Site Loader

Содержание

БАЙДАРКА ВЕКТОР 1, Байдарка Вектор

Байдарка «Вектор 1 » — от компании «Тритон-лтд»!!!

Байдарка «Вектор1 « -одноместная каркасно-надувная байдарка с закрытой декой для больших водоемов. Лодка сконструирована и построена по типу «Морского каяка». Туристские лодки такого класса можно назвать экспедиционными. Этот класс байдарок обладает несколькими характерными чертами, такими как длинный вытянутый силуэт и сравнительно узкие борта. Такая форма помогает лодке развивать большую скорость и отлично держать курс. «Вектор 1» — самая быстрая разборная одноместная байдарка. Каяк внешне очень красив. Экспортируется в Германию и другие страны Европы.

Конструкция: : каркасно-надувная байдарка. Монокильсон обеспечивает курсовую устойчивость, встроенные в оболочку бортовые баллоны обеспечивают остойчивость и непотопляемость байдарки, специальные герметичные лючки в носу и корме судна помогают при размещении гермоупаковок внутри лодки. Байдарка комплектуется рулевым устройством и юбкой. Для лодки длиною 5,2 м, имеет маленький вес 18 кг. Упаковывается в удобную упаковку-рюкзак.

Технические характеристики:


Экипаж, чел. – 1
Длина в собранном виде 5,2м
Ширина в собранном виде 0,62м
Высота в собранном виде 0,19м
Вес в упаковке, 18кг
Грузоподъемность до 150кг
Размеры в упаковке, м. – 1,2 х 0,4 х 0,25.

Назначение: походы средней продолжительности по большим открытым водоемам. Для использования в море, необходимо дюралюминиевый каркас дополнительно защитить от воздействия соленой воды, например силиконом, или сразу после использования промыть пресной водой.

Сборка: сборка непроста, требует определенных усилий. Но результат и полученное удовольствие от ходовых качеств байдарки, полностью компенсирует затраченное время и усилия. При наличии опыта , время сборки 40-50 минут.

Вместительность: достаточная вместительность для похода средней продолжительности. Более длительное путешествие зависит от компактности снаряжения, квалификации туриста и состава группы .

Посадка гребца: надувное сидение крепится на стрингерах, имеется возможность поддува. В общем посадка удобная.

Безопасность: : не смотря на то, что корпус байдарки узкий остойчивость достаточная. Лодка жесткая и прочная. Эффективно движется во время ветра и волнений на водоеме.

Ходовые качества: быстрый каяк идущий заданным курсом.

Вектор-МБИ-1

Шифр эксперимента: Вектор-МБИ-1
Направление НПИ: 3. Человек в космосе
Секция КНТС: Космическая биология и физиология
Наименование эксперимента: Изучение особенностей вестибулярной стимуляции в невесомости
Цель эксперимента:

Общая цель: исследование спектра ускорений, действующих на вестибулярный аппарат при двигательной активности в невесомости.

Проводимые космические исследования содержат два этапа.

Первый этап направлен на изучение вестибулярной стимуляции и заключается в исследовании спектра ускорений, действующих на вестибулярный аппарат при двигательной активности в невесомости.

Второй этап заключается:

— в исследовании вклада в вестибулярную стимуляцию движений головы и движений тела в условиях невесомости.

— в изучении возможности гальванической коррекции качества стабилизации взора в условиях микрогравитации.

 

Описание эксперимента:

Космический эксперимент “Вектор-МБИ-1” проводится с целью проверки одной из гипотез этиологии космической болезни движения. Суть данной гипотезы заключается в том, что действие невесомости на анализаторы пространственной ориентации осуществляются не только в виде непосредственного влияния измененной афферентации с гравитозависимых структур, но и опосредованно через изменение характера передвижений в условиях невесомости.

Предполагается, что опосредованное воздействие невесомости при двигательной активности в относительно безопорном пространстве выражается в воздействии на вестибулярный аппарат и анализаторы пространственной ориентации ускорений, спектр которых укладывается в зону спектра ускорений, вызывающих укачивание в наземных условиях (морская, воздушная болезнь и т.д.).

В процессе эксперимента будут проводиться сравнительные измерения линейных и угловых ускорений, действующих на вестибулярный аппарат человека, при основных естественных формах передвижения в условиях земной силы тяжести (ходьба, бег, прыжки) и в невесомости.

Не анализируя всех теорий этиологии космической болезни движения, следует лишь отметить, что доминирующее положение в данное время занимает теория сенсорного и межанализаторного конфликта, в основе которой лежит предположение, что обычные движения в условиях невесомости в силу измененной афферентации гравитозависимых структур приводят к необычной сенсорной интеграции, являющейся пусковым моментом развития космической болезни движения.

В то же время проведенный нами анализ двигательной активности космонавтов во время телесеансов связи с ЦУПом показал, что передвижения в условиях невесомости отличаются от “обычных” способов передвижения в земных условиях (ходьба, бег, прыжки и т.д.):

— перемещение в невесомости осуществляется путем отталкивания руками и ногами от опоры или перехватывания руками за выступающие элементы интерьера станции;

— перемещения имеют апериодический характер в отличие от циклических локомоций в наземных условиях;

— перемещения осуществляются в сагиттальной, фронтальной и горизонтальной плоскостях примерно в одинаковом объеме, в то время как в наземных условиях они выполняются преимущественно в сагиттальной плоскости тела;

— передвижение выполняется в течение более длительного времени, чем в наземных условиях, и состоит из трех фаз: ускорения, свободного полета с равномерной скоростью и замедления;

— при выполнении движений в условиях невесомости постоянно присутствует вращение тела вокруг центра масс или точки опоры за счет сохранения импульса движения.

Полученные факты позволили высказать предположение, что действие невесомости на анализаторы пространственной ориентации осуществляются не только в виде непосредственного влияния, выражающегося в изменении афферентации от гравитозависимых структур (сенсорный конфликт), но и опосредованно — через изменение характеристик ускорений .

Предварительная оценка спектральных составляющих движения в невесомости и в наземных условиях позволяет сделать предположение о существенном изменении спектров ускорений при переходе от земных условий к условиям невесомости, выражающемся в уменьшении доминирующей частоты ускорений, действующих на вестибулярный аппарат.

В последнее время в NASA стали активно применять гальваническую стимуляцию вестибулярного аппарата для имитации дезориентации космонавта в орбитальном полете с целью приблизить имитацию процесса управляемого спуска с орбиты к реальным условиям.

В научном коллективе под руководством акад. В.А Садовничего изучается другая возможность применения гальванической стимуляции вестибулярного аппарата – коррекция качества стабилизации взора космонавта в условиях микрогравитации, когда наличие вестибуло-сенсорного конфликта приводит к увеличению запаздывания при установке взора в два и более раз по сравнению с земными условиями [7]. Как показали теоретические исследования, использование информации с микроакселерометров и микроДУСов, входящих в МЭМС, расположенной на шлеме космонавта, позволяет корректировать выходные сигналы первичных афферентных нейронов вестибулярного аппарата с целью уменьшения запаздывания установки взора на орбите.

Проведение космического эксперимента позволит подтвердить или опровергнуть эти теоретические результаты.

 

Новизна эксперимента:

Впервые предполагается провести длительное непрерывное (до 3 часов) автономное (без использования бортовых источников питания) измерение ускорений, действующих на вестибулярный аппарат человека и его тело во время выполнения реальной деятельности, сопровождающейся двигательной активностью, в условиях относительно безопорного пространства.

Примерно аналогичное оборудование использовалось в космическом эксперименте, проведенном Clarkе еt аl. (1993) с регистрацией 3 линейных и 3 угловых составляющих ускорения с помощью акселерометров и датчиков угловой скорости, а также движений глаз с помощью видеоокулографии. Данная аппаратура не позволяет исследовать ускорения и глазодвигательную активность при неограниченной свободе передвижений, так как требуется связь с бортовым питанием и устройством накопления информации. Использовавшаяся для регистрации движений головы и глаз австрийская аппаратура “Монимир” и французская аппаратура “Физали” также позволяли проводить исследования только в фиксированном положении космонавта.

Таким образом, по сравнению с экспериментами, проведенными при полетах орбитальных комплексов “Салют”, “МИР” и МТКК “Спейс Шаттл” (Корнилова Л.Н., и др., 1993; СlarkeA.H. etal.,1993; Andre-DeshaysC. etal.,1993) в целях изучения вестибулоглазодвигательного взаимодействия, предлагаемый эксперимент позволит обеспечить полную свободу перемещений космонавта в течение длительного времени, и, таким образом, позволит исследовать спектр ускорений, наиболее полно характеризующий гравитоинерционную среду при перемещениях в условиях невесомости.

 

Научная аппаратура:

Принципиальных препятствий для создания НА при современных технологиях и имеющихся аналогах не существует. Прототипами могут служить уже имеющиеся разработки, выполненные для проведения КЭ в 1999 году («ВЕКТОР-МБИ»), а также аппаратура для измерения ускорений на космических спутниках «Татьяна-2» и «Ломоносов» (Садовничий В.А. и др., 2010).

 

Ожидаемые результаты:

Основные результаты КЭ:

1. Сведения о параметрах ускорений, действующих на вестибулярный аппарат человека при двигательной активности в условиях невесомости.

2. Сведения о вкладе движений головы и движений тела в вестибулярную стимуляцию в процессе двигательной адаптации к условиям невесомости.

Результаты предполагается использовать в следующих направлениях:

— Анализ спектра ускорений, действующих на вестибулярный аппарат человека, в наземных условиях при естественных и искусственных способах перемещения в пространстве в сравнении с условиями невесомости даст возможность проверить рабочую гипотезу об опосредованном влиянии невесомости (через изменение характеристик передвижений) на анализаторы пространственной ориентации. Доказательство значимости спектра ускорений, действующих на вестибулярный аппарат в невесомости, в этиологии космической болезни движения позволит выделить причинные факторы, объединяющие земные и космическую формы болезни движения.

— Сравнение спектров ускорений, действующих на вестибулярный аппарат человека при двигательной активности на различных этапах полета и в реадаптационном периоде, позволит определить некоторые закономерности двигательной адаптации к условиям новой гравитоинерционной среды в зависимости от временного фактора и состояния организма в данный период.

Эти данные, в частности, можно было бы использовать для разработки средств и методов объективной диагностики наличия у космонавта космической болезни движения, основываясь на данных динамики характера двигательной активности (известно, что при наличии укачивания космонавты резко ограничивают двигательную активность) и вестибулоглазодвигательного взаимодействия.

— Результаты эксперимента (параметры ускорений, действующих на вестибулярный аппарат в невесомости) предполагается также использовать для разработки средств и методов предполетных вестибулярных тренировок в интересах прогнозирования и профилактики космической болезни движения, а также разработки автоматического корректора установки взора.

 

Сроки проведения: 2021 — 2022 гг.
Состояние эксперимента: Реализуется
Организация постановщик: МГУ имени М.В.Ломоносова
Организации участники: МГУ имени М.В.Ломоносова, ЦПК имени Ю.А.Гагарина, ИМБП РАН, РКК «Энергия» имени С.П.Королёва
Научный руководитель: Садовничий В. А., МГУ имени М.В.Ломоносова, ректор, д.ф.-м.н., профессор, академик РАН
Публикации по эксперименту:

1. Каспранский Р.Р., Алексеев В.Н., Воронин Л.И. “Принцип апериодического воздействия вестибулярных раздражителей как основа повышения эффективности вестибулярной подготовки”// Профессиональная деятельность космонавтов и пути повышения её эффективности. 1993. Звездный городок. С. 220-222.

2. Томиловская Е.С., Козловская И.Б. “Влияние длительных космических полетов на организацию реакции горизонтальной установки взора”// Физиология человека. 2010. Т. 36. № 6. С. 1-9.

3. Садовничий В.А., Александров В.В., Александрова Т.Б., Э. Сото, Сидоренко Г.Ю., Тихонова К.В. “Об автоматической коррекции вестибуло-сенсорного конфликта в условиях невесомости, основанной на принципе гальванической стимуляции и на компьютерном моделировании”// Интеграл, 2012, № 2(64), с.70-74.

4. В.В.Александров, Т.Б.Александрова, А.Ангелес Вазкез, Р.Вега, М.Рейес Ромеро, Э.Сото, К.В.Тихонова, Н.Э.Шуленина “Алгоритм коррекции выходных сигналов вестибулярных механорецепторов для имитации пассивного поворота”\\ Вестник Московского университета. Серия 1. Математика. Механика. 2015. № 5 (в печати).

5. Ю.К.Столбков, Е.С.Томиловская, И.Б.Козловская, Ю.П.Герасименко “Гальваническая вестибулярная стимуляция в физиологических и клинических исследованиях последних лет”\\ Успехи физиологических наук. 2014, Том 45. №2.

 

Задачи эксперимента:

1. Задачи 1-го этапа:

а) Измерение ускорений на уровне вестибулярного аппарата человека в условиях невесомости во время жизнедеятельности на борту ПКК с использованием акселерометрического комплекса.

б) Контроль акселерационных измерений с помощью оптической системы ОСПИ.

в) Оценка спектра ускорений, воздействующих на голову человека.

г) Оценка динамики вестибулярной стимуляции в ходе двигательной адаптации к невесомости и профессиональной деятельности на борту МКС.

2. Основные научно-технические задачи 2-го этапа космических исследований с использованием прибора «Вектор-МБИ» и гальванического корректора:

а) Измерение ускорений на уровне вестибулярного аппарата человека и его тела в условиях невесомости во время жизнедеятельности на борту ПКК.

б) Экспериментальное подтверждение возможности гальванической коррекции качества стабилизации взора в условиях орбитального полета.

Постановщики эксперимента: Александров Владимир Васильевич, МГУ имени М.В.Ломоносова, доктор физико-математических наук, профессор
Страна: Россия

Vector Optics Continental 1-6×28 FFP ED Zero Stop 34мм

Оптический прицел Vector Optics Continental 1-6×28 FFP ED Zero Stop — новинка из новой премиальной линейки прицелов Vector Optics. Качество прицелов серии Continetal отмечено на международных выставках в Лас-Вегасе(США) и Нюрнберге(Германия). Увеличение от 1 до 6 покрывает большинство охотничьих задач. Монолитный корпус диаметром 34 мм и и немецкое Schott ED стекло сводят к минимуму хроматическую дисперсию и делают изображение ярким и четким. 
Прицельная сетка — VCT-BNW с подсветкой. Сетка гравирована на стекле, находится в первой фокальной плоскости. Данная модель оснащена тактическими барабанами с фиксацией и системой моментального возврата барабана вертикальных поправок в изначальное положение после стрельбы по кликам ZeroStop. Удобная, боковая регулировка подсветки. В комплекте с прицелом поставляются кольца на вивер, защитные крышки.

Прицел держит сильную отдачу и рекомендован к установке на.223 .308win .3006 .300win .338 включительно.

ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИЦЕЛА Vector Optics Continental 1-6×28 FFP ED Zero Stop

Диаметр объектива (мм): 28
Кратность: 1-8
Поле зрения ([email protected]):

34,5 — 6,3

Диаметр выходного зрачка (мм): 8 — 4.6
Удаление выходного зрачка (мм):

100

Диаметр трубы прицела

34 мм

Шаг барабана поправок

0,1 MRAD

Диапазон поправок:

52 MIL

Прицельная сетка: VCT-BNW
Отсройка параллакса от, ярды 10
Подсветка сетки:

красный

Настройка диоптрий на окуляре

±2

Вес нетто (грамм): 550
Длина (мм):

296

Газонаполнение:

азот

Гарантия производителя :

Пожизненная*

* Пожизненную гарантию обеспечивает производитель Vector Optics. 

Фасадная система с воздушным зазором Вектор под керамогранит

Керамогранитная / керамическая плитка

Система «Вектор 1» имеет пять конструктивных вариантов

Вектор 1. Тип 1.

Ключевые особенности:

  • Подсистема вертикальная;
  • Г-образный профиль;
  • Крепление кронштейнов в стены.

Узловые ренения | Комплектующие | Альбом технических решений

Данный вариант является самым простым и экономичным, позволяющим существенно сократить стоимость м2 фасадной системы по сравнению с другими техническими решениями, без потери надёжности.

Основой подсистемы служат стальные Г-образные профили, располагаемые вертикально. Профили крепятся к несущим кронштейнам, которые, в свою очередь, крепятся к стенам здания с помощью фасадных анкеров. Конструкция кронштейнов допускает применение удлинителя, позволяющего скомпенсировать возможные неровности стен глубиной до 120 мм., при этом на одном объекте могут использоваться кронштейны как с удлинителем, так и без него. Облицовочный материал крепится к вертикальным профилям с помощью кляммеров из нержавеющей стали. Все элементы подсистемы соединяются между собой вытяжными заклепками A2/A2. Подсистема успешно применяется для облицовки наружных стен зданий, выполненных из бетона или других полнотелых оснований, обеспечивающих необходимые вырывающие усилия для анкерного крепежа.

 

Вектор 1. Тип 2.

Ключевые особенности:

  • Подсистема Вектор 1;
  • Профиль С-образный, Ω-образный;
  • Крепление в стены
Этот тип вертикально ориентированной подсистемы с креплением несущих кронштейнов в стены и применением в качестве основных вертикальных направляющих С и Ω-образного профиля. Ввиду повышенных прочностных свойств вертикального С и Ω профиля по сравнению с Г-образным профилем шаг расстановки кронштейнов в 1200 мм сохраняется на больших высотных отметках, таким образом минимизируется средний расход фасадных элементов (кронштейнов, прокладок, фасадных анкеров, заклёпок) и оптимизируется бюджет объекта.В качестве силового каркаса здания используются телескопические кронштейны (несущий кронштейн и удлинитель) с диапазоном регулировки вертикальных неровностей стены до 120 мм на каждом из типоразмеров кронштейнов (50-400 мм).Подсистема 2-го типа, облицованная керамогранитом, отличается высокими прочностными характеристиками (без ограничения по высотности и ветровым районам), позволяет при необходимости минимизировать вылет облицовочного материала от наружных стен с сохранением по технологии воздушного зазора.

Частным случаем данного конструктивного решения является применение П-образных кронштейнов с креплением С-образной направляющей в местах, где требуется обеспечить минимальный вынос от стены. Отличается наилучшими показателями стабильности и симметричности восприятия нагрузок.

 

Вектор 1. Тип 3.

  • Подсистема Вектор 1;
  • Профиль L-образный;
  • Крепление в стены.

Вентилируемый керамогранит представляет собой вертикально-горизонтальный несущий конструктив, но в отличии от большинства так называемых перекрёстных систем имеет основной вариант крепления несущего кронштейна в «правильном» (на ребро установленном) положении, позволяющем наиболее полно и эффективно использовать опорное плечо и конструкцию кронштейна при его работе в составе фасадной системы (прежде всего восприятие весовых нагрузок). Кронштейны крепятся к стенам с расчётным шагом по горизонтали, образуя несущие горизонтальные пояса. Крепление горизонтального L профиля производится на удлинитель кронштейна (позволяет производить регулировку неровностей стен до 120 мм). Вертикальные направляющие крепятся непосредственно к установленному горизонтальному профилю.Данный вид системы особенно удобен в тех случаях монтажа, когда требуется максимально быстро произвести монтаж вентфасада, закрыть тепловой контур здания в отсутствии рабочего проекта НВФ. Отсутствие необходимости устанавливать кронштейны строго по вертикали (согласно раскладки облицовочного материала) позволяет одновременно вести монтажные работы на объекте, проектировать вентилируемый фасад и согласовывать с Заказчиком раскладку.Облицовка фасада керамогранитом с помощью вентилируемого фасада возможна с увеличенным шагом расстановки кронштейнов по вертикали (свыше 1200 мм) и в ряде случаев может считаться достойной заменой системам с креплением исключительно в междуэтажные перекрытия.

 

В качестве облицовки основной плоскости фасада в данном варианте следует использовать керамогранитные плиты производства «PALAZZO Ceramics» (КНР), «LEONARDO 1502 Ceramica S.p.A» (Италия), «GRANITI FIANDRE S.p.A.» (Италия).

Навесная фасадная система с воздушным зазором «Вектор» под керамогранит может изготавливаться в двух вариантах:

  • из оцинкованной стали;
  • из нержавеющей стали.

Кляммеры и система могут быть окрашены в любой цвет согласно шкале RAL.

Примеры исполнения навесной фасадной системы с воздушным зазором «Вектор» под керммогранит

Навесная фасадная система на Т-образном профиле на выдвигающемся с облицовкой из керамогранита

Навесная фасадная система на Т-образном профиле на выдвигающемся с облицовкой из керамогранита

Навесная фасадная система на Т-образном профиле на выдвигающемся с облицовкой из керамогранита

На навесную фасадную систему под керамогранит имеется вся разрешительная документация.

Основные моменты монтажа и устройства навесной фасадной системы с воздушным зазором «Вектор» под керамогранит представлены на видео

Преимущества вентилируемых фасадов из керамогранита:
  • сравнимы по прочности с натуральным гранитом;
  • имеют различные варианты фактуры поверхности;
  • обладают высокой морозостойкостью и минимальным водопоглощением;
  • стойкостью к атмосферным осадкам и влиянию химических веществ;
  • максимальная высота фасада — до 75 м;
  • легкость монтажа;
  • высокий уровень надежности, т.к. каждая плита крепится 4-мя кляммерами.

Использование керамогранита — это всегда признак хорошего вкуса, так как здание принимает изысканный вид, стилизовано связанный с классической архитектурой.

Межкомнатная дверь «Вектор 1» — Дверной Волгоград

Удобные способы оплаты

Для удобства покупателей предусмотрены различные способы оплаты товара в магазине «Дверной»:

  • Наличными в кассу магазина
  • Безналичный способ оплаты
  • Оплата картой по терминалу
  • Онлайн оплата на сайте компании Касса-Online

Двери в рассрочку

Магазин «Дверной» предлагает своим покупателям приобрести входные и межкомнатные двери в рассрочку. Для получения более подробной информации обязательно свяжитесь с менеджером магазина, по телефону указанному в контактах. Также вы можете связаться с менеджером и уточнить все детали приобретения дверей в рассрочку. Напоминаем вам, что приобретение товара в рассрочку очень удобно и выгодно, особенно, когда вы совершаете покупку сразу нескольких дверей, нет необходимости замораживать сразу крупную сумму денег.

Получить консультацию по рассрочке заказать обратный звонок

Доставка продукции

Доставка дверей может осуществляться двумя способами: адресная доставка или самовывоз. Адресную доставку Вы можете заказать при оформлении договора на покупку дверей в фирменном магазине «Дверной» по адресу указанному для Вашего региона. Важно! При оформлении адресной доставки, правильно указать адрес доставки и контактный телефон, а также промежуток времени в который Вы сможете принять купленный Вами товар. Доставка дверей купленных в фирменном магазине «Дверной» осуществляется собственной службой доставки по адресу указанному при оформлении заказа.Также Вы можете забрать купленный Вами товар самостоятельно. Самовывоз товара может быть осуществлён со склада компании «Дверной»

Доставка и подъем Оформить доставку

Качественная установка дверей

В штате магазина «Дверной» несколько монтажных бригад специализирующихся на качественной и грамотной установке входных и межкомнатных дверей. Покупая двери в «Дверном» вы гарантированно получаете полный комплекс качественных и квалифицированных услуг. И помните, что грамотная установка двери с соблюдением всех необходимых технологий, влияет на срок ее службы!

Грамотный монтаж Заказать установку дверей

Гарантия качества

Вся продукция магазина «Дверной» изготавливается на специализированных предприятиях и соответствует всем необходимым нормам и стандартам.
Гарантия качества на все двери в магазине «Дверной» составляет 1 год.

Vector One: как это влияет на страховых агентов

Хотите знать, как работает Vector One при подаче заявки на назначение страхового агента?

Если да, то вы нашли нужную статью!

Сегодня я расскажу все, что вам нужно знать о Vector One и о том, стоит ли вам беспокоиться.

Начнем!

Ссылки на статьи для быстрого перехода

Что такое Vector One?

Vector One — это аналог агентства кредитной информации для страховых компаний.В нем фиксируются проблемы с дебетовым сальдо агентов, то есть комиссионный аванс, который они должны страховым компаниям.

Большинство страховых компаний проверяют Vector One всякий раз, когда к ним подают заявки на работу новые агенты. Если есть какие-либо негативные отчеты, они в большинстве случаев откажут в назначении.

Другими словами, если вы являетесь страховым агентом, включенным в список Vector One, вам, как правило, не будет предлагаться контракт с другой страховой компанией до тех пор, пока ваш долг не будет погашен.

Как это работает?

Когда вы работаете над делом, которое не приносит никакого дохода, вы можете получить аванс от своего страхового агентства для будущей комиссии.

Учитывая, что вы постоянно заключаете сделки с перевозчиком, этот долг легко спишется, так как ваши комиссионные за новые полисы, которые вы выпишете, погасят аванс.

Однако, если вы покинете страховую компанию до того, как погасите долг, о вас сообщит Vector One.

Как только вы получите сообщение о том, что у вас есть дебетовый баланс с оператором связи или несколькими операторами связи, вам необходимо настроить план платежей.

Это обеспечит надлежащий учет вашего дебетового остатка и то, что ваш контракт не будет расторгнут.

В случае отсутствия плана платежей вы не сможете вести какие-либо дальнейшие дела до тех пор, пока весь ваш долг не будет погашен.

Это также может привести к прекращению связи с другими операторами связи, с которыми вы работаете.

Нахождение в списке Vector One может иметь серьезные последствия не только для вашего дохода, но и для вашей способности вести дела и, возможно, для вашего личного кредита.

Что делать, если я в списке Vector One?

Если ваше имя и номер страховой лицензии есть в списке Vector One, вам, скорее всего, будет трудно получить назначение в другое агентство.

Большинство страховых компаний считают, что агенты, включенные в список Vector One, представляют финансовый риск, и обычно не нанимают их.

Тем не менее, ваша запись Vector One также содержит информацию о любых договоренностях о платежах и указывает, делаете ли вы платежи или нет.

Некоторые перевозчики согласятся работать с вами на этом этапе, в то время как другие предпочтут подождать, пока вы не будете исключены из списка Vector One и ваш долг не будет полностью погашен.

Что мне делать, если я хочу выйти из списка Vector One?

Ваша запись Vector One будет удалена после того, как вы выплатите долг.

Если вы хотите оспорить претензию и не можете решить проблему напрямую с агентством, вам необходимо связаться с Vector One в письменной форме и предоставить доказательство того, что вы не должны предъявлять претензию.

Затем они свяжутся с перевозчиком, который должен расследовать спор и отчитаться. Если выяснится, что в отчете допущена ошибка, вы будете исключены из списка Vector One.

Векторный класс (System.Numerics) | Документы Майкрософт

IsHardwareAccelerated

Получает значение, указывающее, подлежат ли векторные операции аппаратному ускорению за счет встроенной поддержки JIT.

Abs(Вектор)

Возвращает новый вектор, элементами которого являются абсолютные значения элементов заданного вектора.

Добавить(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, значения которого являются суммой каждой пары элементов из двух заданных векторов.

ИНе(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, выполняя побитовую операцию И-НЕ для каждой пары соответствующих элементов в двух векторах.

As(Вектор)

Повторно интерпретирует Vector64 как новый Vector64.

AsVectorByte(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора байтов без знака.

AsVectorDouble(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора двойной точности с плавающей запятой.

AsVectorInt16(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора 16-битных целых чисел.

AsVectorInt32(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора целых чисел.

AsVectorInt64(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора длинных целых чисел.

AsVectorNInt(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора целых чисел исходного размера.

AsVectorNUInt(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора целых чисел без знака исходного размера.

AsVectorSByte(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора байтов со знаком.

AsVectorSingle(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора одинарной точности с плавающей запятой.

AsVectorUInt16(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора 16-битных целых чисел без знака.

AsVectorUInt32(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора целых чисел без знака.

AsVectorUInt64(Вектор)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в биты вектора длинных целых чисел без знака.

ПобитовоеИ(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, выполняя побитовую операцию и над каждой парой элементов в двух векторах.

BitwiseOr(Vector, Vector)

Возвращает новый вектор, выполняя побитовую операцию или для каждой пары элементов в двух векторах.

Потолок(Вектор<Двойной>)

Возвращает новый вектор, элементами которого являются наименьшие целые значения, которые больше или равны элементам заданного вектора.

Потолок (вектор)

Возвращает новый вектор, элементами которого являются наименьшие целые значения, которые больше или равны элементам заданного вектора.

ConditionalSelect(Vector, Vector, Vector)

Создает новый вектор одинарной точности с элементами, выбранными из двух заданных исходных векторов одинарной точности на основе интегрального вектора маски.

ConditionalSelect(Vector, Vector, Vector)

Создает новый вектор двойной точности с элементами, выбранными из двух заданных исходных векторов двойной точности на основе интегрального вектора маски.

ConditionalSelect(Vector, Vector, Vector)

Создает новый вектор указанного типа с элементами, выбранными из двух заданных исходных векторов одного типа на основе интегрального вектора маски.

ConvertToDouble(Vector)

Преобразует Vector в Vector .

ConvertToDouble(Vector)

Преобразует Vector в Vector .

ConvertToInt32(Вектор<Одиночный>)

Преобразует Vector в Vector .

ConvertToInt64 (Вектор)

Преобразует Vector в Vector .

ConvertToSingle(Vector)

Преобразует Vector в Vector .

ConvertToSingle(Vector)

Преобразует Vector в Vector .

ConvertToUInt32(Вектор<Одиночный>)

Преобразует Vector в Vector .

ConvertToUInt64(Вектор)

Преобразует Vector в Vector .

Разделить(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, значения которого являются результатом деления элементов первого вектора на соответствующие элементы второго вектора.

Точка(Вектор, Вектор)

Возвращает скалярное произведение двух векторов.

Равно(Вектор<Двойной>, Вектор<Двойной>)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, равны ли элементы в двух заданных векторах двойной точности.

Равно (Вектор, Вектор)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, равны ли элементы в двух указанных целочисленных векторах.

Равно (Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, элементы которого сигнализируют, равны ли элементы в двух заданных векторах длинных целых чисел.

Равно (Вектор<Одиночный>, Вектор<Одиночный>)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, равны ли элементы в двух заданных векторах одинарной точности.

Равно(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор указанного типа, элементы которого сигнализируют, равны ли элементы в двух указанных векторах одного типа.

РавноВсе(Вектор, Вектор)

Возвращает значение, указывающее, равны ли все пары элементов в заданных векторах.

EqualsAny(Vector, Vector)

Возвращает значение, указывающее, равны ли какие-либо отдельные пары элементов в заданных векторах.

Этаж(Вектор<Двойной>)

Возвращает новый вектор, элементами которого являются наибольшие целочисленные значения, которые меньше или равны элементам заданного вектора.

Этаж(Вектор<Одиночный>)

Возвращает новый вектор, элементами которого являются наибольшие целочисленные значения, которые меньше или равны элементам заданного вектора.

БольшеЧем(Вектор<Двойной>, Вектор<Двойной>)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, больше ли элементы в одном векторе с плавающей запятой двойной точности, чем соответствующие элементы во втором векторе с плавающей запятой двойной точности.

БольшеЧем(Вектор, Вектор)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, больше ли элементы в одном целочисленном векторе, чем соответствующие им элементы во втором целочисленном векторе.

БольшеЧем(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор длинных целых чисел, элементы которого сигнализируют, больше ли элементы в одном векторе длинных целых чисел, чем соответствующие им элементы во втором векторе длинных целых чисел.

БольшеЧем(Вектор<Одиночный>, Вектор<Одиночный>)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, больше ли элементы в одном векторе с плавающей запятой одинарной точности, чем соответствующие элементы во втором векторе с плавающей запятой одинарной точности.

Больше чем(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, элементы которого сигнализируют, больше ли элементы в одном векторе указанного типа, чем соответствующие им элементы во втором векторе того же времени.

GreaterThanAll(Вектор, Вектор)

Возвращает значение, указывающее, все ли элементы в первом векторе больше, чем соответствующие элементы во втором векторе.

GreaterThanAny(Vector, Vector)

Возвращает значение, указывающее, больше ли какой-либо элемент в первом векторе, чем соответствующий элемент во втором векторе.

GreaterThanOrEqual(Vector, Vector)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, больше или равны элементы в одном векторе соответствующим элементам во втором векторе двойной точности с плавающей запятой.

GreaterThanOrEqual (Vector, Vector)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, больше или равны элементы в одном целочисленном векторе соответствующим элементам во втором целочисленном векторе.

GreaterThanOrEqual (Vector, Vector)

Возвращает новый вектор длинных целых чисел, элементы которого сигнализируют, больше или равны элементы в одном векторе длинных целых чисел соответствующим элементам во втором векторе длинных целых чисел.

GreaterThanOrEqual(Vector, Vector)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, больше или равны элементы в одном векторе соответствующим элементам во втором векторе одинарной точности с плавающей запятой.

GreaterThanOrEqual(Vector, Vector)

Возвращает новый вектор, элементы которого сигнализируют о том, что элементы в одном векторе указанного типа больше или равны соответствующим элементам во втором векторе того же типа.

GreaterThanOrEqualAll(Vector, Vector)

Возвращает значение, указывающее, все ли элементы в первом векторе больше или равны всем соответствующим элементам во втором векторе.

GreaterThanOrEqualAny(Vector, Vector)

Возвращает значение, указывающее, больше ли какой-либо элемент в первом векторе или равен соответствующему элементу во втором векторе.

Меньше(Вектор<Двойной>, Вектор<Двойной>)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, меньше ли элементы в одном векторе с плавающей запятой двойной точности, чем соответствующие им элементы во втором векторе с плавающей запятой двойной точности.

Меньше(Вектор, Вектор)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, меньше ли элементы в одном целочисленном векторе, чем соответствующие им элементы во втором целочисленном векторе.

Меньше(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор длинных целых чисел, элементы которого сигнализируют, меньше ли элементы в одном векторе длинных целых чисел, чем соответствующие им элементы во втором векторе длинных целых чисел.

Меньше(Вектор<Одиночный>, Вектор<Одиночный>)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, меньше ли элементы в одном векторе одинарной точности, чем соответствующие им элементы во втором векторе одинарной точности.

Меньше(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор указанного типа, элементы которого сигнализируют, меньше ли элементы в одном векторе, чем соответствующие им элементы во втором векторе.

МеньшеВсего(Вектор, Вектор)

Возвращает значение, указывающее, меньше ли всех элементов в первом векторе соответствующих им элементов во втором векторе.

МеньшеЧемЛюбого(Вектор, Вектор)

Возвращает значение, указывающее, меньше ли какой-либо элемент в первом векторе, чем соответствующий элемент во втором векторе.

LessThanOrEqual (Вектор<Двойной>, Вектор<Двойной>)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, меньше или равны элементы в одном векторе с плавающей запятой двойной точности, чем соответствующие элементы во втором векторе с плавающей запятой двойной точности.

LessThanOrEqual (Vector, Vector)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, меньше или равны элементы одного целочисленного вектора соответствующим элементам второго целочисленного вектора.

LessThanOrEqual (Vector, Vector)

Возвращает новый вектор длинных целых чисел, элементы которого сигнализируют, меньше или равны элементы в одном векторе длинных целых чисел соответствующим элементам во втором векторе длинных целых чисел.

LessThanOrEqual(Vector, Vector)

Возвращает новый целочисленный вектор, элементы которого сигнализируют, меньше или равны элементы в одном векторе с плавающей запятой одинарной точности, чем соответствующие элементы во втором векторе с плавающей запятой одинарной точности.

LessThanOrEqual(Vector, Vector)

Возвращает новый вектор, элементы которого сигнализируют, меньше или равны элементы в одном векторе соответствующим элементам во втором векторе.

LessThanOrEqualAll(Vector, Vector)

Возвращает значение, указывающее, все ли элементы в первом векторе меньше или равны соответствующим элементам во втором векторе.

LessThanOrEqualAny(Vector, Vector)

Возвращает значение, указывающее, меньше или равен какой-либо элемент в первом векторе соответствующему элементу во втором векторе.

Макс(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, элементы которого являются максимальными из каждой пары элементов в двух заданных векторах.

Мин(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, элементы которого являются минимумом каждой пары элементов в двух заданных векторах.

Умножить(T, Вектор)

Возвращает новый вектор, значения которого представляют собой скалярное значение, умноженное на каждое из значений указанного вектора.

Умножить(Вектор, T)

Возвращает новый вектор, значения которого являются значениями заданного вектора, каждое из которых умножается на скалярное значение.

Умножить(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, значения которого являются произведением каждой пары элементов в двух заданных векторах.

Узкий (Вектор<Двойной>, Вектор<Двойной>)

Сужает два экземпляра Vector в один Vector .

Узкий (Vector, Vector)

Сужает два экземпляра Vector до одного Vector .

Узкий (Vector, Vector)

Сужает два экземпляра Vector в один Vector .

Узкий (Vector, Vector)

Сужает два экземпляра Vector в один Vector .

Узкий (Vector, Vector)

Сужает два экземпляра Vector в один Vector .

Узкий (Vector, Vector)

Сужает два экземпляра Vector в один Vector .

Узкий (Vector, Vector)

Сужает два экземпляра Vector в один Vector .

Отрицать(Вектор)

Возвращает новый вектор, элементы которого являются отрицанием соответствующего элемента в указанном векторе.

ЕдиницыДополнение(Вектор)

Возвращает новый вектор, элементы которого получены путем взятия дополнения до единицы элементов заданного вектора.

ShiftLeft(Vector, Int32)

Сдвигает каждый элемент вектора влево на указанную величину.

ShiftLeft(Вектор, Int32)

Сдвигает каждый элемент вектора влево на указанную величину.

ShiftLeft(Вектор, Int32)

Сдвигает каждый элемент вектора влево на указанную величину.

ShiftLeft(Вектор, Int32)

Сдвигает каждый элемент вектора влево на указанную величину.

ShiftLeft(Вектор, Int32)

Сдвигает каждый элемент вектора влево на указанную величину.

ShiftLeft(Вектор, Int32)

Сдвигает каждый элемент вектора влево на указанную величину.

ShiftLeft(Вектор, Int32)

Сдвигает каждый элемент вектора влево на указанную величину.

ShiftLeft(Вектор, Int32)

Сдвигает каждый элемент вектора влево на указанную величину.

ShiftLeft(Вектор, Int32)

Сдвигает каждый элемент вектора влево на указанную величину.

ShiftLeft(Vector, Int32)

Сдвигает каждый элемент вектора влево на указанную величину.

ShiftRightArithmetic(Vector, Int32)

Сдвигает (со знаком) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightArithmetic(Vector, Int32)

Сдвигает (со знаком) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightArithmetic(Vector, Int32)

Сдвигает (со знаком) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightArithmetic(Vector, Int32)

Сдвигает (со знаком) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightArithmetic(Vector, Int32)

Сдвигает (со знаком) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightLogical(Vector, Int32)

Сдвигает (без знака) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightLogical(Vector, Int32)

Сдвигает (без знака) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightLogical(Vector, Int32)

Сдвигает (без знака) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightLogical(Vector, Int32)

Сдвигает (без знака) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightLogical(Vector, Int32)

Сдвигает (без знака) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightLogical(Vector, Int32)

Сдвигает (без знака) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightLogical(Vector, Int32)

Сдвигает (без знака) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightLogical(Vector, Int32)

Сдвигает (без знака) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightLogical(Vector, Int32)

Сдвигает (без знака) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

ShiftRightLogical(Vector, Int32)

Сдвигает (без знака) каждый элемент вектора вправо на указанную величину.

SquareRoot(Вектор)

Возвращает новый вектор, элементами которого являются квадратные корни элементов заданного вектора.

Вычесть(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, значения которого представляют собой разницу между элементами второго вектора и соответствующими им элементами первого вектора.

Сумма(Вектор)

Возвращает сумму всех элементов внутри указанного вектора.

Расширение (Vector, Vector, Vector)

Расширяет Vector на два экземпляра Vector .

Расширение (Vector, Vector, Vector)

Расширяет Vector на два экземпляра Vector .

Расширение (Vector, Vector, Vector)

Расширяет Vector на два экземпляра Vector .

Расширение (Vector, Vector, Vector)

Расширяет Vector на два экземпляра Vector .

Расширить (Вектор<Одиночный>, Вектор<Двойной>, Вектор<Двойной>)

Расширяет Vector на два экземпляра Vector .

Расширить (Vector, Vector, Vector)

Расширяет Vector на два экземпляра Vector .

Расширить (Vector, Vector, Vector)

Расширяет Vector на два экземпляра Vector .

Xor(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, выполняя операцию побитового исключающего ИЛИ ( XOr ) для каждой пары элементов в двух векторах.

Векторная структура (System.Numerics) | Документы Майкрософт

Полезна ли эта страница?

да Нет

Любая дополнительная обратная связь?

Отзыв будет отправлен в Microsoft: при нажатии кнопки отправки ваш отзыв будет использован для улучшения продуктов и услуг Microsoft.Политика конфиденциальности.

Представлять на рассмотрение

Определение

Важный

Некоторая информация относится к предварительному выпуску продукта, который может быть существенно изменен перед его выпуском. Microsoft не дает никаких явных или подразумеваемых гарантий в отношении представленной здесь информации.

Представляет один вектор указанного числового типа, подходящий для низкоуровневой оптимизации параллельных алгоритмов.

В этой статье

  универсальный <имя типа T>
 где T : класс общедоступных значений Vector : IEquatable>, IFormattable  
  public struct Vector : IEquatable>, IFormattable где T : struct  
  открытая только для чтения структура Vector : IEquatable>, IFormattable где T : struct  
  тип Vector<'T (требуется 'T : struct)> = struct
    интерфейс IFormattable  
  Вектор общественной структуры (из T)
Реализует IEquatable (из вектора (из T)), IFormattable  
Параметры типа
Т

Векторный тип. T может быть любым примитивным числовым типом.

Наследство
Инструменты

Примечания

Vector — это неизменяемая структура, представляющая один вектор указанного числового типа. Количество экземпляров Vector фиксировано, но его верхний предел зависит от регистра ЦП. Он предназначен для использования в качестве строительного блока для векторизации больших алгоритмов и поэтому не может использоваться напрямую как вектор произвольной длины или тензор.

Структура Vector обеспечивает поддержку аппаратного ускорения.

Термин примитивный числовой тип данных в этой статье относится к числовым типам данных, которые напрямую поддерживаются ЦП и имеют инструкции, которые могут манипулировать этими типами данных. В следующей таблице показано, какая комбинация примитивных числовых данных и операций использует встроенные инструкции для более быстрого выполнения:

Примитивный тип + - * /
сбайт Да Да
байт Да Да
короткий Да Да Да
шорт Да Да
внутр. Да Да Да
Да Да
длинный Да Да
улонг Да Да
поплавок Да Да Да Да
двойной Да Да Да Да

Конструкторы

Характеристики

Считать

Возвращает количество элементов, хранящихся в векторе.

Пункт[Int32]

Получает элемент по указанному индексу.

Один

Возвращает вектор, содержащий все единицы.

Нуль

Возвращает вектор, содержащий все нули.

Методы

Копировать в (диапазон <байт>)

Копирует вектор в заданный Span.

Копировать в (Span)

Копирует вектор в указанный диапазон. .

Копировать в (Т [])

Копирует экземпляр вектора в указанный целевой массив.

Копировать в (T [], Int32)

Копирует экземпляр вектора в указанный целевой массив, начиная с указанной позиции индекса.

Равно(Объект)

Возвращает значение, указывающее, равен ли этот экземпляр указанному объекту.

Равно(Вектор)

Возвращает значение, указывающее, равен ли этот экземпляр указанному вектору.

ПолучитьHashCode()

Возвращает хэш-код для этого экземпляра.

Нанизывать()

Возвращает строковое представление этого вектора, используя форматирование по умолчанию.

ToString(Строка)

Возвращает строковое представление этого вектора, используя указанную строку формата для форматирования отдельных элементов.

ToString(Строка, IFormatProvider)

Возвращает строковое представление этого вектора, используя указанную строку формата для форматирования отдельных элементов и указанный поставщик формата для определения форматирования, зависящего от языка и региональных параметров.

TryCopyTo(Span)

Попытки скопировать вектор в указанный диапазон байтов.

TryCopyTo(Span)

Попытки скопировать вектор в заданный Span.

Операторы

Сложение (Вектор, Вектор)

Складывает два вектора вместе.

ПобитовоеИ(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, выполняя побитовую операцию и над каждым из элементов двух векторов.

ПобитовоеИли(Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, выполняя побитовую операцию или над каждым из элементов в двух векторах.

Деление(Вектор, Вектор)

Делит первый вектор на второй.

Равенство (Вектор, Вектор)

Возвращает значение, указывающее, равны ли все пары элементов в двух заданных векторах.

ExclusiveOr(Vector, Vector)

Возвращает новый вектор, выполняя побитовую операцию XOr над каждым из элементов в двух векторах.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в вектор типа Byte.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в вектор типа Double.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в вектор типа Int16.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в вектор типа Int32.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в вектор типа Int64.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты исходного вектора в вектор целых чисел исходного размера.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в вектор типа SByte.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в вектор типа Single.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в вектор типа UInt16.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты указанного вектора в вектор типа UInt32.

Явный (Vector в Vector)

Повторно интерпретирует биты указанного вектора в вектор типа UInt64.

Явный (Vector в Vector)

Переинтерпретирует биты исходного вектора в вектор целых чисел без знака исходного размера.

Неравенство (Вектор, Вектор)

Возвращает значение, указывающее, равны ли какие-либо отдельные пары элементов в указанных векторах.

Умножить(T, Вектор)

Умножает вектор на заданное скалярное значение.

Умножить (Вектор , T)

Умножает вектор на заданное скалярное значение.

Умножить (Вектор, Вектор)

Возвращает новый вектор, значения которого являются произведением каждой пары элементов в двух заданных векторах.

Дополнение к единицам (Vector)

Возвращает новый вектор, элементы которого получены путем взятия дополнения до единицы элементов заданного вектора.

Вычитание (Вектор, Вектор)

Вычитает второй вектор из первого.

Унарное отрицание (вектор)

Отменяет заданный вектор.

Методы расширения

Относится к

Разработка комплексной лентивирусной векторной системы на основе оригинального TetR для простого создания клеточных линий Tet-ON

Лентивирусные векторы (LV) считаются одним из наиболее перспективных средств для эффективной доставки генетической информации для фундаментальных исследований и подходов к генной терапии.Сочетание LV с системами экспрессии, индуцируемыми лекарственными препаратами, должно обеспечить жесткий контроль экспрессии трансгена с минимальным побочным эффектом на соответствующие клетки-мишени. Новая регулируемая доксициклином система, основанная на исходном репрессоре TetR, была разработана в 1998 г. в качестве альтернативы химерам TetR-VP16 (tTA и rtTA) во избежание вторичных эффектов, связанных с экспрессией трансактиваторных доменов. Однако ранее описанные системы на основе TetR требовали клеточного клонирования и/или отбора антибиотиков чувствительных к тетрациклину клеток для достижения хорошей регуляции.В настоящей рукописи мы сконструировали двойную систему Tet-ON на основе двух лентивирусных векторов, один из которых экспрессирует TetR через промотор вируса, формирующего фокус селезенки (SFFV) (STetR), а второй экспрессирует eGFP через регулируемый промотор CMV-TetO (CTetOE). ). Используя эти векторы, мы продемонстрировали, что репрессор TetR, в отличие от обратного трансактиватора (rtTA), может экспрессироваться в избытке, чтобы связывать и модулировать большое количество оперонов TetO. Мы также показали, что эта двойная векторная система может генерировать регулируемые объемные клеточные линии (экспрессирующие высокие уровни TetR), которые способны модулировать экспрессию трансгена либо путем изменения концентрации доксициклина, либо путем изменения количества векторных геномов CTetOE на клетку.Основываясь на этих результатах, мы разработали новый универсальный лентивирусный вектор (CEST), управляющий экспрессией TetR через промотор SFFV и экспрессией eGFP через чувствительный к доксициклину оперон CMV-TetO. Этот вектор эффективно продуцировал регулируемые Tet-ON иммортализованные (293T) и первичные (мезенхимальные стволовые клетки человека и первичные фибробласты человека) клетки. Массовые чувствительные к доксициклину клеточные линии экспрессируют высокие уровни трансгена с низким количеством доксициклина и фенотипически неотличимы от родительских клеток.

Преобразование матрицы в вектор в R (3 примера)

 

В этой статье я покажу, как переключиться с матричного на векторный формат на языке программирования R.

Статья состоит из трех примеров преобразования матриц. Если быть точнее, то в статье таких блоков контента:

Вот как это сделать:

 

Представление примеров данных

Во-первых, мы должны построить несколько примеров данных:

 my_mat <- matrix(11:30, nrow = 4) # Создать пример матрицы
my_mat # Распечатать пример матрицы
# [,1] [,2] [,3] [,4] [,5]
# [1,] 11 15 19 23 27
# [2,] 12 16 20 24 28
# [3,] 13 17 21 25 29
# [4,] 14 18 22 26 30 

my_mat <- matrix(11:30, nrow = 4) # Создать пример матрицы my_mat # Распечатать пример матрицы # [,1] [,2] [,3] [,4] [,5] # [1,] 11 15 19 23 27 # [2,] 12 16 20 24 28 # [3,] 13 17 21 25 29 # [4,] 14 18 22 26 30

Предыдущий вывод консоли RStudio показывает структуру данных нашего примера — это матрица с четырьмя строками и пятью столбцами.Все значения в матрице числовые.

 

Пример 1. Преобразование матрицы в вектор с помощью функции c()

В примере 1 я покажу, как преобразовать матрицу в одномерный вектор с помощью функции c():

 c(my_mat) # Применение функции c
# 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

c(my_mat) # Применение функции c # 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

Как видите, результат предыдущего кода R представляет собой простой вектор в диапазоне от 11 до 30.

 

Пример 2. Преобразование матрицы в вектор с помощью функции as.vector()

В качестве альтернативы функции c() (как показано в примере 1) мы также можем использовать функцию as.vector:

 as.vector(my_mat) # Применение функции as.vector
# 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

as.vector(my_mat) # Применение функции as.vector # 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30

Результат точно такой же, как в примере 1.

 

Пример 3. Преобразование матрицы в вектор по строкам с использованием функций t() и as.vector()

Пока что мы преобразовали нашу матрицу по столбцам. Однако также возможно преобразовать матрицу в одномерный вектор по строкам.

Следующий программный код R объясняет, как это сделать в R с помощью функций t и as.vector:

 as.vector(t(my_mat)) # Применение функций t и as.vector
# 11 15 19 23 27 12 16 20 24 28 13 17 21 25 29 14 18 22 26 30 

as.vector(t(my_mat)) # Применение функций t и as.vector # 11 15 19 23 27 12 16 20 24 28 13 17 21 25 29 14 18 22 26 30

Предыдущий вывод содержит строку № 1 первой, строку № 2 второй и так далее…

 

Видео, дополнительные ресурсы и резюме

Хотите узнать больше о матрицах и массивах? Тогда вы можете посмотреть следующее видео моего канала YouTube. Я объясняю содержание настоящего урока в видео.

 

Чтобы воспроизвести это видео, примите файлы cookie YouTube. Принимая это, вы получаете доступ к контенту YouTube, службы, предоставляемой сторонней третьей стороной.

Политика конфиденциальности YouTube

Если вы примете это уведомление, ваш выбор будет сохранен, и страница обновится.

Принять контент YouTube

 

Кроме того, вы можете прочитать соответствующие статьи на моей домашней странице. Я опубликовал несколько статей по связанным темам, таким как матрицы, списки, преобразование данных и векторы.

 

В этой статье вы узнали, как преобразовать и векторизовать матрицу в векторный объект в программировании на R. Дайте мне знать в комментариях, если у вас есть дополнительные вопросы.

 

/* Добавьте свои собственные переопределения стиля формы MailChimp в таблицу стилей вашего сайта или в этот блок стилей.
Мы рекомендуем переместить этот блок и предыдущую ссылку CSS в HEAD вашего HTML-файла. */
]]>

Основы традиционного клонирования | Thermo Fisher Scientific

Традиционное клонирование основано на методах рекомбинантной ДНК, которые начинаются с подготовки вектора для получения вставки ДНК путем расщепления каждой из них рестрикционными ферментами.Затем расщепленные фрагменты соединяются ферментом, называемым лигазой, в процессе, известном как лигирование, с образованием нового вектора, способного экспрессировать интересующий ген. Это может быть самый простой и самый старый метод традиционного клонирования, который заложил основу для разработки исследователями новых методов клонирования, таких как клонирование ТА, клонирование ТОРО, ПЦР-клонирование, независимое от лигирования клонирование и сборка генов, которые используют уникальные характеристики других модифицирующих ферментов.

Общий рабочий процесс традиционного клонирования включает следующие этапы (рис. 1):

Рис. 1.Традиционный рабочий процесс клонирования.

Подготовка вектора

Векторы, используемые в традиционных методах клонирования, основаны на плазмидах, представляющих собой двухцепочечные кольцевые ДНК, которые реплицируются внутри бактерий независимо от геномной ДНК. Все клонирующие векторы на основе плазмид содержат ряд важных элементов, в том числе бактериальный источник репликации для эффективного размножения в бактериальной клетке-хозяине; один сайт (сайты) рестрикционных ферментов или, чаще, сайт множественного клонирования (MCS), который содержит ряд сайтов рестрикционных ферментов, что позволяет легко добавлять интересующую вставку; и маркер (т.g., устойчивость к антибиотикам) для отбора бактерий после успешного поглощения вектора.

В некоторых векторах MCS находится внутри гена, который служит маркером и позволяет проводить скрининг клонов, в которых вставка была успешно сплайсирована. Например, вектор pUC18 экспрессирует ген lacZ α, кодирующий альфа-пептид бета-галактозидазы, который в сочетании с X-gal позволяет проводить селекцию по цвету бактериальных колоний, образующихся после клонирования (узнайте больше о сине-белой селекции в скрининге колоний). ).

Рисунок 2. Карта pUC18 с ее MCS.

Первым шагом в подготовке вектора для традиционного клонирования является создание сайта вставки путем рестрикционного расщепления. Выбор рестрикционных ферментов зависит от наличия и расположения их последовательностей распознавания на векторе и вставке, а также от их совместимости для лигирования. Сайты рестрикции векторов можно найти на векторной карте или нанести на карту с помощью бесплатных онлайн-инструментов, таких как RestrictionMapper.MCS, если она доступна, часто является первым выбором для вставки, поскольку область специально предназначена для клонирования.

После рестрикционного расщепления может потребоваться дефосфорилирование вектора для предотвращения самолигирования, особенно если концы, полученные в результате расщепления вектора, являются совместимыми или тупыми. При дефосфорилировании фермент щелочная фосфатаза удаляет 5'-фосфатные группы на концах. Это предотвращает самолигирование вектора, поскольку для ферментативной лигазы требуется как 5'-фосфат, так и 3'-ОН для соединения двух концов при рециркуляции вектора (см. Лигирование).(Примечание к приложению: дефосфорилирование)

Дефосфорилирование вектора важно для снижения фона и облегчения вставки желаемого фрагмента в вектор. Как самолигирующиеся векторные молекулы, так и векторные молекулы, несущие вставку, могут поглощаться бактериями во время трансформации и придавать этим клеткам одинаковую устойчивость к антибиотикам (см. Скрининг колоний и Рисунок 6 ). Это создаст более высокий фон нежелательных колоний, если вектор не дефосфорилирован.

Может потребоваться затупление концов вектора в зависимости от используемых рестрикционных ферментов. Очистка желаемых фрагментов также рекомендуется для успешного лигирования.

(сверху)

Подготовка вставки

Источником вставки для клонирования может быть геномная ДНК, часть другой плазмиды или линейный фрагмент ДНК. Независимо от типа исходной ДНК обычным первым этапом подготовки вставки является проведение рестрикционного расщепления для создания совместимых концов для последующего сплайсинга в вектор.

Как и при приготовлении вектора, выбирают рестрикционные ферменты, подходящие для клонирования вставки в вектор. Одной из самых популярных стратегий является выполнение двойного дайджеста как вставки, так и вектора для направленного клонирования. В следующем примере (фиг. 3А) используются два фермента, которые генерируют несовместимые концы (EcoRI и KpnI). Поскольку концы вектора и вставки могут соединяться только в одной ориентации из-за совместимости (EcoRI с EcoRI, KpnI с KpnI), этот подход позволяет клонировать вставку направленно.(Примечание к приложению: направленное клонирование).

Рисунок 3. Общие стратегии клонирования рестрикционных ферментов. (A) Двойное расщепление вектора и вставки (например, EcoRI и KpnI) для направленного клонирования. (B) Однократное расщепление вектора и вставки двумя отдельными рестрикционными ферментами (например, BamHI и PstI) с последующим расщеплением или полировкой тупых концов. (C) Однократное расщепление вектора и вставки одним и тем же рестрикционным ферментом (например,, BamHI) для клонирования. (D) Однократное расщепление вектора и вставки двумя рестрикционными ферментами с совместимыми концами (например, BamHI и BglII) для клонирования.

При проведении двойного расщепления крайне важно, чтобы реакционный буфер и условия были оптимальными для обоих ферментов; поэтому для обеспечения успеха следует внимательно следовать рекомендациям производителей для установок реакции двойного переваривания. Некоторые ферменты рестрикции предназначены для полного расщепления несколькими ферментами в одном буфере, что упрощает процесс и экономит время.

В случаях, когда подходящие рестриктазы недоступны, концы ДНК, созданные выбранными рестриктазами, могут быть затуплены (или «полированы») для клонирования. Затупление изменит исходные последовательности вокруг концов ДНК; это может вызвать сдвиг рамки считывания в области трансляции гена или нарушение регуляторной области гена. Кроме того, лигирование ДНК с тупыми концами, как правило, более сложно и менее эффективно, чем с когезивными («липкими») концами (рис. 3B) .

В некоторых случаях может быть выбран один фермент рестрикции, который разрезает ДНК как вставки, так и вектора, создавая комплементарные концы для лигирования (рис. 3C) . Этот метод обычно используется при клонировании геномной ДНК.

В ситуациях, когда невозможно использовать один фермент рестрикции, в качестве альтернативы можно рассматривать пару ферментов, которые имеют разные последовательности распознавания, но генерируют совместимые выступы. Например, BamHI распознает 5'-G↓GATCC-3', а BglII распознает 5'-A↓GATCC-3'; оба генерируют выступы 5'-GATC, которые можно соединить в реакции лигирования.Обратите внимание, однако, что ни один сайт узнавания не восстанавливается после лигирования в этом случае (рис. 3D) .

Обычно используемые ферменты для создания тупых концов представляют собой большой («Кленоу») фрагмент ДНК-полимеразы I и ДНК-полимеразу T4. Выбор полимеразы зависит от того, образует ли рестрикционный фермент 3'- или 5'-липкий конец. В случае 3'-выступов (например, тех, которые генерируются KpnI), предпочтительной является ДНК-полимераза Т4, поскольку она обладает более сильной экзонуклеазной активностью от 3' до 5', чем у Кленова.В этом сценарии 3'-выступ переваривается или «пережевывается» ДНК-полимеразой Т4. Для 5'-выступов (например, созданных EcoRI) можно использовать ДНК-полимеразу Кленова или Т4 для заполнения выступов за счет их полимеразной активности от 5' до 3'. В некоторых случаях нуклеаза бобов мунг или нуклеаза S1, добавленные в избытке, могут быть использованы для обрезки выступов одноцепочечной ДНК за счет их экзонуклеазной активности от 5' до 3' на одноцепочечной ДНК (рис. 4) .

Рисунок 4.Ферментативное расщепление для получения тупых концов из выступов, образующихся при рестрикционном расщеплении.

После рестрикционного расщепления вставки и вектора (и последующего затупления и дефосфорилирования, если оно выполняется) нужные фрагменты можно очистить, поместив образцы на агарозный гель и вырезав интересующие фрагменты. Гель-электрофорез также удаляет ферменты и соли, которые присутствовали в реакциях пищеварения. В продаже имеются наборы для очистки геля, обеспечивающие эффективный рабочий процесс, надежные результаты и высокую производительность.Наборы основаны на процедурах, в которых используется хаотропный реагент и нагревание для разжижения геля, после чего фрагменты очищаются с использованием колонок с силикагелем или магнитных шариков. Для мягкого и эффективного выделения длинных фрагментов ДНК (например, >10 т.п.н.) можно использовать низкоплавкий гель в сочетании с ферментом агаразой, который разрушает агарозную матрицу. Традиционным методом выделения нуклеиновых кислот из солюбилизированного геля является экстракция фенолом/хлороформом с последующим осаждением фрагментов этанолом.Однако экстракция фенолом/хлороформом может привести к более низкому выходу и уносу фенола, что может повлиять на дальнейшие эксперименты. Извлеченная ДНК должна быть очень чистой для успешного лигирования. Простейшим методом оценки чистоты является измерение ее поглощения: чистая ДНК имеет соотношение А 260 / А 280 > 1,8 и отношение А 260 / А 230 примерно 2,0.

Что такое коэффициент чистоты при измерении поглощения ДНК?

Лигирование

После получения интересующих фрагментов можно провести реакцию лигирования для соединения вставки и вектора.Наиболее распространенным ферментом, используемым для лигирования, является ДНК-лигаза Т4, которая связывает концы ДНК между 5'-фосфатной и 3'-ОН-группами. Для ДНК-лигазы Т4 требуются АТФ, ДТТ и Mg 2+ , которые обычно поставляются в реакционном буфере (фиг. 5) . Чтобы улучшить результат лигирования, общая рекомендация состоит в том, чтобы настроить несколько реакций с различными молярными соотношениями вставка:вектор, обычно в диапазоне от 1:1 до 5:1. (Загрузите приложение CloningBench, чтобы получить доступ к удобным инструментам и калькуляторам, включая калькулятор векторов для вставки молярных отношений.) Для менее эффективного лигирования, например, фрагментов ДНК с тупыми концами, часто рекомендуется добавление инертных макромолекул, таких как полиэтиленгликоль (ПЭГ), для увеличения эффективной концентрации компонентов реакции и, таким образом, повышения эффективности лигирования.

Рис. 5. Реакция ДНК-лигазы Т4.

Температура реакции может варьироваться от 14°C до 25°C (комнатная температура), а время реакции от 10 минут до 16 часов (или в течение ночи), в зависимости от типа фрагментов ДНК и желаемого выхода.Как правило, более высокая температура реакции требует меньше времени, но может привести к более низкому выходу. Некоторые имеющиеся в продаже наборы для лигирования предназначены для полного лигирования за 15 минут при комнатной температуре. (Примечание к приложению: лигирование).

Лигированная смесь может быть использована непосредственно для трансформации химически компетентных клеток, но может потребовать очистки перед трансформацией электрокомпетентных клеток. Если в реакции лигирования использовался ПЭГ, не рекомендуется инактивировать лигазу нагреванием после реакции, так как это может снизить эффективность трансформации.

(сверху)

Трансформация

Трансформация — это естественный процесс, при котором бактериальные клетки поглощают чужеродную ДНК с низкой частотой. В приложениях молекулярной биологии этот процесс усиливается и используется для размножения плазмид внутри бактерий, которые были сделаны «компетентными» (пористыми) для поглощения ДНК.

Коммерчески доступные компетентные клетки для эффективной и надежной трансформации. Наиболее распространенным подходом к подготовке бактерий к трансформации является обработка бактериальных клеток логарифмической фазы хлоридом кальция.Когда химически компетентные клетки смешивают с ДНК из реакции лигирования, а затем подвергают тепловому шоку при 42°C, часть ДНК поглощается бактериальными клетками, где она начинает реплицироваться.

Основы трансформации компетентных клеток

Доступны различные штаммы компетентных клеток, и выбор основан на экспериментальных целях и последующих применениях. Например, для проведения скрининга «синий/белый» необходимо выбрать бактериальный штамм с мутацией lacZ ( lacZ ΔM15).Если эксперимент требует расщепления чувствительными к метилированию рестрикционными ферментами, плазмиду следует размножать в бактериальном штамме dcm / dam . Для экспрессии белка штамм должен обеспечивать стабильность и трансляцию мРНК, а также высокую индукцию экспрессии рекомбинантного белка. (Подробнее: Грамотный выбор соты по приложениям).

Кроме того, важное значение имеет эффективность трансформации компетентных клеток.Производители указывают эффективность трансформации компетентных клеток в колониеобразующих единицах на микрограмм ДНК (КОЕ/мкг), как правило, в пределах от 1 х 10 6 до 1 х 10 9 КОЕ/мкг. В более сложных стратегиях лигирования и клонирования выбор клеток с наивысшей эффективностью трансформации может значительно повысить вероятность получения желаемых клонов.

Другим методом трансформации бактериальных клеток является электропорация. В этом методе электрокомпетентные бактериальные клетки и лигированные плазмиды обрабатывают электрическим током, который создает временные поры в мембране бактериальной клетки для поглощения ДНК.

Трансформированные бактерии (после теплового шока или электропорации) затем высевают на чашку с агаром с соответствующим антибиотиком и подвергают скринингу (сине-белым скринингом или другим методом) на наличие колоний, несущих нужную плазмиду со вставкой.

(сверху)

Скрининг колоний

Реакция трансформации включает смесь клеток без вектора, вектор без вставки, только вставку и успешно лигированные вектор и вставку. Бактерии без вектора не имеют гена устойчивости к антибиотикам и не будут расти, тогда как бактерии, трансформированные вектором (со вставкой или без нее), выживают благодаря экспрессированному гену устойчивости к антибиотикам (Фигура 6) .Таким образом, устойчивость к антибиотикам позволяет осуществлять отбор на поглощение интактной плазмиды.

Рис. 6. Смесь бактерий после трансформации и их фенотипы (рост/отсутствие роста/бело-голубой) на чашке со средой для селекции антибиотиков. Смесь для лигирования может включать неудачные продукты (нелигированная вставка, нелигированный вектор и вектор без вставки/пустой), а также желательные/нежелательные векторы, несущие вставку. Нежелательная вставка может содержать неправильную, мутированную или укороченную последовательность.

Чтобы определить, содержат ли трансформированные колонии вставку, можно использовать ряд методов, наиболее распространенными из которых являются «бело-голубой» скрининг и положительный отбор. Сине-белый скрининг основан на трансформации бактериального штамма, который экспрессирует мутантный ген lacZ ( lacZ ΔM15), который может быть дополнен альфа-пептидом бета-галактозидазы, закодированным на векторе ( альфа-комплементация ). Трансформированные клетки высевают на ростовую среду, содержащую индуктор транскрипции для экспрессии lacZ , IPTG, и хромогенный субстрат LacZ, X-gal (5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-галактопиранозид). .При сине-белом скрининге LacZ будет гидролизовать X-gal с образованием синего красителя и, следовательно, синей колонии. Когда вставка ДНК разрушает кодируемый вектором ген lacZα, функциональный LacZ не образуется, и трансформированные колонии становятся белыми (рис. 7) .

Рис. 7. Цветообразование за счет активности бета-галактозидазы (β-gal) на X-gal и ее применение для синего/белого скрининга.

Другим популярным методом скрининга является позитивная селекция, при которой летальный для бактериального хозяина ген находится в MCS вектора.Успешное лигирование вставки в летальный ген в MCS предотвращает его экспрессию, позволяя выжить только трансформированным клеткам с векторами, несущими вставку.

Чтобы более точно идентифицировать или охарактеризовать вставку, необходимо провести дальнейший анализ трансформированных колоний, поскольку результаты сине-белого скрининга и положительного отбора могут предоставить информацию только о том, присутствует ли вставка или нет. Один из основных подходов заключается в проведении рестрикционного расщепления вектора, выделенного из положительных или белых колоний, и изучении полученных в результате образцов полос при гель-электрофорезе.Необходимо тщательно выбирать ферменты рестрикции, и их можно использовать для подтверждения размера и ориентации вставки.

Наличие ДНК-вставки также можно определить с помощью метода, называемого ПЦР колоний, при котором небольшая часть колоний анализируется с помощью ПЦР. Для этого метода требуются праймеры ПЦР, специфичные для вставки, фланкирующих векторных последовательностей или и того, и другого, чтобы обнаружить вставку. Для определения ориентации вставки можно сконструировать набор праймеров, которые могут обнаруживать вектор и вставку в одной реакции (фиг. 8) .(Примечание к приложению: ПЦР колоний).

Рис. 8. Возможные подходы к дизайну праймеров для ПЦР-скрининга колоний. Праймеры, специфичные для вставки, показаны красными стрелками, а праймеры, специфичные для вектора, — зелеными. Показан схематический анализ гель-электрофореза продуктов ПЦР колоний из пустого вектора (обозначенного «1») и векторов, несущих вставку (обозначенных «2» и «3»).

Наиболее точным способом идентификации вставки является секвенирование по Сэнгеру (также известное как дидезокси-секвенирование).Хотя это хороший способ подтвердить наличие и точную последовательность вставки, этот подход может быть трудоемким и дорогостоящим, в зависимости от количества колоний, подлежащих скринингу.

После идентификации клонов с правильной вставкой они готовы к дальнейшим экспериментам.

(Вверху)

Addgene: Protocol - Как лигировать плазмидную ДНК


Справочная информация

Последним этапом конструирования рекомбинантной плазмиды является соединение ДНК-вставки (гена или интересующего фрагмента) с совместимо расщепленной векторной основой.Это достигается путем ковалентного соединения сахарного остова двух фрагментов ДНК. Эта реакция, называемая лигированием, осуществляется ферментом ДНК-лигазы Т4. ДНК-лигаза катализирует образование ковалентных фосфодиэфирных связей, которые навсегда соединяют нуклеотиды вместе. После лигирования ДНК-вставка физически прикрепляется к остову, и полная плазмида может быть трансформирована в бактериальные клетки для размножения.

В большинстве реакций лигирования участвуют фрагменты ДНК, которые были получены в результате расщепления рестрикционными ферментами.Большинство рестрикционных ферментов расщепляют ДНК асимметрично по своей последовательности распознавания, что приводит к образованию одноцепочечного выступающего конца на расщепленном конце фрагмента ДНК. Выступы, называемые «липкими концами», позволяют вектору и вставке связываться друг с другом. Когда липкие концы совместимы, что означает, что выступающие пары оснований на векторе и вставке комплементарны, две части ДНК соединяются и в конечном итоге сливаются в результате реакции лигирования.

В приведенном ниже примере показано лигирование двух липких концов, полученных в результате расщепления EcoRI:

Обычно ученые выбирают два различных фермента для добавления вставки в вектор (один фермент на 5'-конце и другой фермент на 3'-конце).Это гарантирует, что вставка будет добавлена ​​в правильной ориентации, и предотвращает лигирование вектора с самим собой во время процесса лигирования. Если липкие концы с обеих сторон вектора совместимы друг с другом, вектор с гораздо большей вероятностью лигируется сам с собой, а не с желаемой вставкой. Если вы находитесь в такой ситуации, важно обработать расщепленную основу вектора фосфатазой перед проведением реакции лигирования (фосфатаза удаляет 5'-фосфат и, следовательно, предотвращает возможность слияния двух концов вектора с помощью лигазы).

Протокол: стандартная вставка + лигирование векторной ДНК

Прежде чем приступить к самой реакции лигирования, важно определить количество разрезаемой вставки и вектора, которые будут использоваться для реакции лигирования. Объем векторной ДНК и ДНК-вставки, используемых при лигировании, будет варьироваться в зависимости от размера каждой из них и их концентрации. Однако для большинства стандартных клонирований (где вставка меньше вектора) молярное соотношение вставки 3: 1 вектора будет работать очень хорошо. Мы рекомендуем около 100 нг общей ДНК в стандартной реакции лигирования.Используйте калькулятор лигирования, чтобы легко определить, сколько вектора и вставки ДНК нужно использовать.

  1. Смешайте в пробирке для ПЦР или Эппендорфа следующее:
  • Векторная ДНК
  • Вставка ДНК
  • Лигазный буфер (1 мкл/10 мкл реакции для 10-кратного буфера и 2 мкл/10 мкл реакции для 5-кратного буфера)
  • 0,5–1 мкл ДНК-лигазы T4
  • H 2 O до 10 мкл

Примечание: Если концентрации ДНК настолько малы, что вы не можете получить все 100 нг ДНК, буфера и лигазы в реакционной смеси объемом 10 мкл, масштабируйте размер реакции по мере необходимости, обязательно увеличивая количество буфера пропорционально.1 мкл лигазы должно быть достаточно для более крупных реакций лигирования.

Примечание: Поскольку лигазный буфер содержит АТФ, который разлагается при циклах замораживания/оттаивания, рекомендуется взять свежую пробирку, разморозить ее один раз и разделить на аликвоты отдельные пробирки по 5, 10 или 20 мкл для хранения при -20 °С. Всякий раз, когда в будущем вам потребуется установить лигирование, вы можете разморозить новую пробирку, которая, как вы знаете, размораживалась только один раз до этого.

Примечание: Всегда выполняйте контроль.Подробнее см. Советы и часто задаваемые вопросы ниже.

Примечание: Попробуйте разные соотношения вектора и вставки, чтобы оптимизировать реакцию лигирования. Подробнее об оптимизации см. в разделе Советы и часто задаваемые вопросы ниже.


  • Инкубировать при комнатной температуре в течение 2 часов или при 16°C в течение ночи (следуя инструкциям производителя).
  • Примечание: Для многих реакций лигирования, особенно при использовании лигазы «высокой концентрации», достаточно 5 минут при комнатной температуре.Для более сложных лигирования (таких как лигирование отожженных олигонуклеотидов) эффективность лигирования можно повысить путем инкубации при 37°C.


  • Приступить к бактериальной трансформации.
  • Советы и часто задаваемые вопросы

    Контроль: При лигировании ВСЕГДА следует использовать только вектор + контроль лигазы . Это позволит вам убедиться, что вектор был полностью переварен и если обработан фосфатазой, то обработка фосфатазой сработала.Этот контроль, в принципе, должен быть свободен от колоний, но реальность такова, что он будет иметь некоторую предысторию. Что вы хотите увидеть, так это то, что лигирование вашего вектора + вставки имеет гораздо больше колоний, чем лигирование только вашего вектора.

    Приветствуются дополнительные элементы управления, но они могут потребоваться только для устранения неполадок, связанных с неудачным связыванием. В следующей таблице указаны различные элементы управления:

    Управление Лигаза Интерпретация
    Неразрезанный вектор - Проверяет жизнеспособность компетентных клеток и проверяет устойчивость плазмиды к антибиотикам
    Вектор разреза - Фон из-за неразрезанного вектора
    Вектор разреза + Фон из-за рециркуляции вектора - наиболее полезен для вектора, обработанного фосфатазой
    Вставка или вода + Любые колонии указывают на заражение интактной плазмидой в реагентах для лигирования или трансформации

    Оптимизация соотношения вектор:вставка: Хотя обычно достаточно соотношения вставки и вектора 3:1, можно оптимизировать количество вставки и вектора для повышения эффективности лигирования в ситуациях, когда соотношение 3:1 не работает или при выполнении более сложного клонирования.В то время как 3:1 даст вам примерное представление о генах и векторах среднего размера, это соотношение на самом деле предназначено для обозначения молярности концов ДНК, доступных для лигирования. Проще говоря, у любого фрагмента ДНК есть только два конца, независимо от его длины, и поэтому нам нужно отрегулировать количество ДНК, используемой при лигировании, в зависимости от длины ДНК, чтобы получить правильное соотношение 3 доступных вставить концы для каждого доступного конца вектора. Калькуляторы лигирования легко найти в сети. Просто введите концентрацию, длину вашей вставки и вектора, а также желаемое соотношение, и он точно скажет вам, сколько каждого из них использовать.

    Справочная страница   | Топ   | Индекс

    .

    alexxlab

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.