренная порода 418G 418G LRV: 6 Шестнадцатеричный: # 434641 RGB: 67, 70, 65 CMYK: 4, 0, 7, 73 Мешковина 429D 429D LRV: 32 Шестнадцатеричный: # B1946F RGB: 177, 148, 111 CMYK: 0, 16, 37, 31 Бурро 334C 334C LRV: 43 Шестнадцатеричный: # CEA78F RGB: 206, 167, 143 CMYK: 0, 19, 31, 19 Кембридж 401G 401G LRV: 6 Шестнадцатеричный: # 48423C RGB: 72, 66, 60 CMYK: 0, 8, 17, 72 Камель 431C 431C LRV: 46 Шестнадцатеричный: # C5B19A RGB: 197, 177, 154 CMYK: 0, 10, 22, 23 Классический слоновая кость 431A 431A LRV: 73 Шестнадцатеричный: # E5DDD0 RGB: 229, 221, 208 CMYK: 0, 3, 9, 10 Клейтон 422D 422D LRV: 31 Шестнадцатеричный: # 9B9789 RGB: 155, 151, 137 CMYK: 0, 3, 12, 39 Клиффсайд 408F 408F LRV: 16 Шестнадцатеричный: # 736E68 RGB: 115, 110, 104 CMYK: 0, 4, 10, 55 Кордвуд 432G 432 г LRV: 6 Шестнадцатеричный: # 594135 RGB: 89, 65, 53 CMYK: 0, 27, 40, 65 Краеугольный камень 428B 428B LRV: 56 Шестнадцатеричный: # D9C19F RGB: 217, 193, 159 CMYK: 0, 11, 27, 15 Трещина Wh37 Wh37 LRV: 84 Шестнадцатеричный: # F3ECD8 RGB: 243, 236, 216 CMYK: 0, 3, 11, 5 Глубокий Лох 314F 314F LRV: 11 Шестнадцатеричный: # 47626A RGB: 71, 98, 106 CMYK: 33, 8, 0, 58 Emerson 316E 316E LRV: 21 Шестнадцатеричный: # 69847F RGB: 105, 132, 127 CMYK: 20, 0, 4, 48 Файроакс 316G 316G LRV: 7 Шестнадцатеричный: # 384D4E RGB: 56, 77, 78 CMYK: 28, 1, 0, 69 Фолкленд 315C 315C LRV: 54 Шестнадцатеричный: # B1C7C5 RGB: 177, 199, 197 CMYK: 11, 0, 1, 22 Усталость 421F 421F LRV: 11 Шестигранник: # 5D5C4D RGB: 93, 92, 77 CMYK: 0, 1, 17, 64 Флагшток 423F 423F LRV: 15 Шестнадцатеричный: # 786957 RGB: 120, 105, 87 CMYK: 0, 13, 28, 53 Гринбрайар 218G 218G LRV: 5 Шестнадцатеричный: # 1D4B31 RGB: 29, 75, 49 CMYK: 61, 0, 35, 71 Высокая точка 316F 316F LRV: 14 Шестигранник: # 506D69 RGB: 80, 109, 105 CMYK: 27, 0, 4, 57 Благородный серый 417G 417G LRV: 13 Шестнадцатеричный: # 5D676B RGB: 93, 103, 107 CMYK: 13, 4, 0, 58 Старый Тюдор 434G 434G LRV: 8 Шестнадцатеричный: # 604E44 RGB: 96, 78, 68 CMYK: 0, 19, 29, 62 Торфяной мох 429G 429 г LRV: 3 Шестнадцатеричный: # 442F27 RGB: 68, 47, 39 CMYK: 0, 31, 43, 73 Олово 409D 409D LRV: 31 Шестнадцатеричный: # 9B9893 RGB: 155, 152, 147 CMYK: 0, 2, 5, 39 Секвойя 437F 437F LRV: 11 Шестнадцатеричный: # 7E534E RGB: 126, 83, 78 CMYK: 0, 34, 38, 51 Синий Шеффилд 313G 313 г LRV: 3 Шестнадцатеричный: # 1F3446 RGB: 31, 52, 70 CMYK: 56, 26, 0, 73 Одинарное происхождение 435G 435 г LRV: 6 Шестнадцатеричный: # 673B34 RGB: 103, 59, 52 CMYK: 0, 43, 50, 60 Смоки-бордовый 338G 338G LRV: 5 Шестнадцатеричный: # 63333B RGB: 99, 51, 59 CMYK: 0, 48, 40, 61 Яблоко со специями 237G 237G LRV: 7 Шестнадцатеричный: # 86242A RGB: 134, 36, 42 CMYK: 0, 73, 69, 47 Скульптура 411D 411D LRV: 37 Шестнадцатеричный: # 9FA5A5 RGB: 159, 165, 165 CMYK: 4, 0, 0, 35 замша 330E 330E LRV: 30 Шестнадцатеричный: # BA8C64 RGB: 186, 140, 100 CMYK: 0, 25, 46, 27 Сильван 409B 409B LRV: 60 Шестнадцатеричный: # CBCCC9 RGB: 203, 204, 201 CMYK: 0, 0, 1, 20 Клубок 320D 320D LRV: 38 Шестнадцатеричный: # A1A88F RGB: 161, 168, 143 CMYK: 4, 0, 15, 34 Trailhead 407F 407F LRV: 15 Шестнадцатеричный: # 746A5F RGB: 116, 106, 95 CMYK: 0, 9, 18, 55 Уэтерз Филд 415E 415E LRV: 29 Шестнадцатеричный: # 8095A0 RGB: 128, 149, 160 CMYK: 20, 7, 0, 37 White Basics Wh29 Вт · ч29 LRV: 82 Шестнадцатеричный: # EDEAE0 RGB: 237, 234, 224 CMYK: 0, 1, 5, 7 Винджаммер 401B 401B LRV: 53 Шестнадцатеричный: # C8BFB5 RGB: 200, 191, 181 CMYK: 0, 4, 10, 22 Йеллоустон 325C 325C LRV: 54 Шестнадцатеричный: # DCBF88 RGB: 220, 191, 136 CMYK: 0, 13, 38, 14 Давление разрыва на спроектированных микроклапанах
Gel управление интерфейсом на микроклапане перфузии
Культура клеток
Результаты и обсуждение
Рабочие характеристики регулятора давления при различных скоростях потока
Чувствительность и рабочий диапазон регулятора давления
Удержание геля с помощью перфузионных микроклапанов с широкими отверстиями
Ручная загрузка геля с засеянным клетками с помощью микропипеточного устройства
Независимая загрузка геля и контроль микросреды взаимосвязанных тканевых камер
Обсуждение
Заключение
00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 00000 н.
00001 Старший консультант II — Ping | Remote, США — cc203832-0db9-431c-bbc1-4d4c9cca17c2
Должностная инструкция
В Optiv мы стремимся помочь нашим клиентам сделать их бизнес более безопасным. Мы одна из самых быстрорастущих компаний в действительно важной отрасли.
Требования к успеху:
Опыт должен включать не менее трех лет:
Сертификаты:
# LI-Dh2
Если вы ищете культуру, которая поддерживает рост, способствует успеху и продвигает отрасль вперед, найдите свое место в Optiv! Как ведущий поставщик решений для кибербезопасности, Optiv имеет наиболее полную экосистему продуктов для обеспечения безопасности и партнеров для предоставления беспрецедентных услуг.Наша богатая и успешная история с нашими клиентами основана на доверии, поскольку мы обслуживаем более 12 000 клиентов различных размеров и отраслей, включая коммерческие, государственные и образовательные. У нас есть проверенный опыт в планировании, создании и выполнении успешных программ безопасности в таких областях, как управление рисками, кибер-цифровая трансформация, управление угрозами, операции по обеспечению безопасности — управляемые услуги и управление идентификацией и данными. Сведения о вакансии
Компания
Расположение
Копировать ссылку Color Directions ™ Коллекция цветов крыльца и пола
Color Directions ™ Крыльцо и пол
. Aquadulce
Коренная порода
Мешковина
ослик
Кембридж
Камель
Классический слоновая кость
Клейтон
Клиффсайд
Кордвуд
Краеугольный камень
Треснувший
Глубокий Лох
Emerson
Файроакс
Фолкленд
Усталость
Плита
Гринбрайар
High Point
Благородный серый
Старый Тюдор
Торфяной мох
Олово
Секвойя
Шеффилд Синий
Одинарное происхождение
Дымчатый бордовый
Пряное яблоко
Скульптура
Замша
Сильван
Клубок
Trailhead
Уэтерс Филд
Белая основа
Windjammer
Йеллоустон